JAK1抑制剂Golidocitinib增强DLL3靶向CAR-T细胞疗法对小细胞肺癌的治疗效力

《Pharmacological Research》：The JAK1 Inhibitor Golidocitinib Boosts Therapeutic Potency of DLL3-Targeted CAR-T Therapy for Small Cell Lung Cancer

　　

小细胞肺癌（SCLC）是一种侵袭性恶性肿瘤，有效治疗选择有限。DLL3靶向的CAR-T细胞疗法显示出有前景的抗肿瘤潜力，但通常受到T细胞耗竭的限制，这损害了其长期疗效。在本研究中，研究人员发现golidocitinib，一种高度选择性的JAK1抑制剂，通过抑制STAT3磷酸化和调节凋亡相关基因，在体外诱导SCLC细胞凋亡。它还降低了抗DLL3 CAR-T细胞中耗竭标志物的表达，促进了记忆T细胞表型的形成，并在体外和体内增强了CAR-T细胞的持久性。当与抗DLL3 CAR-T疗法联合使用时，golidocitinib在体外细胞毒性测定和体内模型中均显著增强了抗肿瘤疗效，且无明显器官毒性。这些发现共同证明了golidocitinib的双重抗肿瘤效应，从而为SCLC治疗提供了一种新的有前景的策略。

小细胞肺癌（SCLC）是一种高度恶性的神经内分泌癌，占肺癌的15%~20%，具有快速增殖、早期转移和高复发率的特点，现有治疗手段（如化疗联合PD-L1抑制剂）远期生存率低，急需新策略。DLL3（Delta样配体3）在SCLC中特异性高表达，是理想靶点，但DLL3靶向CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）疗法常因T细胞耗竭而持久性不足。JAK-STAT（Janus激酶-信号转导及转录激活因子）通路在SCLC中异常激活，参与肿瘤生存和T细胞功能调节。为此，研究人员探索了JAK1选择性抑制剂golidocitinib（戈利替尼）联合抗DLL3 CAR-T治疗SCLC的潜力。该研究通过体外细胞实验、动物模型及转录组分析，证实golidocitinib既可直接抑制SCLC恶性行为（通过阻断JAK1/STAT3通路），又能减轻CAR-T细胞耗竭、促进记忆T细胞分化，增强其持久性和抗肿瘤活性。联合治疗在皮下和转移瘤模型中均表现出协同抑瘤效果，且无明显毒性。该研究发表于《Pharmacological Research》，为SCLC治疗提供了新策略。

关键技术方法包括：使用来自中国科学院细胞库的SCLC细胞系（DMS53、NCI-H82、NCI-H446等）及来自上海赛立生物的健康供体（C1784-L、E2181-L、E2726-L）外周血单个核细胞（PBMCs）制备CAR-T细胞；通过慢病毒转导构建抗DLL3 CAR-T细胞；采用流式细胞术检测细胞表型、凋亡和耗竭标志物；Western blot检测蛋白磷酸化；RNA-seq（RNA测序）分析转录组变化；CCK-8、克隆形成、软琼脂、划痕和Transwell实验评估功能；体内使用B-NDG小鼠建立皮下异种移植和尾静脉转移模型，口服灌胃golidocitinib（20 mg/kg），静脉注射CAR-T细胞，监测肿瘤体积和生物发光成像。

研究结果：
1. **JAK1抑制剂golidocitinib在体外诱导小细胞肺癌细胞凋亡**：通过IC₅₀测定、Western blot和流式细胞术，发现golidocitinib抑制STAT3磷酸化，上调cleaved-caspase3，激活caspase-3依赖的凋亡，且该效应依赖于JAK1/STAT3通路（siRNA敲低验证）。
2. **Golidocitinib在体外抑制SCLC细胞的致瘤性和转移**：通过CCK-8、克隆形成、软琼脂、划痕和Transwell实验，证明golidocitinib显著抑制DMS53、NCI-H446和NCI-H82细胞的增殖、集落形成、锚定非依赖性生长、迁移和侵袭，且不引起SCLC亚型（SCLC-A/N/P/I）的普遍转换。
3. **Golidocitinib减轻抗DLL3 CAR-T细胞的耗竭并促进记忆分化**：流式细胞术和RT-qPCR显示，golidocitinib降低PD-1和TIM-3表达，减少CAR-T细胞凋亡，增加效应记忆T细胞（Tem，CD62L^-CD45RA^-）和中央记忆T细胞（Tcm，CD62L⁺CD45RA^-）比例。JAK1敲低模拟该效应，而组成型活性STAT3（caSTAT3）过表达部分逆转，证明依赖JAK1-STAT3轴；中和IFN-γ和TNF不影响该调节。
4. **转录组RNA-seq分析揭示golidocitinib对抗DLL3 CAR-T细胞功能的调控**：RNA-seq显示golidocitinib处理组与对照组转录组显著分离（PCA），下调促炎因子（IL6、IL13、IL22）、耗竭相关基因（HAVCR2、LAG3），上调记忆T细胞标志物（TCF7、LEF1、IL7R、SELL）和细胞黏附分子（CD40、CD86、JAML）。GSEA（基因集富集分析）显示细胞黏附、ECM-受体相互作用、Notch信号通路富集，而JAK/STAT、IL-17、p53通路抑制。RT-qPCR验证了关键基因（CISH、HAVCR2、LAG3下调，LEF1、TCF7、SELL、HES1上调）在不同供体中的一致性。
5. **联合golidocitinib和抗DLL3 CAR-T细胞在体外增强抗肿瘤细胞毒性**：体外杀伤实验显示，联合治疗在DLL3高表达（NCI-H82、DMS53）和低表达（NCI-H446）细胞中均增强肿瘤清除，Bliss协同评分显示协同或加性效应。序贯杀伤实验表明联合治疗持续抑制肿瘤，且降低PD-1表达。DLL3敲除和敲低实验证实golidocitinib的固有毒性独立于DLL3，但增强CAR-T功能需DLL3抗原存在。
6. **联合golidocitinib和抗DLL3 CAR-T细胞疗法在体内实现SCLC生长的强效抑制**：DMS53皮下移植瘤模型显示，联合治疗组肿瘤体积和重量显著小于单药组，肿瘤浸润CAR-T细胞比例更高、PD-1表达更低，H&E染色无器官毒性。NCI-H82尾静脉转移模型显示，联合治疗组生物发光信号显著抑制，外周血CAR-T细胞在晚期更多，脾脏中CAR-T细胞比例更高，血清IL-6和IFN-γ持续低水平，无体重下降。

讨论部分总结了golidocitinib的双重作用机制：直接抑制SCLC（通过JAK1-STAT3通路）和增强CAR-T功能（减轻耗竭、促进记忆分化）。与选择性JAK1抑制剂itacitinib类似，golidocitinib不损害CAR-T增殖和持久性，且可能降低细胞因子释放综合征（CRS）风险。研究未涉及性别差异，需后续验证。结论翻译：本研究证实golidocitinib与抗DLL3 CAR-T细胞协同发挥抗SCLC作用，通过阻断JAK1-STAT3通路直接抑制SCLC恶性，并通过减轻耗竭和促进记忆表型分化增强CAR-T细胞功能。该联合策略为SCLC提供了一种新的有前景的治疗途径，为难治复发SCLC患者的临床转化提供了坚实的实验基础。