分子特征与流行率：土耳其锡尔特省山羊群体中绵羊无形体（Anaplasma ovis）和嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）的分子特征与流行率

《Veterinary Medicine and Science》：Molecular Characterization and Prevalence of Anaplasma ovis and Anaplasma phagocytophilum in Goat Population in Siirt Province From Türkiye

　　

无形体病是一种主要影响小反刍动物的蜱传传染病，由于生产力下降和某些情况下的死亡率，导致显著的经济损失。本研究旨在确定土耳其锡尔特省饲养山羊中绵羊无形体（Anaplasma ovis）和嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）感染的分子流行率，并基于主要表面蛋白4（MSP4）基因区域对检测到的分离株进行遗传学特征分析。研究人员于2025年7月至9月期间，随机采集了250只表观健康山羊的样本。A. ovis的总体分子流行率为52%（130/250），而所有筛选动物中均未检测到A. phagocytophilum。在锡尔特省内，A. ovis阳性率与年龄、性别、品种和采样县之间存在显著关联（p < 0.05），感染率最高见于1岁以上山羊（63.6%）、雌性山羊（58.2%）、大马士革山羊（66.7%）以及来自库尔塔兰县（Kurtalan）的山羊（87.1%）。对选定样本的测序分析获得了高质量的MSP4基因序列，与来自伊朗、意大利、巴基斯坦、苏丹、突尼斯和土耳其的参考A. ovis分离株具有100%核苷酸一致性。系统发育分析通过将本研究分离株与参考A. ovis序列聚类，支持了物种水平的鉴定；然而，由于片段长度较短且测序分离株数量有限，对更广泛的进化推断应谨慎解读。本研究的发现提供了土耳其东南部山羊无形体病的最新分子流行病学数据，并强调了MSP4基因作为物种鉴定和系统发育分析可靠分子标记的实用性。这些结果有助于更好地理解A. ovis的流行病学，并可能支持在小反刍动物生产系统中制定有效的控制策略。

**论文解读：土耳其锡尔特省山羊群体中绵羊无形体（Anaplasma ovis）和嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）的分子特征与流行率**

**研究背景**
无形体病（Anaplasmosis）是由α-变形菌纲（α-proteobacteria）、立克次体目（Rickettsiales）、无形体科（Anaplasmataceae）的专性胞内病原体引起的蜱传传染病，主要感染红细胞，也可寄生其他血细胞，通过硬蜱属（Ixodes）、革蜱属（Dermacentor）、扇头蜱属（Rhipicephalus）和花蜱属（Amblyomma）的硬蜱传播。该病在小反刍动物生产中主要由绵羊无形体（Anaplasma ovis）和嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）引起，常呈亚临床经过，但在应激、免疫抑制或合并感染时，可导致贫血、厌食、体重下降、生长迟缓，进而明显降低肉、奶、毛产量，严重时甚至引发死亡。此外，A. phagocytophilum具有人兽共患潜力，增加了公共卫生意义。传统显微镜检查和血清学方法因物种间形态相似和交叉反应，难以准确鉴别，因此基于PCR的高灵敏度分子诊断方法日益重要。目前，主要表面蛋白4（MSP4）基因区域被广泛认可为无形体属物种鉴定和遗传特征分析的可靠分子标记。

在土耳其，绵羊和山羊养殖是畜牧业的重要组成，尤其在东部和东南部安纳托利亚地区，季节性放牧和转场系统为蜱传病原体传播提供了有利生态条件。锡尔特省（Siirt Province）山羊养殖在区域畜牧业中占有重要地位，但关于该地区山羊中无形体感染的分子流行病学信息有限。因此，本研究旨在通过分子方法确定锡尔特省山羊中A. ovis和A. phagocytophilum的感染存在，基于MSP4基因区域对分离株进行遗传特征分析，并提供该地区的最新流行率数据。

**研究内容与结论**
研究人员于2025年7月至9月期间，在土耳其锡尔特省及其县区，采用基于地区的分层抽样方法，从传统养殖条件下随机选取了250只表观健康山羊，包括63只≤1岁和187只>1岁动物，213只雌性和37只雄性，205只本地毛山羊（Hair goat）和45只大马士革山羊（Damascus goat）。样本来自Baykan（40只）、Eruh（18只）、中心区（Centre，97只）、Kurtalan（31只）、Pervari（26只）、?irvan（21只）和Tillo（17只）。通过颈静脉穿刺采集血液于EDTA管中，冷藏运输至实验室，-20℃保存。提取基因组DNA，使用物种特异性引物对A. ovis（扩增347-bp片段）和A. phagocytophilum（扩增849-bp片段）进行PCR扩增。阳性产物进行单向测序，经质量控制和修剪后获得288-bp序列，在NCBI GenBank中进行BLAST比对，并采用Kimura 2-parameter模型（K2+I）和最大似然法（ML）构建系统发育树（1000次bootstrap）。统计使用SPSS 25.0，通过卡方检验和二元逻辑回归分析评估关联性。

**研究结果**

**3.1 分子流行率与统计分析结果**
通过PCR筛查，A. ovis的总体分子流行率为52%（130/250）。A. ovis阳性率与年龄、性别、品种和地区显著相关（p均<0.05）。1岁以上山羊流行率（63.6%）显著高于≤1岁组（17.5%）；雌性（58.2%）显著高于雄性（16.2%）；大马士革山羊（66.7%）显著高于毛山羊（48.8%）；各地区流行率差异显著，Kurtalan县最高（87.1%），?irvan县最低（4.8%）。单变量逻辑回归分析显示，>1岁山羊感染风险是≤1岁组的8.3倍（OR=8.273，p<0.001），雌性是雄性的7.2倍（OR=7.199，p<0.001），大马士革山羊是毛山羊的2.1倍（OR=2.100，p=0.032）。多变量逻辑回归分析中，调整后>1岁组的aOR=13.062（p<0.001），雌性aOR=6.161（p<0.001），大马士革山羊aOR=22.106（p<0.001），Kurtalan县以中心区为参照的aOR=12.529（p<0.001），Pervari、Baykan和Tillo县也显著高于中心区。

**3.2 MSP4基因序列分析**
所有样本中均未检测到A. phagocytophilum的扩增产物。A. ovis特异性的347-bp MSP4基因片段成功扩增，选取4个清晰、特异、高质量的条带进行单向测序。经质量控制和修剪后获得288-bp可靠序列，BLAST分析显示所有序列与参考A. ovis分离株具有100%核苷酸一致性，确认了物种水平鉴定。所得序列提交至GenBank，编号为PX982911–PX982914（分离株命名为TRSiAo01–TRSiAo04）。

**3.3 系统发育分析结果**
基于MSP4基因序列构建的系统发育树显示，本研究获得的A. ovis分离株与来自不同地理区域的参考A. ovis序列（如PQ878028、KY283958等）聚类在同一进化支，并得到高bootstrap值支持。用于比较的其他无形体物种（A. marginale、A. centrale、A. capra）形成独立且区分明显的进化支，以A. phagocytophilum（AY706391）作为外群，确保了可靠的树根。

**讨论与结论**
讨论部分指出，锡尔特省山羊中A. ovis流行率52%与土耳其其他地区（15.1%–71.2%）和国际研究（伊朗63.73%、西班牙91.1%、意大利37%等）结果一致，但存在地区差异。年龄、性别、品种和地区是重要风险因素：>1岁山羊因长期暴露于感染蜱而风险较高；雌性山羊流行率更高，可能与生理或管理因素有关，但本研究未评估繁殖状态；大马士革山羊风险高于毛山羊，可能与环境暴露和蜱接触差异有关，但需谨慎解释；地区间差异（Kurtalan最高，?irvan最低）可能与当地生态和管理因素（如蜱密度、牧场管理）有关。未检测到A. phagocytophilum，与土耳其低流行率数据（0%–66.7%）相符，但阴性结果不能完全排除病原体存在，可能因低水平感染或采样期间无循环。MSP4基因序列的100%一致性证实了物种鉴定的准确性，显示该基因在分子诊断和遗传特征分析中的可靠性。系统发育分析进一步支持了物种水平鉴定。研究局限性包括未收集蜱样本、未评估宿主和农场水平因素（如繁殖状态、杀螨剂使用、牧场管理）、缺乏临床和血液学数据，以及横断面设计无法推断因果关系。未来需开展纵向研究，整合蜱、管理、临床和环境数据。

**结论翻译**
在锡尔特省山羊中检测到A. ovis的高分子流行率，表明该病原体在该地区广泛存在并构成显著感染风险。相比之下，未检测到A. phagocytophilum，提示该物种要么不存在于调查群体中，要么以极低水平循环。这些发现有助于更好地理解锡尔特省山羊无形体病的流行病学结构，并为制定区域特异性控制策略提供了重要基础。然而，建议进行涉及更大样本量、不同季节和潜在媒介的进一步高级分子和流行病学研究，以更全面地阐明该感染在该地区的真实分布。