《Antioxidants》：Protective Effects of Natural Products, Functional Foods, and Probiotics on NSAID-Induced Small Intestinal Injury: A Systematic Review with Mechanistic Considerations of Oxidative Stress and Microbiome Modulation
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喜马拉雅夜花（Oxybaphus himalaicus）Edgew.为传统藏药，用于治疗肾炎与水肿，但其活性成分及肾保护分子机制尚不清楚。研究人员探究了该植物主要成分Boeravinone A（BA）在脂多糖（LPS）诱导急性肾损伤（AKI）中的药理活性与机制
喜马拉雅夜花（Oxybaphus himalaicus）Edgew.为传统藏药，用于治疗肾炎与水肿，但其活性成分及肾保护分子机制尚不清楚。研究人员探究了该植物主要成分Boeravinone A（BA）在脂多糖（LPS）诱导急性肾损伤（AKI）中的药理活性与机制。采用LPS诱导AKI小鼠模型及LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞进行体内外评价。通过活性基蛋白质谱分析（ABPP）鉴定潜在靶点，并行等温滴定量热（ITC）、细胞热位移（CETSA）及药物亲和响应靶标稳定性（DARTS）验证。利用shRNA敲低及虚拟敲除分析靶标功能。BA剂量依赖性地减轻LPS诱导的肾损伤与炎症反应。磷酸甘油酸激酶1（PGK1）被鉴定为BA直接靶标。机制上，BA经PGK1激活Kelch样ECH关联蛋白1–核因子红细胞2相关因子2（Keap1–Nrf2）通路，上调Nqo1等抗氧化酶，减少IL-1β、IL-6等促炎细胞因子。巨噬细胞中PGK1虚拟敲除进一步支持其调控作用。结果表明BA靶向PGK1激活Keap1-Nrf2通路，降低氧化应激与炎症，为喜马拉雅夜花传统用药提供药理依据，BA可作为AKI机制干预候选物。
研究背景与立项依据
急性肾损伤（AKI）以肾功能快速下降为特征，临床高发病率与死亡率并存，现有支持性治疗无法直接干预分子机制，且疗效有限，部分患者进展为慢性肾病。LPS诱导AKI中，固有免疫激活核因子κB（NF-κB）并促进肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-1β等释放，活性氧（ROS）过量生成与炎症形成正反馈。Keap1-Nrf2通路是核心抗氧化防御系统，Nrf2脱离Keap1转位入核启动抗氧化反应元件（ARE）介导的基因转录。磷酸甘油酸激酶1（PGK1）催化1,3-二磷酸甘油酸（1,3-BPG）与3-磷酸甘油酸（3-PG）可逆转换，既往被认为是Nrf2负调控因子，其抑制可致Keap1甲基乙二醛化修饰而激活Nrf2，但分子基础未明。喜马拉雅夜花属藏医“五根”之一，前期总提物改善LPS-AKI，BA为其主要成分具抗炎报道，然其是否贡献肾保护及机制不清。该研究旨在明确BA肾保护作用并阐明PGK1–Keap1–Nrf2轴机制，论文发表于《Antioxidants》。
主要关键技术方法
研究人员构建雄性C57BL/6J小鼠LPS（10 mg/kg）诱导AKI体内队列（设对照、模型、BA低/高剂量10/20 mg/kg、地塞米松5 mg/kg组，n=8），及LPS（1 μg/mL）刺激RAW264.7巨噬细胞体外模型；采用ABPP结合LC-MS/MS初筛靶标，CETSA与DARTS及ITC（KD测定）、分子对接验证BA–PGK1互作；以scTenifoldKnk对LPS下RAW264.7单细胞转录组（GSE207902）做PGK1虚拟敲除并GO富集；慢病毒shRNA稳定敲低Pgk1；并行核质分离Western、免疫荧光、ROS（DCFH-DA）染色、qRT-PCR检测Nrf2下游Nqo1/Gclc/Gclm。
研究结果
3.1 BA减轻LPS-AKI小鼠肾病理损伤与炎症反应
血清肌酐（Cre）、尿素氮（BUN）显示BA回调LPS升高值；H&E见肾小管空泡变性、坏死脱落及炎性浸润，BA减轻之；IHC与肾组织Western示BA下调IL-1β、IL-6、TNF-α。结论：BA体内抗肾损伤并抑炎。
3.2 PGK1被鉴定为BA潜在分子靶标
ABPP质谱锁定PGK1；CETSA示BA提升PGK1热稳定性，DARTS示增强抗Pronase E消化；纯化重组人PGK1经ITC得KD=0.787 μM；对接得分6.06，结合LEU256/GLY238/GLY312。结论：BA直接结合PGK1活性口袋。
3.3 BA激活Keap1-Nrf2通路并增强抗氧化应答
免疫荧光与核质Western示BA促Nrf2核转位；BA逆转LPS致Keap1升/Nrf2降，qRT-PCR示Nfe2l2、Nqo1、Gclc、Gclm回弹。结论：BA在巨噬细胞内激活Nrf2并恢复抗氧化基因转录。
3.4 PGK1虚拟敲除揭示其调控巨噬炎症
scTenifoldKnk虚拟敲除获38个显著上调基因（Il1rn、Hmox1、Ccl2、Ccl7等），GO BP富集于免疫系统过程、防御反应。结论：PGK1缺失重塑炎症相关转录网络，支持其炎症调节节点地位。
3.5 BA经PGK1发挥抗氧化效应
shPgk1敲低后，BA对Nrf2核转位、Keap1-Nrf2及Nqo1/Gclc/Gclm上调、ROS（DCFH-DA绿）降低作用均削弱。结论：PGK1是BA激活Nrf2与抑ROS必要环节。
3.6 BA在AKI小鼠肾组织激活Keap1-Nrf2
肾组织Western印证BA回调Keap1/Nrf2蛋白表达。结论：该轴在体肾组织一致激活。
讨论浓缩
讨论指出喜马拉雅夜花传统治肾炎水肿契合AKI现代病理；BA剂量依赖护肾抑炎，机制为直靶PGK1（KD 0.787 μM）解除其对Nrf2抑制，经由Keap1甲基乙二醛化修饰之外可能的构象干预待深究，恢复Nqo1/Gclc/Gclm及降ROS、IL-1β/IL-6/TNF-α；虚拟敲除佐证PGK1关联Ccl2/Ccl7/Il1rn/Hmox1炎症模块。局限：未在肾小管上皮细胞直证该轴；缺巨噬细胞/肾小管特异Pgk1敲除小鼠在体验证；未做BA类似物构效。意义为藏药现代化提供单分子药理基础，BA可作机制型肾保护先导。
结论部分翻译
本研究证实喜马拉雅夜花主要成分BA通过降低氧化应激与炎症减轻LPS诱导AKI。机制上BA直接作用于PGK1并促进Keap1-Nrf2通路激活，增强抗氧化防御并减少促炎细胞因子产生。结果为BA肾保护活性提供机制证据，并阐明喜马拉雅夜花在肾系疾病中的药理基础，BA有望作为机制型肾保护剂开发先导化合物。
