牛溶血性疾病所致流产与边缘无形体及巴贝斯虫属混合感染相关性的研究

《Veterinary Research Communications》：Abortion caused by hemolytic disease associated with co-infection by Anaplasma marginale and Babesia spp. in dairy cattle

　　

牛无形体病与巴贝斯虫病为重要的蜱传疾病，常伴随显著经济损失，但胎儿感染与流产极少被描述。研究人员报道了巴西中西部一例由边缘无形体(Anaplasma marginale)、牛巴贝斯虫(Babesia bovis)与双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)混合感染相关的牛流产病例。研究人员对胎儿实施剖检，依次开展细胞学、组织病理学、免疫组织化学及分子生物学分析。大体病变包括黄疸、脾肿大、肝肿大及肾脏色泽改变，符合重度溶血性疾病表现。血涂片评估可见红细胞内包涵体，形态分别与(A) marginale及巴贝斯虫样裂殖子相符；PCR确认(B) bovis与B. bigemina阳性，Anaplasma spp.感染经测序证实。组织学上，病变为红细胞吞噬、含铁血黄素沉积、血红蛋白管型及多器官显著血管内白细胞淤滞。免疫组织化学显示巨噬细胞与T淋巴细胞聚集，提示胎儿炎症反应被激活。上述发现强调在牛流产鉴别诊断中纳入血寄生虫感染的必要性，并支持胎儿免疫反应在病变发生中的作用。

研究背景与立项依据

牛无形体病（由红细胞内立克次体样细菌边缘无形体Anaplasma marginale引起）与牛巴贝斯虫病（由顶复门原虫双芽巴贝斯虫Babesia bigemina和牛巴贝斯虫Babesia bovis引起）是全球牛产区广泛分布的蜱传疾病，在巴西主要经微小牛蜱Rhipicephalus (Boophilus) microplus叮咬传播，亦可经虻类机械传播及污染器械传播。临床以发热、贫血、黄疸、生产力下降为特征，妊娠母牛可继发流产。尽管A. marginale与B. bovis存在经胎盘传播报道（多见于妊娠中晚期），但胎儿感染并致流产被视为少见结局，尤其合并巴贝斯虫属感染时更为罕见。既往文献缺乏经整合病理学（大体、组织学、免疫组化）与分子生物学（PCR及测序）共同确诊的牛流产混合感染病例，胎儿期病变特征与鉴别诊断依据不足，制约流产病因判定。为此，研究人员在巴西马托格罗索州（中西部，蜱媒 endemic 稳定区）报道一例经多模态手段确诊的Holstein×Gir杂交奶牛8月龄胎儿流产病例，旨在明确混合血寄生虫经胎盘感染致胎儿溶血性病变与炎症应答的病理机制。该文发表于《Veterinary Research Communications》。

主要技术方法概述

研究人员采用胎儿剖检获取大体病变数据；采集脾、肝、淋巴结等组织提取基因组DNA，针对Anaplasmataceae、Piroplasms、B. bovis、B. bigemina、Leptospira spp.设计PCR/cPCR扩增与Sanger测序比对GenBank；血涂片经Panótico Rápido染色行细胞学判读；组织经10%缓冲福尔马林固定、HE染色行组织病理学观察；肺组织切片行免疫组化（MAC387标记巨噬细胞、CD3标记T淋巴细胞、CD20标记B淋巴细胞），并以QuPath软件对40×视野下肺泡壁免疫细胞行半自动计数，设屠宰场无病变5月龄与9月龄胎牛肺为对照。样本来源于联邦大学马托格罗索校区教学牧场50头Holstein×Gir杂交泌乳奶牛群中一头7岁经产母牛排出的约8月龄（74 cm顶臀长）5/8 Girolando胎儿。

研究结果

Case presentation（病例呈报）

母牛群位于Santo Ant?nio de Leverger，旱季补饲玉米青贮，常规接种布鲁菌病、BoHV-1、BVDV疫苗，AI配种。该母牛此前已有一次流产史，本次流产前天气不稳、降雨异常。胎儿大体见黏膜轻度黄疸、胸腔淡黄色积液、肺萎陷；肝显著肿大呈黄橙色；脾中度肿大；肾弥漫暗红；肝门与肾淋巴结黑褐肿大；胸腺局灶出血。血涂片63×与100×油镜见红细胞内约1 μm周边嗜碱点状物（符合A. marginale）及成对梨形巴贝斯虫样体。

组织学上肝胆管与窦内金黄色素、肾小管上皮血红蛋白管型、脾弥漫红细胞吞噬伴含铁血黄素沉积、淋巴结窦扩张充血单核浸润、肺血管白细胞淤滞（leukocytostasis）伴肺泡隔增厚。PCR中Leptospira阴性，混合组织池Anaplasma spp.与Piroplasms阳性，脾B. bovis首轮cPCR阳性，B. bigemina需二轮巢式PCR阳性；Anaplasma序列与GenBank MG910977.1同源性100%，本研究序列号PZ437093。免疫组化显示肺血管腔MAC387⁺巨噬细胞（均值36.8/视野）与CD3⁺T细胞（27.6/视野）显著多于对照（对照近乎零），CD20⁺B细胞稀疏。

Discussion（讨论）

研究人员指出母牛亚临床感染经胎盘传播是前提：母体溶血性贫血致胎儿缺氧，A. marginale可经感染红细胞跨胎盘或胞外相播散，免疫抑制状态助长垂直传播。本例大体黄疸、脾肾病变与前人先天性病例一致，血涂+PCR+测序构成病原确证闭环。突出发现为肺、肝、肾、脾、淋巴结广泛血管内白细胞淤滞，提示胎儿期已启动类似成人急性巴贝斯虫感染时的细胞免疫应答；妊娠晚期胎牛IFN-γ介导细胞免疫渐成熟，MAC387⁺髓系细胞与CD3⁺淋巴细胞聚集支持适应性免疫参与。溶血机制兼顾血管内（虫体增殖破膜）与血管外（脾肝巨噬细胞吞噬opsonized红细胞），致黄疸与色素沉积。流行病学上中西部 endemic 稳定区、异常降雨促蜱增殖、含Bos taurus taurus血统杂交牛易感性高、可能的针头污染 iatrogenic 传播均为协同因素。

Conclusion（结论译述）

本研究经细胞学、分子与病理学整合确诊一例A. marginale、B. bovis、B. bigemina混合感染牛胎儿流产。大体与显微病变符合重度胎儿溶血病；显著血管内白细胞聚集提示炎症反应在病变发生与胎死中具重要作用。环境条件、宿主易感性与管理因素共同促成 endemic 区发病。结果强调蜱传血寄生虫应纳入牛流产鉴别，并需进一步研究胎儿免疫应答与炎症通路。