欧洲帕拉斯松鼠中未检测到的麻风分枝杆菌复合体

《One Health》：Undetectable Mycobacterium leprae complex in European Pallas's squirrels

　　

摘要：欧亚红松鼠（Sciurus vulgaris）在可追溯到11世纪的标本中检测到麻风分枝杆菌（M. leprae）后，被确认为不列颠群岛长期麻风病的储存宿主。为了探究最近引入欧洲大陆的帕拉斯松鼠（Callosciurus erythraeus）的情况，研究人员通过受控定量PCR（qPCR）技术，针对麻风分枝杆菌特异性RLEP重复元件、麻风分枝杆菌（M. lepromatosis）的RLPM重复元件以及最相关的物种乳房分枝杆菌（M. uberis）的ESX-1座位基因，对从281只死亡的帕拉斯松鼠标本中收集的522份样本（241份肝脏、241份脾脏和40份粪便样本）进行了检测。内部对照的成功扩增证实了所有样本均无PCR抑制，所有样本均检测为麻风分枝杆菌复合体（M. leprae complex）DNA阴性。由于在缺乏临床症状的情况下未研究可能涉及局部感染的组织的检测，且研究在地理上受限，这些结果不能外推至被测试动物全身性麻风病被排除之外的情况。尽管如此，当前数据与在欧洲大陆各种松鼠种群中报道的同样阴性结果的一致性表明，在欧洲，人兽共患麻风病仅限于不列颠群岛的红松鼠种群。

**论文解读：欧洲帕拉斯松鼠中麻风分枝杆菌复合体的检测与流行病学意义**

**研究背景**
麻风病（Leprosy）是一种可能致慢性感染的传染病，主要由麻风分枝杆菌（*Mycobacterium leprae*, M. leprae）引起，而麻风分枝杆菌（*Mycobacterium lepromatosis*, M. lepromatosis）近年被描述为麻风分枝杆菌复合体（M. leprae complex）的新成员。这些病原体曾被认为严格限于人类，但随后在美洲犰狳（*Dasypus novemcinctus*）等多种动物宿主中被检出，提示更广泛的生态和流行病学背景。此外，最相关的物种乳房分枝杆菌（*Mycobacterium uberis*, M. uberis）也在欧洲大陆的牛和山羊中引起结节性乳腺炎和结核样阴囊炎，进一步扩展了病原体谱系。
引人注目的是，在不列颠群岛的欧亚红松鼠（*Sciurus vulgaris*）中检测到M. leprae，且从11世纪标本中恢复出近乎完整的基因组序列，表明该岛屿红松鼠种群可能长期作为麻风病的储存宿主。然而，在欧洲大陆的松鼠种群中，多项研究一致未检测到M. leprae complex，包括对法国、德国、英国和瑞士的欧亚红松鼠、引入种帕拉斯松鼠（*Callosciurus erythraeus*）、东灰松鼠（*Sciurus carolinensis*）及西伯利亚花鼠（*Tamias sibiricus*）的调查。
帕拉斯松鼠原产于东南亚，是欧洲近期引入的入侵物种，在法国和意大利已有活跃种群，且常栖息于人类近郊环境。尽管其分布扩大，但仅有一次研究检测过M. leprae。鉴于其与野生动物和人类的生态互动，评估帕拉斯松鼠是否携带M. leprae和M. lepromatosis对于评估人兽共患病风险和完善欧洲麻风病流行病学认知至关重要。本文旨在通过敏感分子检测技术，在控制PCR抑制条件下，研究法国帕拉斯松鼠中M. leprae complex的存在情况。

**研究内容与结论**
研究人员对法国南部Istres和Antibes地区的281只帕拉斯松鼠尸体进行了尸检，收集了522份样本（241份肝脏、241份脾脏和40份粪便），并通过受控定量PCR（qPCR）检测M. leprae特异性RLEP重复元件、M. lepromatosis特异性RLPM重复元件和M. uberis的ESX-1座位基因。所有样本均未检测到M. leprae complex DNA，且内部对照成功扩增，排除PCR抑制。结合此前欧洲大陆松鼠种群的阴性结果，表明欧洲人兽共患麻风病仅限于不列颠群岛的红松鼠种群。该研究发表在《One Health》期刊，为理解麻风病在野生动物中的流行格局提供了关键数据，并强调了系统性监测的重要性。

**主要技术方法**
样本来源：法国南部Istres和Antibes地区，281只帕拉斯松鼠的241份肝脏、241份脾脏和40份粪便样本。主要方法：使用受控定量PCR（qPCR）检测，针对M. leprae的RLEP重复元件、M. lepromatosis的RLPM重复元件和M. uberis的ESX-1座位基因。每个样本加入内部合成对照（TIIS）控制提取效率和PCR抑制。DNA提取使用EZ1 Advanced XL自动化平台，qPCR在LightCycler 480上进行，所有样本均成功扩增内部对照，阴性对照无扩增，证明无抑制和污染。

**研究结果**
原文结果与讨论部分合并，无单独小标题，按段落总结如下：
- **检测结果**：通过qPCR检测，所有522份样本（包括肝脏、脾脏和粪便）均未检测到M. leprae、M. lepromatosis或M. uberis的DNA。内部对照TIIS的Ct值在21-25之间，表明DNA提取高效且无PCR抑制。阴性对照表现正常，排除污染。鉴于281只松鼠均阴性，检测感染率的上限95%置信区间约为1.07%。
- **阴性结果的有效性**：该结果不应被解读为所有欧洲松鼠种群中绝对无麻风病，因研究地理上受限，且仅针对无临床症状动物中的系统性感染，未研究局部感染（如皮肤、鼻组织和外周神经）。40份粪便样本也阴性，而人类和黑猩猩粪便中曾检出M. leprae。肝脏和脾脏虽在免疫缺陷小鼠和犰狳中可检测到菌量，但并非检测早期或局部感染的最佳组织。因此，低流行率、局灶性或低载量感染不能完全排除。
- **与其他研究的比较**：当前阴性结果与欧洲大陆帕拉斯松鼠、欧亚红松鼠及西伯利亚花鼠的局部和系统性麻风病病原体研究结果一致，也与不列颠群岛东灰松鼠的阴性结果相符（图2）。目前证据表明，自然发生的松鼠相关麻风病仅限于不列颠群岛的红松鼠种群，其原因可能涉及生物特异性、生态暴露差异、环境持久性、历史宿主-病原体相互作用或监测强度，尚待解决。
- **环境因素与未来方向**：环境调查显示，在感染红松鼠的Brownsea岛土壤中存在M. leprae DNA，表明环境持久性可能独立于直接宿主间传播影响暴露动态。气候变化和生态扰动可能改变环境条件，影响持久性和暴露机会。因此，监测不应仅依赖临床病例被动检测，应整合野外定期监测（如松鼠种群）与环境采样（土壤、水等生态基质），采用一体化健康（One Health）方法以阐明不列颠群岛与欧洲大陆之间流行病学差异的原因。

**讨论与结论**
讨论部分强调，阴性结果需谨慎解释，不能排除低载量或局灶性感染，但与其他欧洲大陆松鼠研究的一致性支持现有观点：欧洲人兽共患麻风病局限于不列颠群岛的红松鼠种群。研究还讨论了寄生虫传播的可能性，如蜱虫（*Ixodes ricinus*）在不同地区松鼠中的感染率差异（表2），但无证据支持当前欧洲松鼠中存在节肢动物介导的传播。环境持久性因素（如土壤中的M. leprae）可能影响暴露动态，未来需结合野生动物和环境监测，采用一体化健康方法。
**研究结论**：研究人员得出结论，在欧洲，人兽共患麻风病仅限于不列颠群岛的红松鼠种群，当前数据与欧洲大陆松鼠种群的阴性结果一致，表明该流行病学格局可能具有长期生态连续性，而非偶然溢出事件。