套细胞淋巴瘤患者及小鼠模型中血管生成受体表达的识别

《Biomarker Research》：Identifying the angiogenic receptor expression in mantle cell lymphoma patients and murine models

　　

摘要
套细胞淋巴瘤（MCL）是一种侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤，具有频繁复发且每次后续治疗反应时间缩短的特点。MCL依赖微环境细胞来源的生长因子和细胞因子进行生长，并可改变免疫系统以逃避免疫识别和清除。MCL分泌的可溶性因子可促进内皮分化、淋巴管生成以及在缺氧条件下的克隆选择，从而逃避DNA损伤反应。靶向肿瘤微环境和血管生成是研究与开发的一个活跃领域，因为MCL中的血管生成基因特征仍知之甚少。为填补这一知识空白，研究人员对MCL患者队列进行了转录组学分析，鉴定出MCL中上调的10个关键血管生成基因。研究人员重点关注四种具有受体酪氨酸激酶活性且定位于MCL细胞质膜的受体（FGFR1、VEGFR1、VEGFR2和PDGFRB）。在四个独立的临床前模型（包括患者来源异种移植模型、细胞来源异种移植模型、骨髓来源异种移植模型和MCL基因工程小鼠模型）中评估了这些受体的治疗靶向潜力。研究证实，同时靶向多个激酶（如FGFR1和VEGFR2）是治疗MCL患者的一种有前景的策略。

论文解读文章

**研究背景与问题**
套细胞淋巴瘤（MCL）是一种侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤，临床表现高度异质性，患者常经历频繁复发，且每次后续治疗的有效持续时间逐渐缩短。MCL的生存与增殖高度依赖肿瘤微环境（TME）中基质细胞、内皮细胞等分泌的生长因子和细胞因子，这些微环境信号可促进MCL细胞增殖、抑制凋亡，并帮助肿瘤细胞逃避免疫监视。此外，MCL肿瘤细胞分泌的可溶性因子能诱导内皮细胞分化、促进淋巴管生成（lymphangiogenesis），并在缺氧条件下驱动克隆选择，从而逃避DNA损伤反应。尽管靶向肿瘤微环境及血管生成在多种实体瘤中已显示出疗效，但MCL中血管生成相关基因的表达谱及其临床意义尚不明确。因此，识别MCL中关键的血管生成受体并探索其作为治疗靶点的可行性，对改善MCL患者预后具有重要意义。

**研究内容与结论**
为填补这一知识空白，研究人员对MCL患者队列（GSE159808和GSE46846）及MCL基因工程小鼠模型（tgSox11/Ccnd1）进行了转录组学分析，将上调基因与已知血管生成基因集取交集，鉴定出10个关键血管生成相关上调基因。在此基础上，进一步聚焦于具有受体酪氨酸激酶（RTK）活性且定位于细胞膜的四种受体：成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）、血管内皮生长因子受体1（VEGFR1/FLT1）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2/KDR）和血小板衍生生长因子受体β（PDGFRB）。在独立验证队列（68例MCL患者 vs. 15例健康供者CD19⁺ B细胞）中，通过RT-qPCR证实这些受体在MCL中表达显著升高，其中FGFR1表达水平最高。生存分析显示，FGFR1和VEGFR2高表达与MCL患者总生存期（OS）较差显著相关，而VEGFR1和PDGFRB高表达则无显著差异。联合分析表明，FGFR1^highVEGFR2^high患者预后最差，且其增殖标志物KI-67表达水平显著高于低表达组。在蛋白水平，MCL细胞系、患者样本及tgSox11/Ccnd1小鼠模型中均证实FGFR1和VEGFR2表达上调。

**技术方法概括**
研究人员采用以下关键方法：1）转录组学分析（微阵列数据）比较MCL患者队列与健康对照及小鼠模型；2）RT-qPCR和Western blot验证受体mRNA和蛋白表达；3）体外细胞实验（Annexin V/Sytox Blue凋亡检测、MTT增殖实验、内皮细胞血管通透性和分支实验）；4）体内四种独立临床前小鼠模型：细胞来源异种移植（CDX，Z-138和Jeko-1细胞）、骨髓来源异种移植（BMX，Jeko-1与HS-5基质细胞共注射）、基因工程小鼠模型（tgSox11/Ccnd1）及患者来源异种移植（PDX）。使用荧光探针细胞结合实验测定小分子抑制剂的细胞抑制常数（Ki），选择优选的FGFR1/VEGFR2双重抑制剂lucitanib进行后续研究。

**研究结果**
（1）FGFR1和VEGFR2表达谱及临床结局：在68例MCL患者中，FGFR1和VEGFR2 mRNA高表达与总生存期缩短显著相关；联合分析显示FGFR1^highVEGFR2^high患者预后最差，且KI-67表达显著升高。Western blot证实MCL患者及tgSox11/Ccnd1小鼠中FGFR1和VEGFR2蛋白水平上调。
（2）lucitanib的体外效应：lucitanib处理MCL细胞系（Jeko-1和Z-138）可显著诱导细胞死亡（Annexin V阳性细胞增加）并抑制增殖（MTT实验）。使用Jeko-1条件培养基（CM）处理内皮HUVEC细胞，发现lucitanib预处理可显著降低血管通透性，并抑制HUVEC细胞形成分支、连接点和节点，表明lucitanib同时具有直接抗肿瘤和抗血管生成作用。
（3）lucitanib的体内抗肿瘤效应：在CDX模型中，lucitanib处理显著缩小肿瘤体积并延长OS；在BMX模型中，lucitanib同样抑制肿瘤生长并改善生存；在tgSox11/Ccnd1转基因小鼠模型中，lucitanib降低肿瘤体积；在PDX模型中，通过监测β2微球蛋白（B2M）和循环CD45⁺CD19⁺细胞评估疾病进展，lucitanib治疗组OS显著改善。

**讨论与结论**
本研究首次系统鉴定MCL中10个上调的血管生成相关基因，并聚焦于FGFR1、VEGFR2、VEGFR1和PDGFRB四种受体。VEGF/VEGFR2信号通路驱动内皮细胞增殖，且其高表达与不良预后相关；SOX11:SMARCA4复合物可驱动包括VEGFA/VEGFR2在内的多种致癌转录程序。FGFR1在MCL中表达失调，且当VEGF通路被靶向时FGFR1可代偿性激活，这可能解释抗VEGF疗法疗效有限。VEGFR2与FGFR1之间的串扰促进血管生成，因此双重靶向这两种受体可能是阻断MCL血管生成信号通路的合理策略。研究证实，多激酶抑制剂lucitanib在体外能显著抑制MCL细胞增殖并诱导凋亡，减少内皮细胞血管生成，并在多种体内模型中验证了其抗肿瘤效果。尽管本研究未深入探讨MCL受体表达的调控机制或这些受体如何介导自分泌/旁分泌血管生成调节，但研究成果表明，同时靶向FGFR1和VEGFR2等多条激酶信号通路是治疗MCL患者的一种有前景的治疗策略。该论文发表于《Biomarker Research》。