《International Journal of Molecular Sciences》：Role of Lipoprotein(a) in Aortic Valve Calcification: Inflammatory and Oxidative Mechanisms Involved
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从宫颈中获取滋养细胞（TRIC）是一种非侵入性方法，能够在妊娠早期（最早在孕5周）获取胎儿来源的绒毛外滋养细胞（EVT），为早期胎盘和胎儿评估提供了独特机会。尽管已有研究报道TRIC在孕5至20周可行，但使用互补分析方法系统评估早期妊娠各阶段EVT回收率的研究
从宫颈中获取滋养细胞（TRIC）是一种非侵入性方法，能够在妊娠早期（最早在孕5周）获取胎儿来源的绒毛外滋养细胞（EVT），为早期胎盘和胎儿评估提供了独特机会。尽管已有研究报道TRIC在孕5至20周可行，但使用互补分析方法系统评估早期妊娠各阶段EVT回收率的研究仍有限。本研究旨在通过多种方法评估早期妊娠各阶段的EVT回收率。研究人员从53名孕5至19周的孕妇中收集宫颈内样本。使用人白细胞抗原-G（HLA-G）特异性抗体进行免疫磁珠分离，并通过β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）免疫荧光、荧光原位杂交（FISH）和荧光激活细胞分选（FACS）评估EVT细胞。免疫荧光和FISH分析显示，不同孕周组间β-hCG阳性细胞或胎儿细胞比例无显著差异，支持基于TRIC的回收率在早期妊娠各阶段保持稳定。探索性FACS分析鉴定出HLA-G阳性滋养细胞群体，包括在孕5周获取的样本中。由于FACS分析仅针对部分队列样本进行，这些发现应视为探索性，并需在更大规模的队列研究中验证。总体而言，研究结果支持TRIC在整个早期妊娠阶段的可行性，并确认最早在孕5周即可成功回收胎儿来源的EVT细胞。未来需采用更大样本队列和标准化定量方法，以更全面表征早期妊娠各阶段的EVT回收率，并优化TRIC在胎盘和产前研究中的应用。
**论文解读文章**
**研究背景与问题**
胎盘是母胎交流的关键器官，其正常发育对胎儿生长和妊娠维持至关重要。绒毛外滋养细胞（extravillous trophoblast, EVT）是胎盘细胞群体中的重要组成部分，负责在早期胎盘形成过程中侵入母体蜕膜、子宫血管和子宫内膜腺，从而建立母胎界面并确保胎盘灌注。EVT分化和侵袭异常与多种妊娠并发症相关，包括子痫前期、胎儿生长受限、复发性流产和着床失败。因此，EVT细胞不仅是产前遗传分析的目标，也是研究胎盘生物学和妊娠相关疾病的重要工具。从宫颈中获取滋养细胞（trophoblast retrieval and isolation from the cervix, TRIC）作为一种非侵入性方法，能够在早期妊娠获取胎儿源性EVT细胞，提供完整的胎儿基因组，相比基于游离胎儿DNA（cell-free fetal DNA, cffDNA）的常规无创产前检测（non-invasive prenatal testing, NIPT）具有更直接和更准确的诊断潜力。然而，尽管TRIC在孕5至20周已被报道可行，但系统评估早期妊娠各阶段EVT回收率的研究仍然有限。由于滋养细胞回收效率直接影响下游分子应用，全面了解早期妊娠阶段的EVT回收动态对于优化TRIC的临床应用至关重要。因此，本研究旨在利用互补分析方法，评估TRIC后早期妊娠各阶段的EVT回收情况，特别关注是否能在孕5周即稳定回收胎儿滋养细胞。
**研究内容与结论**
研究人员对53名孕5至19周的孕妇进行宫颈内样本采集，使用抗人白细胞抗原-G（HLA-G）抗体进行免疫磁珠分离，随后通过β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）免疫荧光、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）和荧光激活细胞分选（fluorescence-activated cell sorting, FACS）三种互补方法评估EVT细胞回收率。研究将孕妇分为三个孕周组（5–7周、8–12周、13–19周），比较各组间滋养细胞回收率。免疫荧光和FISH分析显示，不同孕周组间β-hCG阳性细胞比例或胎儿细胞比例无显著差异，表明TRIC回收率在早期妊娠各阶段相对稳定。探索性FACS分析在孕5周样本中即鉴定出HLA-G阳性滋养细胞群体，进一步支持TRIC在极早期妊娠的可行性。研究结论认为，TRIC能够在整个早期妊娠阶段（最早在孕5周）成功回收胎儿源性EVT细胞，且回收率相对稳定，这为TRIC在早期产前诊断和胎盘研究中的应用提供了重要依据。论文发表在《International Journal of Molecular Sciences》。
**关键技术方法**
本研究主要采用以下关键技术方法：（1）免疫磁珠分离：使用偶联抗HLA-G抗体的磁性纳米颗粒从宫颈内样本中富集EVT细胞；（2）免疫荧光染色：以β-hCG抗体标记EVT细胞，进行定量分析；（3）荧光原位杂交（FISH）：使用Y染色体探针（男性胎儿）或21号染色体探针（唐氏综合征胎儿）鉴定胎儿细胞，区分母体细胞；（4）荧光激活细胞分选（FACS）：通过HLA-G和CD45抗体标记，对HLA-G阳性/ CD45阴性细胞群进行定量分析。样本来自韩国江南车医院（Gangnam Cha Medical Center）的53名孕妇，孕周5–19周。
**研究结果**
**2.1. 妊娠年龄依赖性EVT细胞回收（Gestational Age-Dependent Recovery of EVT Cells Following TRIC）**
**2.1.1. 各孕周组的基线特征（Baseline Characteristics Across Gestational-Age Groups）**
53名孕妇按孕周分为三组（5–7周、8–12周、13–19周）。各组孕周有显著差异（p < 0.05），而母体年龄、体重指数（BMI）、孕次和产次无显著差异（p > 0.05）。β-hCG阳性率与孕周、母体年龄、BMI、孕次或产次均无显著关联（p > 0.05）。
**2.1.2. 基于免疫荧光的EVT细胞定量（Immunofluorescence-Based Quantification of EVT Cells）**
免疫荧光分析显示，各孕周组β-hCG阳性细胞比例在63.2%至72.8%之间，组间无统计学差异，表明β-hCG阳性滋养细胞比例在评估的孕周范围内相对稳定。值得注意的是，HLA-G阳性细胞计数在8–12周组显著高于5–7周组（p < 0.05），而13–19周组显著低于8–12周组（p < 0.05），但5–7周组与13–19周组之间无显著差异。
**2.1.3. 基于FISH的胎儿细胞比例评估（FISH-Based Assessment of Fetal Cell Proportions）**
FISH分析仅针对可明确鉴定胎儿细胞的样本（男性胎儿或染色体非整倍体胎儿）。胎儿细胞比例在13–19周组略增至20.2%，但组间差异无统计学意义（p > 0.05）。
**2.2. 基于FACS的HLA-G阳性滋养细胞群体评估（FACS-Based Assessment of HLA-G-Positive Trophoblast Populations）**
FACS分析在选定样本中进行，包括孕5周样本。在孕5周5天时，HLA-G染色组中FITC阳性细胞占25.25%，对照组为12.61%；在孕8周时，HLA-G染色组FITC阳性细胞增至50.76%，对照组为13.02%。这证明最早在孕5周即可检测到HLA-G阳性滋养细胞，但因样本量有限，这些结果应视为探索性。
**讨论与结论**
**讨论部分总结**
本研究通过多方法评估证实了TRIC在早期妊娠各阶段回收EVT的可行性，且免疫荧光和FISH结果提示回收率相对稳定。FACS探索性分析进一步支持孕5周即可检测到HLA-G阳性细胞。但FACS结果与免疫荧光和FISH不完全一致，可能源于分析方法灵敏度差异：FACS可定量数千个单细胞，而显微镜方法受限于细胞数量和观察者主观性。先前研究主要关注TRIC的可行性，较少系统评估孕周对回收率的影响，且不同研究间结果不一致可能与抗体、分离方法、分析平台差异有关。本研究的β-hCG阳性率（63–73%）低于部分报道（>90%），但直接比较需谨慎，因分母和分析策略不同。TRIC可提供完整胎儿基因组，回收细胞的数量和质量直接影响下游分子分析（如染色体分析、基因分型、测序）的成功率，因此优化回收策略对临床应用至关重要。本研究的局限性包括：亚组样本量较小、细胞计数未标准化、FISH仅针对特定胎儿性别或非整倍体样本、FACS为探索性分析、未评估下游诊断性能、无法排除胎盘异质性和限制性胎盘嵌合体的影响。
**结论部分翻译**
尽管TRIC在产前诊断和胎盘研究中具有巨大潜力，但相对较少的研究使用互补分析方法系统评估早期妊娠各阶段的胎儿滋养细胞回收率。本研究通过免疫荧光和FISH分析证明，基于TRIC的胎儿滋养细胞回收在早期妊娠各阶段具有可行性且相对稳定。此外，最早在孕5周即可成功回收胎儿源性EVT细胞，进一步支持了TRIC在早期妊娠中的可行性。未来需采用更大样本队列和标准化定量方法，以更精确地表征早期妊娠各阶段的EVT回收率，并进一步优化基于TRIC的分子和诊断应用。
