《International Journal of Molecular Sciences》：Trophoblast Retrieval from the Cervix (TRIC) Across Early Gestation: A Multi-Method Assessment of Extravillous Trophoblast Recovery
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宫颈滋养层细胞获取（TRIC）是一种非侵入性方法，能够在早孕期（妊娠早期）获取胎儿来源的绒毛外滋养层细胞（EVT），为早期胎盘和胎儿评估提供了独特的机会。尽管据报道TRIC在妊娠5至20周之间可行，但使用互补分析方法对早孕期EVT回收的系统性评估仍然有限。本研
宫颈滋养层细胞获取（TRIC）是一种非侵入性方法，能够在早孕期（妊娠早期）获取胎儿来源的绒毛外滋养层细胞（EVT），为早期胎盘和胎儿评估提供了独特的机会。尽管据报道TRIC在妊娠5至20周之间可行，但使用互补分析方法对早孕期EVT回收的系统性评估仍然有限。本研究旨在提供早孕期EVT回收的多方法评估。从53名妊娠5至19周的孕妇中收集了宫颈内样本。使用人类白细胞抗原G（HLA-G）特异性抗体通过免疫磁分离分离EVT细胞，并通过β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）免疫荧光、荧光原位杂交（FISH）和荧光激活细胞分选（FACS）进行评估。免疫荧光和FISH分析显示，不同孕周组的β-hCG阳性或胎儿细胞比例无显著差异，支持TRIC在早孕期具有稳定的回收率。探索性FACS分析识别出HLA-G阳性滋养层细胞群体，包括在妊娠5周获得的样本中。由于FACS分析是在队列的一个子集中进行的，这些发现应被视为探索性，并需要在更大的队列研究中验证。总体而言，研究人员的研究结果支持TRIC在整个早孕期的可行性，并确认从妊娠5周起即可成功回收胎儿来源的EVT细胞。需要更大队列和标准化定量方法的进一步研究，以更全面地描述早孕期EVT回收特征，并优化TRIC在胎盘和产前研究中的应用。
胎盘是母胎交流的关键器官，绒毛外滋养层细胞（EVT）在早期胎盘形成中侵入母体蜕膜、子宫血管和子宫内膜腺体，建立母胎界面并维持胎盘灌注。EVT分化与侵袭异常与多种妊娠并发症（如子痫前期、胎儿生长受限、复发性流产和着床失败）密切相关。宫颈滋养层细胞获取（TRIC）作为一种非侵入性方法，可获取胎儿来源的完整EVT细胞，为早期产前诊断和胎盘生物学研究提供独特平台。然而，既往研究多聚焦于可行性验证和技术优化，对早孕期不同孕周间EVT回收率的系统性评估相对有限，尤其缺乏多种互补分析方法的联合评价。本研究旨在利用多方法评估早孕期TRIC对EVT的回收效率，明确其在不同孕周的稳定性，并探索最早可成功回收的孕周。该研究发表在《International Journal of Molecular Sciences》。
研究人员采用免疫磁分离（基于人类白细胞抗原G（HLA-G）抗体）从53名妊娠5~19周孕妇的宫颈内样本中分离EVT细胞，随后通过β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）免疫荧光、荧光原位杂交（FISH）和荧光激活细胞分选（FACS）三种方法进行分析。样本来源为韩国江南CHA医学中心，参与者分为三个孕周组（5~7周、8~12周、13~19周）。FISH分析仅纳入可明确鉴定胎儿细胞（如Y染色体阳性或染色体非整倍体）的病例，FACS分析仅在部分样本中进行探索性验证。
**2.1. 孕周依赖性EVT细胞回收**
**2.1.1. 基线特征**：三组孕周差异显著（p < 0.05），但母体年龄、BMI、孕次和产次无统计学差异。β-hCG阳性率与孕周、母体年龄、BMI、孕次、产次均无显著关联（p > 0.05）。
**2.1.2. 免疫荧光定量**：β-hCG阳性细胞比例在各组间稳定在63.2%~72.8%，无统计学差异。但HLA-G阳性细胞计数在8~12周组显著高于5~7周组（p < 0.05），13~19周组则显著低于8~12周组（p < 0.05），而5~7周与13~19周组间无显著差异。
**2.1.3. FISH胎儿细胞比例**：胎儿细胞比例在13~19周组略高（20.2%），但组间差异无统计学意义（p > 0.05），支持TRIC回收的胎儿细胞比例在早孕期相对稳定。
**2.2. FACS对HLA-G阳性滋养层细胞群体的评估**：在妊娠5周5天和8周的样本中，通过FACS检测到HLA-G阳性细胞群体（CD45阴性/HLA-G阳性），5周5天样本中FITC阳性细胞占25.25%，8周样本中升至50.76%，但该分析仅针对代表性样本，属探索性发现，不能作为孕周依赖性变化的证据。
讨论部分总结了多方法评估结果，指出免疫荧光和FISH分析未发现孕周组间显著差异，支持TRIC在早孕期的稳定回收能力；FACS探索性分析提示HLA-G阳性细胞在5周即可检出，但需全队列验证。研究还讨论了方法学差异对结果的影响：FACS可定量评估数千个细胞，灵敏度高于显微镜依赖的免疫荧光和FISH，这可能解释不同方法间观察到的趋势差异。临床意义方面，TRIC可获取完整胎儿基因组，为早期产前诊断（如染色体分析、单基因病检测）和胎盘功能障碍的早期风险分层提供基础。研究局限性包括：样本量较小，限制了统计效力；HLA-G阳性细胞计数为绝对回收数，未标准化；FISH分析仅限特定胎儿性别或非整倍体病例，可能不具普遍性；FACS分析为探索性，缺乏全面队列验证；未评估下游诊断性能。
研究人员的研究结论如下：尽管TRIC在产前诊断和胎盘研究中具有巨大潜力，但相对较少的研究使用互补分析方法系统评估了早孕期胎儿滋养层细胞回收。研究人员的研究结果支持TRIC在早孕期进行胎儿滋养层细胞回收的可行性和相对稳定性，如免疫荧光和FISH分析所示。此外，从妊娠5周起即可成功回收胎儿来源的EVT细胞，进一步支持了TRIC在早孕期的可行性。需要更大队列和标准化定量方法的进一步研究，以更精确地描述早孕期EVT回收特征，并进一步优化TRIC的分子和诊断应用。
