可自商业获得的干燥羊肚菌（Morchella）子实体中获取并萌发有活力的孢子

《Mycobiology》：Viable Spores Can be Obtained and Germinated from Commercially Obtained Dried Morel (Morchella) Mushrooms

　　

羊肚菌（Morchella sp.）是备受珍视的食用菌，尽管近年来引起了极大兴趣并取得了进展，但栽培仍然困难。获取羊肚菌的遗传物质对于开展研究是必要的，但可能因地区、季节时间、预算或当地法规而具有挑战性。本研究评估了是否可以从零售干燥羊肚菌产品中回收子囊孢子并使其萌发，以及所得分离物是否可以进行分类学鉴定。来自不同供应商的四包干燥羊肚菌被复水、均质化并处理以回收孢子悬浮液。血球计数板计数得出平均孢子滴度为1.50×10⁵（A）、4.24×10⁶（B）、5.86×10⁶（C）和3.51×10⁵（D）孢子·mL^?1。等分试样接种在含有氯霉素的沙氏葡萄糖琼脂（SDA）上，并在24°C下培养；菌落计数表明可培养部分对应于样品A约2.2%的萌发率，样品B–D约10–20%。代表性菌落被传代培养，提取DNA，并通过Sanger测序生成ITS条形码。来自样品A、B和D的分离物与Morchella sextelata匹配，而来自样品C的分离物与Morchella eximia匹配。研究结果表明，有活力的Morchella子囊孢子可以在商业干燥过程中存活，并且干燥产品构成了一种低成本的可培养材料来源。测序结果与产品标签之间的差异突出了可能的原产国问题，但被认为超出了本工作的范围，并未进行详尽调查。

羊肚菌（Morchella spp.）是备受珍视的食用菌，属于子囊菌门（Ascomycota）羊肚菌科（Morchellaceae），因其独特鲜味和健康益处而备受追捧，价格高昂，但栽培技术仍相对困难。尽管近年来在中国等地实现了大规模室外覆土栽培，但室内全年栽培仍具挑战，多数欧洲和北美消费的羊肚菌仍依赖野生采集，导致过度采收和生态破坏问题。由于新鲜羊肚菌易腐坏，干燥羊肚菌占全球市场约60%，是消费者最易获得的形式。然而，开展羊肚菌研究的关键障碍之一在于获取遗传材料：从菌种保藏中心购买菌株成本高昂且种类有限，而野生采集则受限于地域、季节和劳动力投入。子囊孢子（ascospore）对干燥的耐受性在多种子囊菌中已有记载，但能否从商业干燥产品中回收并萌发活孢子尚未明确。为此，研究人员开展本研究，旨在评估从零售干燥羊肚菌中提取孢子并培养获得可鉴定的菌株的可行性，为低成本、广谱获取遗传资源提供新途径。该研究发表在《Mycobiology》上。

主要技术方法：研究人员从四个不同供应商处获取干燥羊肚菌产品（样本A、B、C、D），分别取2克样品复水、均质化处理，通过离心和沉淀分离获得孢子悬浮液；使用血球计数板计数孢子浓度，并将稀释液涂布于含有氯霉素的沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基上，于24°C黑暗培养48小时，统计菌落形成单位（CFU）并计算萌发率；对代表性菌落进行传代培养，提取DNA后利用ITS1f/ITS4引物对ITS1和ITS2 rDNA区域进行PCR扩增，通过Sanger测序和NCBI BLAST比对进行物种鉴定。

研究结果：

3.1 从干燥羊肚菌子实体中提取Morchella孢子
研究人员对四个干燥羊肚菌产品（A、B、C、D）进行处理，经复水、均质化和离心，在显微镜下观察到典型Morchella子囊孢子形态。血球计数板计数（n=3）显示平均孢子滴度分别为：A: 1.50×10⁵ 孢子·mL^?1，B: 4.24×10⁶ 孢子·mL^?1，C: 5.86×10⁶ 孢子·mL^?1，D: 3.51×10⁵ 孢子·mL^?1。表明四份干燥产品中均含有大量孢子，且样本间差异显著。

3.2 萌发Morchella孢子并测定活力
将孢子悬浮液稀释后涂布于含氯霉素的SDA培养基，24°C黑暗培养48小时后，观察到典型Morchella菌落形态。CFU计数（n=3）显示可培养孢子浓度分别为：A: 3.33×10³ CFU·mL^?1，B: 8.47×10⁵ CFU·mL^?1，C: 9.1×10⁵ CFU·mL^?1，D: 3.33×10⁴ CFU·mL^?1。基于公式计算萌发率，样本B、C、D的萌发率在10–20%之间，而样本A仅2.2%。说明干燥处理并未完全灭活孢子，但不同产品的孢子活力存在较大差异。

3.3 真菌条形码鉴定与物种鉴定
从每个样本中随机挑取三个典型菌落进行传代培养，提取DNA后对ITS区域进行PCR扩增和Sanger测序。NCBI BLAST比对结果显示，样本A、B、D的分离物均鉴定为Morchella sextelata，而样本C的分离物鉴定为Morchella eximia。值得注意的是，产品包装上标注的物种（如A标注M. conica，C标注M. esculenta）与分子鉴定结果不符，且原产国声明（如波斯尼亚和黑塞哥维那）与M. sextelata和M. eximia主要在北美分布的特征矛盾，提示产品标签可能不可靠。

讨论部分：研究人员指出，干燥产品中仍能回收有活力的子囊孢子，但萌发率受样本处理条件和储存历史影响（如干燥温度通常在50–60°C，个别可达80°C，且可能涉及辐照处理）。尽管萌发率差异大，所有四个样本均成功获得了菌株。分子鉴定结果与产品标签的不一致表明，商业干燥羊肚菌可能混杂中国栽培品种（如M. sextelata和M. eximia在中国大规模种植），而宣称的野生采集原产地可能不实。该方法的局限性包括样本数量少、缺乏干燥条件信息、仅依赖ITS条形码，以及培养条件可能偏好某些类群。但总体而言，从干燥产品中提取孢子提供了一种低成本、低技术门槛的遗传材料获取途径，克服了菌种保藏中心的高成本和野生采集的季节性限制，有望扩大研究人员、教育者和公民科学家可获得的菌株多样性，加速羊肚菌栽培研究。未来工作将聚焦于从野生采集的干燥产品中分离更多物种，并利用更广泛的分子标记（如ITS加LSU或蛋白编码基因座）验证产品真实性。

研究结论：从商业干燥羊肚菌中提取并萌发有活力的Morchella孢子，为研究和发展提供了一种务实、低成本的途径，使科学界成员无论地理位置如何，都能以最低预算和设备参与羊肚菌研究。然而，当需要菌株确定性、法规合规性和可重复生产时，该方法可能无法替代认证的菌种保藏中心。