U2 snRNP的抑制会通过破坏DNA修复功能及有丝分裂检查点的完整性，从而降低胰腺癌细胞的存活能力

《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》：U2 snRNP inhibition hampers pancreatic cancer cell viability by disrupting DNA repair proficiency and mitotic checkpoint integrity

　　

摘要

背景

胰腺导管腺癌是一种恶性程度极高的癌症，预后极差。剪接失调逐渐被视为该疾病的特征之一，同时也是潜在的治疗靶点。

方法

我们在用三种针对U2小核核糖核蛋白的药物处理的PANC-1细胞中进行了高通量RNA测序分析，这三种药物分别是普拉迪烯醇B、泰兰斯汀A和印地苏拉姆。通过细胞存活率检测，评估了单独或联合使用剪接抑制剂塔拉佐帕瑞布、阿利塞替布、AZD7762和巴里塞替布在PDAC细胞及患者来源的类器官中的效果。同时通过RT-PCR、Western blot和细胞周期检测，分析了DNA修复基因和有丝分裂基因的表达情况以及有丝分裂过程的执行情况。此外，利用CRISPR/Cas-9技术对PANC-1细胞进行改造，使其稳定共表达带有GFP标签的H2b组蛋白和带有RFP标签的β-微管蛋白，进而用于时间序列共聚焦显微镜和免疫荧光分析。

结果

在晚期PDAC中，负责识别3’剪接位点的U2 snRNP编码基因表达升高。针对U2 snRNP的药物会干扰同源重组功能正常的PDAC细胞及类器官中的DNA损伤反应通路，从而提高这些细胞对PARP抑制剂的敏感性。被这三种药物干扰剪接的基因具有更高的表达水平、更多的外显子-内含子连接处、较弱的5’剪接位点以及非典型的GC含量。这些特征在那些表达受到剪接紊乱强烈影响的细胞周期基因中更为常见，比如AURKA、AURKB、CHEK1等。因此，剪接抑制会导致严重的有丝分裂缺陷，使得染色体在单极或双极纺锤体上排列异常的细胞不断积累。值得注意的是，AURKA、AURKB和CHEK1的高表达与PDAC患者的不良预后相关，而同时使用这些有丝分裂激酶抑制剂则能显著降低PDAC细胞及类器官的存活率。

结论

这些研究结果揭示了PDAC细胞中对剪接抑制剂敏感的基因特征，表明DNA损伤反应和有丝分裂都是极易受剪接紊乱影响的生物过程。