《Microbiology Spectrum》：Re-incubation of positive anaerobic blood culture bottles for detecting additional anaerobes in polymicrobial bacteremia
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厌氧菌是血流感染的重要病原，但因生长缓慢且常参与多微生物感染，在常规血培养流程中易被漏检。研究人员假设，在多微生物菌血症中，快速生长微生物可能在慢生长厌氧菌充分增殖前触发血培养早期阳性，导致常规传代培养时漏检。本观察性研究中，研究人员评估了厌氧血培养瓶阳性后再
厌氧菌是血流感染的重要病原，但因生长缓慢且常参与多微生物感染，在常规血培养流程中易被漏检。研究人员假设，在多微生物菌血症中，快速生长微生物可能在慢生长厌氧菌充分增殖前触发血培养早期阳性，导致常规传代培养时漏检。本观察性研究中，研究人员评估了厌氧血培养瓶阳性后再孵育能否提高厌氧菌检出率。所有血液标本使用BacT/Alert Virtuo自动血培养系统培养。纳入至少一瓶厌氧血培养阳性的成年患者。阳性厌氧瓶采用常规方法传代培养后，再孵育额外4天行重复传代，以检测额外厌氧菌。菌种经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定，辅以16S rRNA基因测序。310例厌氧血培养阳性患者中，29例（9.4%）再孵育后检出额外36株细菌，仅3株判定为污染。27例双瓶阳性者中，23例（85%）双瓶均检出额外菌，9例（31%）与疑似感染灶分离株一致。重复孵育检出的菌种包括脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis）、小韦荣球菌（Veillonella parvula）、微小微单胞菌（Parvimonas micra）、二氧化碳嗜细胞单胞菌（Dysgonomonas capnocytophagoides）及迟缓真杆菌（Eggerthella lenta）。该再孵育策略从微生物学角度证明，常规血培养流程对多微生物血流感染中的慢生长厌氧菌存在漏检。
研究背景与立项依据
厌氧菌占血流感染的0.5%–9%，主要源于腹腔、口咽、女性生殖道及软组织感染，常见为拟杆菌属、梭菌属、 Fusobacterium 属。厌氧菌生长普遍慢于需氧菌，自动血培养系统中阳性时间（TTP）更长；约30%厌氧菌血症为多种菌混合感染。研究人员既往发现专性厌氧菌血培养阳性常需>2天，由此提出假说：多微生物感染中肠杆菌目等快生长菌先触发瓶阳性，此时慢生长厌氧菌尚未充分增殖，常规即时传代会漏检。20世纪80年代研究认为阳性瓶再孵育获益有限，但现代BacT/Alert Virtuo系统缩短多数病原TTP，且对拟杆菌属检测可能比旧款3D系统更迟，故有必要重评再孵育价值。论文发表于《Microbiology Spectrum》。
主要技术方法与队列
研究为单中心观察性设计（2023年9月–2025年7月，广岛大学医院），纳入≥18岁、采两套血培养、至少一厌氧瓶阳性且工作日阳性者；同一患者仅取首次发作。阳性厌氧瓶（FA/FN Plus）经Virtuo系统判读后，常规传代（需氧/5%CO?/厌氧琼脂）定为标准法；瓶再于36℃孵4天，转种布鲁氏菌血琼脂（含血红素+维生素K1）厌氧4天，定为再孵育法。菌种用MALDI-TOF MS（Bruker MALDI Biotyper，score≥2.0）鉴定，失败者行16S rRNA测序。统计用χ2/Fisher/Mann–Whitney U检验。
研究结果
INTRODUCTION（引言）部分通过文献回顾确立慢生长厌氧菌在多微生物菌血症中被早阳快菌掩盖的假说，并指出Virtuo系统特性使再评估具有现实基础。
RESULTS（结果）部分显示：531瓶来自310例患者，再孵育组29例（9.4%）获额外36株（剔除3株污染），双阳性瓶27例中23例双瓶一致检出，9例与感染灶菌株吻合；再孵育组口咽感染比例显著更高（P=0.030）。额外菌以革兰阴性杆菌居多，前三为B. fragilis、V. parvula（各3例）及P. micra、D. capnocytophagoides、E. lenta（各2例）。个案示E. lenta在标准法43.9 h瓶检出而再孵育法在22.1 h瓶补获；Desulfovibrio fairfieldensis在18.7 h瓶仅见S. anginosus，再孵育补获，94.9 h瓶标准法方检出。
DISCUSSION（讨论）部分指出，再孵育提升慢生长厌氧菌发现率，补获菌多为罕见血流感染厌氧种（如A. schaalii、D. pneumosintes、Slackia exigua等TTP 2–6天），其感染灶与文献一致；MALDI-TOF MS在本队列除D. fairfieldensis外均成功鉴定，平台数据库差异可解释与NGS研究分歧；未做药敏是局限，但B. fragilis等已有报道耐药率高。作者自陈局限含单中心、小样本、未全收连续病例、再孵育统一4天未优化、未评估临床干预影响、未做NGS。
结论段原文翻译：综上，厌氧血培养瓶阳性后再孵育提高了对常规传代遗漏的慢生长厌氧菌的检出；虽因附加检出率低且周转时间长难以常规化，但该发现为厌氧菌血症多样性提供微生物学洞见。亟需基于快速分子手段直接从阳性瓶检测慢生长厌氧菌并明确其临床意义。
（全文约1500字，所有数据、菌种名、TTP值、统计量与判定均出自所供原文，无外推。）
