《Brain Research Bulletin》：Tongren Niuhuang Qingxin Wan Attenuates Chronic Stress-Induced Anxiety-Like Behavior by Modulating Adrenergic Signaling and Synaptic Plasticity
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同仁牛黄清心丸（NHQXW）在中医（TCM）中用于治疗与焦虑相关的症状。NHQXW减轻慢性不可预测温和应激（CUMS）诱导的雄性小鼠焦虑样行为。NHQXW降低CUMS后前额叶去甲肾上腺素（NE）升高。蛋白质组学将NHQXW与肾上腺素能信号和突触可塑性联系起来。
同仁牛黄清心丸（NHQXW）在中医（TCM）中用于治疗与焦虑相关的症状。NHQXW减轻慢性不可预测温和应激（CUMS）诱导的雄性小鼠焦虑样行为。NHQXW降低CUMS后前额叶去甲肾上腺素（NE）升高。蛋白质组学将NHQXW与肾上腺素能信号和突触可塑性联系起来。NHQXW上调前额叶皮层中ADRA2A/GNAI2和突触蛋白。
焦虑障碍（anxiety disorders）是一组常见的精神疾病，全球患病率约16.6%，慢性社会应激是重要诱因。病理机制涉及单胺类神经递质失衡、下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）功能亢进、前额叶皮层（PFC）突触可塑性受损。现有一线药物选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）和5-羟色胺-去甲肾上腺素再摄取抑制剂（SNRIs）存在起效延迟、副作用大、个体差异显著等问题，而苯二氮卓类药物（benzodiazepines）因镇静和依赖风险仅限短期使用。因此，迫切需要开发多靶点、更安全的新型抗焦虑药物。传统中药方剂同仁牛黄清心丸（NHQXW）具有“清心化痰”功效，传统上用于心悸、失眠等症状，现代研究显示其神经保护作用，但对其抗焦虑效果和分子机制尚缺乏系统研究。研究人员采用慢性不可预测温和应激（CUMS）诱导的雄性C57BL/6J小鼠焦虑样行为模型，通过行为学测试（旷场实验OFT、高架十字迷宫EPM、明暗箱LDB）评估NHQXW（0.615、1.23、2.46 g/kg）的干预效果，并用地西泮（diazepam）作为阳性对照。通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测PFC神经递质水平，采用非靶向蛋白质组学（DIA定量蛋白质组学）结合RT-qPCR和Western blot验证关键蛋白表达。结论：NHQXW呈剂量依赖性地减轻CUMS诱导的焦虑样行为，显著降低PFC中去甲肾上腺素（NE）水平，上调α
2A-肾上腺素能受体（ADRA2A）及其下游G蛋白亚基GNAI2，降低糖皮质激素受体（GR）表达，并恢复突触后致密蛋白95（PSD-95）和突触素（SYP）水平。这些发现为NHQXW的传统功效提供了现代药理学基础，提示其通过调节肾上腺素能信号和突触可塑性发挥抗焦虑作用。论文发表在《Brain Research Bulletin》。
主要关键技术方法：本研究使用北京维通利华提供的C57BL/6J雄性小鼠，通过14天CUMS程序（包括多种应激源）建立焦虑模型。关键技术包括：行为学测试（OFT、EPM、LDB）评估焦虑样行为；LC-MS/MS定量检测PFC中NE、5-HT、DA、GABA水平；非靶向DIA蛋白质组学（timsTOF HT质谱，DIA-NN搜索）鉴定差异表达蛋白；RT-qPCR和Western blot验证ADRA2A、GNAI2、GR、PSD-95、SYP的mRNA和蛋白表达。
研究结果如下：
**Chemical characterization of NHQXW**：通过UPLC-Q-TOF-MS/MS定性分析，在NHQXW中鉴定出183种成分，包括胆汁酸/甾体、黄酮类、三萜皂苷、人参皂苷、柴胡皂苷等，为实验用制剂提供了化学可追溯性。
**Effects of NHQXW on Body Mass and Anxiety-Like Behavior of CUMS-exposed mice**：CUMS暴露导致小鼠体重下降（第14天显著），NHQXW和地西泮组体重略高于模型组但无统计学差异。在OFT中，CUMS小鼠中心区进入次数和距离显著减少，NHQXW呈剂量依赖性地恢复这些指标，而地西泮无显著改善。在EPM中，高剂量NHQXW和地西泮显著增加开放臂时间和进入百分比。在LDB中，低、中剂量NHQXW显著增加光箱活动距离，所有NHQXW组和地西泮组均显著降低冻结时间。表明NHQXW缓解CUMS诱导的焦虑样行为，但剂量效应模式因测试而异。
**Effects of NHQXW on Neurotransmitters in the PFC of CUMS-exposed mice**：CUMS小鼠PFC中NE、5-HT、DA水平显著升高，GABA无变化。NHQXW各剂量组均显著降低NE水平，而5-HT和DA仅低剂量组有下降趋势未达显著。提示NHQXW的抗焦虑作用可能部分通过调节NE水平介导。
**Proteomic insights into the molecular mechanisms of NHQXW intervention**：蛋白质组学鉴定7295种蛋白，其中7265种可定量。CUMS vs 对照有101个差异表达蛋白，NHQXW vs 模型有107个差异蛋白。GO富集显示NHQXW上调蛋白富集于细胞通讯、信号转导和化学刺激应答，下调蛋白富集于应激反应通路。模糊C均值聚类分析显示，NHQXW可逆转CUMS诱导的347个蛋白表达变化，这些蛋白富集于突触翻译、囊泡介导运输和神经元凋亡负调控等生物过程，提示NHQXW调节突触相关过程。
**Effects of NHQXW on ADRA2A/GNAI2-Associated and Synapse-Related mRNA Expression**：RT-qPCR显示，CUMS组ADRA2A、GNAI2、PSD-95、SYP的mRNA表达降低，NHQXW高剂量显著增加ADRA2A和SYP mRNA，中、高剂量显著增加GNAI2 mRNA，PSD-95 mRNA有上升趋势但未达显著。表明NHQXW在转录水平调节肾上腺素能信号和突触标志物。
**Effects of NHQXW on key proteins in the PFC of CUMS-exposed mice**：Western blot显示，NHQXW中、高剂量显著上调ADRA2A和GNAI2蛋白表达，各剂量组均显著降低GR蛋白水平，高剂量显著增加PSD-95和SYP蛋白表达。与蛋白质组学结果一致，证实NHQXW调节ADRA2A/GNAI2信号、GR表达和突触蛋白。
讨论部分总结：本研究整合行为、神经化学和蛋白质组学数据，提出NHQXW通过上调ADRA2A/GNAI2负反馈环降低NE水平，调节GR表达，并保护突触结构，从而拮抗慢性应激诱导的神经退行性变化。与以往在抑郁症研究中发现的TrkB/ERK/CREB通路不同，本研究在PFC中识别出ADRA2A/GNAI2作为上游调控节点，提示组织特异性和通路依赖性调节。局限性包括仅使用雄性小鼠、未评估抑郁样行为、未建立因果关系等。未来需采用细胞类型特异性遗传模型和血清药理学验证活性成分。
结论翻译：总之，NHQXW减轻了雄性CUMS暴露小鼠的慢性应激诱导的焦虑样行为。这些行为效应伴随着PFC中NE水平降低以及ADRA2A/GNAI2相关肾上腺素能信号、GR表达和突触相关蛋白的变化。这些发现为NHQXW的传统“清心宁神”功效提供了现代药理学基础，突出了其作为更安全、多途径干预焦虑障碍的潜力。未来工作应采用细胞类型特异性遗传模型验证ADRA2A在此过程中的因果作用，并结合血清药化学鉴定驱动这些协同效应的活性成分，从而推动NHQXW作为新型抗焦虑疗法的合理开发。
