人类胸腺Treg来源的细胞外囊泡具有特定的蛋白质组学和miRNA特征，并表现出因供体而异的抑制活性

《Molecular Medicine》：Human thymic Treg-derived extracellular vesicles display a defined proteomic and miRNA signature with donor-variable suppressive activity

　　

摘要

背景

细胞外囊泡（EVs）是细胞间通讯的关键介质，能够传递反映其来源细胞的功能性分子，目前越来越被视作无细胞治疗剂。包括调节性T细胞（Tregs）在内的免疫调节细胞可产生具有抗炎作用的EVs。虽然胸腺来源的Tregs（thyTregs）具有较高的稳定性和强大的抑制活性，但它们生成功能性EVs的能力尚不清楚。

方法

通过尺寸排阻色谱法或免疫捕获法从体外扩增的人类thyTregs中分离出EVs，随后利用电子显微镜、纳米颗粒追踪分析以及Western blotting技术对它们进行表征。通过蛋白质组学和miRNA转录组学分析来确定EVs中的成分。此外，还将EVs与活化的异体外周血淋巴细胞共培养，通过检测细胞增殖情况、活化标志物以及细胞因子的产生来评估其功能活性。

结果

带四跨膜蛋白的ThyTreg衍生的EVs具有典型的囊泡形态，平均大小约为200纳米，并表达典型的EV标记物（CD9、TSG101）。蛋白质组分析显示有314种蛋白质富集在与免疫相关的通路中，其中包括CD25、CTLA-4、TGF-β1、ICOS和粒酶B，这些均反映了其来源Treg的表型。转录组分析则发现了一种独特的miRNA特征，以let-7家族成员和miR-148a-3p为主，其预测靶标涉及TGF-β/BMP和MAPK信号通路。在功能方面，thyTreg-EVs能以剂量依赖性但存在差异的方式抑制CD4?和CD8? T细胞的增殖，且在部分供体中还能诱导反应细胞死亡。研究未观察到活化标志物表达或细胞因子产生的显著变化。

结论

人类thyTregs会释放具有免疫抑制作用且含有特定分子成分的EVs。这些研究结果表明，ThyTreg衍生的EVs是一种全新的无细胞平台，有望用于免疫调节疗法。