《Bratislava Medical Journal》：Yes-associated Protein Is Involved in Tubular Epithelial Cell Apoptosis and Renal Tissue Damage in Early Sepsis-Associated Acute Kidney Injury
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脓毒症相关急性肾损伤（SA-AKI）是危重症患者中一种独特的急性肾损伤形式。其特点是肾小管上皮细胞损伤和凋亡。Hippo-Yes相关蛋白（YAP）通路在肾损伤和修复中发挥双重作用，YAP作为关键的下游效应器；然而，其在SA-AKI早期阶段的功能仍不清楚。在本研
脓毒症相关急性肾损伤（SA-AKI）是危重症患者中一种独特的急性肾损伤形式。其特点是肾小管上皮细胞损伤和凋亡。Hippo-Yes相关蛋白（YAP）通路在肾损伤和修复中发挥双重作用，YAP作为关键的下游效应器；然而，其在SA-AKI早期阶段的功能仍不清楚。在本研究中，研究人员利用两种小鼠模型（脂多糖（LPS）诱导和盲肠结扎穿孔（CLP））和人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）来研究YAP在SA-AKI中的作用。YAP的表达通过腺相关病毒9（AAV9）介导的过表达和维替泊芬（verteporfin）的药理学抑制进行调控。评估了肾损伤标志物、炎症细胞因子和相关通路蛋白。组织病理学分析，包括HE和PAS染色，显示肾小管细胞凋亡和组织破坏增加。在两种SA-AKI模型中，YAP表达和核定位在损伤诱导后24小时显著增加。YAP过表达加重了肾损伤和炎症反应，而YAP的药理学抑制显著减轻了肾损伤。机制上，YAP介导的肾损伤与PI3K-AKT信号通路的失调有关。总之，这些发现表明YAP可能参与早期SA-AKI的肾病理损伤，并强调其在疾病进展中的潜在作用。
脓毒症相关急性肾损伤（SA-AKI，由脓毒症引起的急性肾损伤）是危重症患者中常见的严重并发症，死亡率高于非脓毒症相关急性肾损伤。其病理生理机制复杂，包括炎症（细胞因子风暴、补体激活和肾组织炎症）、微循环功能障碍（微血管血栓、内皮损伤和高通透性导致肾灌注不足和缺氧）以及代谢异常（线粒体功能障碍、能量代谢紊乱和肾小管上皮细胞损伤）。然而，这些改变的机制和潜在治疗靶点仍不清楚。Hippo-Yes相关蛋白（YAP，Hippo通路下游转录共激活因子）通路在肾损伤和修复中发挥双重作用：在缺血再灌注损伤中，YAP激活促进肾小管结构和功能恢复，但持续激活导致肾小管间质纤维化。在脓毒症早期，YAP的动态变化及其对肾小管细胞命运的影响尚不明确，且YAP与PI3K-AKT（磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B，参与细胞存活和凋亡的信号通路）通路在SA-AKI中的功能关系未被阐明。因此，研究人员开展本研究，旨在探讨YAP在SA-AKI早期表达的变化，并探究其与肾病理损伤、肾小管上皮细胞凋亡及PI3K-AKT信号通路的潜在关联。研究得出以下结论：YAP在SA-AKI早期表达和核定位增加，过表达加重肾损伤和炎症反应，而药理学抑制YAP可减轻肾损伤；机制上，YAP介导的肾损伤与PI3K-AKT信号通路失调及凋亡相关蛋白变化有关。这些发现揭示了YAP在SA-AKI早期病理损伤中的关键作用，为疾病进展提供了新见解，并提示靶向YAP或下游通路可能是潜在治疗策略。该论文发表在《Bratislava Medical Journal》。
为开展研究，研究人员主要采用以下关键技术方法：使用两种小鼠模型（腹腔注射脂多糖（LPS，Sigma-Aldrich）诱导和盲肠结扎穿孔（CLP））及人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞，购自上海中乔新舟科技有限公司）体外模型；通过腺相关病毒9（AAV9，上海吉凯基因医学技术有限公司）肾门注射介导YAP过表达，以及维替泊芬（VP）药理学抑制YAP；利用组织病理学染色（HE和PAS）、免疫组化、免疫荧光、TUNEL法检测凋亡、蛋白质印迹（Western blot）、实时定量PCR（qPCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及转录组测序（RNA-seq）等技术评估肾损伤标志物、炎症细胞因子、凋亡蛋白及PI3K-AKT通路蛋白。小鼠（C57BL/6，雄性，6-8周龄）购自辽宁长生生物技术有限公司。
研究结果如下：
**3.1 YAP蛋白水平在LPS诱导的SA-AKI中升高**
通过qPCR检测肾损伤标志物KIM-1和NGAL的mRNA水平，发现LPS注射后24小时和48小时显著升高，血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）也升高，表明模型成功。Western blot显示YAP蛋白在24小时和48小时明显增加，但mRNA无显著变化。免疫荧光显示YAP核定位信号增强。体外HK-2细胞中LPS刺激也增加YAP蛋白表达。提示YAP在SA-AKI早期积累并核转位。
**3.2 VP抑制YAP表达并改善SA-AKI**
预先给予VP（YAP抑制剂）后，Western blot显示YAP蛋白水平降低，qPCR显示肾损伤标志物（KIM-1、NGAL）和炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）mRNA下降，血清Scr、BUN和KIM-1降低。免疫组化显示KIM-1减少，HE染色显示肾小管肿胀、扩张和肾小球坏死减轻。表明VP通过抑制YAP缓解肾损伤。
**3.3 YAP敲低保护LPS诱导的细胞炎症反应**
在HK-2细胞中通过siRNA敲低YAP（验证效率），随后LPS刺激。qPCR显示敲低组KIM-1、NGAL和TNF-α mRNA显著低于对照siRNA组。提示YAP敲低减轻LPS诱导的炎症反应。
**3.4 YAP过表达加重LPS诱导的SA-AKI**
通过AAV9-YAP肾门注射建立肾特异性YAP过表达小鼠，Western blot和qPCR确认过表达。LPS处理后，过表达组肾组织NGAL、KIM-1、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA和蛋白水平升高，血清Scr、BUN和KIM-1也升高。表明YAP过表达加重SA-AKI肾损伤。
**3.5 YAP抑制与凋亡减少和PI3K-AKT通路活性改变相关**
对LPS处理的YAP敲低HK-2细胞进行RNA-seq，KEGG富集分析显示PI3K-AKT通路显著富集。Western blot显示LPS增加PI3K和磷酸化AKT（p-AKT）水平及BAX/BCL-2比值，而YAP抑制（siRNA或VP）降低这些变化。体内TUNEL染色显示VP减少LPS诱导的凋亡细胞。提示YAP抑制通过调节PI3K-AKT通路减少凋亡。
**3.6 YAP过表达加重而VP缓解CLP诱导的SA-AKI**
在CLP模型中，AAV9-YAP过表达增加YAP和NGAL蛋白，并上调炎症因子和损伤标志物mRNA；VP处理则降低这些指标。证实YAP在多种脓毒症模型中均参与肾损伤。
讨论部分总结：研究结果表明YAP蛋白积累与PI3K-AKT信号改变相关，促进炎症进展和肾小管上皮细胞凋亡，从而加重肾损伤。YAP在脓毒症应激下可能作为促凋亡因子，与正常修复中的促存活作用形成对比，体现了上下文依赖性。研究局限性包括缺乏临床组织验证、未评估YAP Ser127磷酸化及经典靶基因、未定量细菌负荷等。结论部分翻译：本研究观察到YAP蛋白水平和核定位在SA-AKI小鼠模型的早中期增加。数据表明YAP积累与PI3K-AKT通路改变相关，这可能促进炎症介质释放和肾小管上皮细胞凋亡，从而加重肾损伤。在实验性SA-AKI中，药理学抑制YAP可减轻炎症反应、减少细胞死亡并改善肾功能。这些发现表明靶向YAP或其下游信号通路可能是脓毒症肾损伤的潜在治疗策略，但需进一步临床验证。
