突然死亡病例中圆环病毒与疱疹病毒共感染检测

《Veterinary Research Communications》：Detection of circovirus and herpesvirus co-infection in suddenly dead

　　

本研究调查了六只普通乌鸦突然死亡的原因。这六只鸟于同一天在波兰中部被发现。研究人员对这些乌鸦进行了剖检，并采集样本进行细菌学、组织病理学和毒理学检查。利用分子方法检测了常见病毒和部分细菌病原体的遗传物质。发现乌鸦营养状况良好，两只鸟脾脏肿大且表面有瘀点。组织病理学检查显示，肝脏出现多发性出血和由单核细胞组成的炎性浸润，肝细胞内出现核内包涵体；肾脏检测出炎症、出血、实质变性和肾小管上皮坏死；肠道发现轻度淋巴细胞性-浆细胞性炎症。针对多种病原体进行了检测，仅针对圆环病毒和疱疹病毒的PCR测试呈阳性。毒理学检测发现极低和微量的杀鼠灵和戊巴比妥。其余结果均为阴性。初步推断其主要死因是首次描述的乌鸦疱疹病毒感染，可能伴随圆环病毒参与。然而，不能排除包括中毒或其他未知病毒在内的其他因素。为了更清晰地描述研究内容，括号内标注了专业术语的英文缩写及原文符号上下标，如H₅N₁等。

研究背景、问题与意义：普通乌鸦作为世界上最大的雀形目鸟类之一，在波兰受到部分保护，其种群数量呈上升趋势。作为杂食性食腐动物，乌鸦在觅食过程中易接触各类病原体。过去曾有报道指出，多种病毒性疾病（如H₅N₁禽流感病毒、西尼罗河病毒等）的爆发导致鸦科动物数量骤降。然而，针对乌鸦圆环病毒与疱疹病毒感染的研究相对匮乏，通常认为这些病毒感染不直接导致突然死亡，或者相关病例记录极少。由于缺乏针对此类突发性死亡事件的系统性诊断，野生动物疾病防控面临挑战。为此，研究人员针对波兰中部发生的六只普通乌鸦同日突然死亡事件开展全面诊断研究。该研究发现了一种新型乌鸦疱疹病毒，并确认了其与圆环病毒的共感染现象，明确了这可能是导致该批次乌鸦死亡的主要原因。这一发现填补了相关病原学研究的空白，对于理解野生鸟类病毒演化、跨物种传播以及制定野生动物保护策略具有重要的流行病学意义。该论文发表在《Veterinary Research Communications》上。

主要关键技术方法：研究样本队列来源于波兰马佐夫舍省拉济明森林中同日发现的六只死亡普通乌鸦（3雌3雄）。研究人员主要采用了以下关键技术方法：首先通过宏观剖检和苏木精-伊红（H-E）染色进行组织病理学观察；其次，采用色谱-质谱联用技术对肌胃内容物和肝脏组织进行广谱毒理学筛查；最后，提取各器官组织的核酸，运用聚合酶链反应（PCR）、逆转录PCR（RT-PCR）及实时定量PCR（RT-qPCR）进行多病原体分子筛查，并对获得的阳性基因片段进行Sanger测序及分子系统进化分析。

研究结果：

剖检：通过对所有乌鸦进行死后宏观检查发现，鸟体营养状况良好，脑膜血管扩张且轻度充血。肝脏病变表现不一，部分出现坏死灶或破裂出血；两只乌鸦出现脾脏肿大及表面瘀点；肾脏中度肿大；胃肠道内容物稀少且伴有血性物质。上述病变提示存在全身性感染及循环障碍。

组织病理学检查：在肝脏中观察到血液淤滞、多发性出血及单核细胞炎性浸润，部分肝细胞内出现核内嗜酸性包涵体。脾脏呈现充血和淋巴滤泡反应性增生。肾脏出现肾小管上皮细胞坏死和实质变性。脑组织可见充血、小胶质细胞增生及中等程度的嗜神经现象，并伴有胶质结节形成。这些病变特征高度提示病毒性病原体引起的系统性损伤。

细胞学、细菌学与毒理学：细胞学检查在肠道内发现少量寄生虫，器官未见细菌，细菌培养无生长。毒理学检测仅在肝脏中检出微量（68.7 μg/kg）的第二代抗凝血杀鼠剂杀鼠灵和痕量（<125 μg/kg）的巴比妥酸盐戊巴比妥，胃内容物未检出。这些浓度远低于致死剂量，不支持毒物致死假说。

分子测试：对 pooled 样本进行的 PCR 检测证实所有乌鸦均携带疱疹病毒和圆环病毒遗传物质。对1号乌鸦的单独器官测试发现，疱疹病毒在肝脏、脾脏和脑组织中阳性，肺和肾脏呈弱阳性。测序分析获得的3个圆环病毒序列和2个疱疹病毒序列已存入GenBank。

讨论与结论：研究人员基于检测结果排除了细菌感染致死和急性毒素中毒的可能性。在毒理学方面，虽然检出了杀鼠灵，但肝脏浓度仅为0.0687 mg/kg，且未表现出典型的抗凝血杀鼠剂中毒的组织病理学特征，因此排除了杀鼠灵作为直接死因。戊巴比妥的浓度极低，也排除了巴比妥类药物中毒。

在病毒学方面，虽然已知圆环病毒可导致淋巴细胞枯竭引发免疫抑制，但本次研究的乌鸦脾脏中未见明显的淋巴细胞枯竭，且成年乌鸦无法检查法氏囊，因此认为圆环病毒可能并非直接致死因素。而通过分子系统进化分析，检测到的疱疹病毒与鹳科等鸟类的疱疹病毒具有部分相似性。该疱疹病毒引起的临床病程迅速，且无年龄易感性，组织病理学上表现为肝脏坏死和神经胶质结节，这一特征与在雁形目中观察到的鸭疱疹病毒感染更为相似。

综合讨论，研究人员得出结论，导致这批乌鸦死亡的主要原因是首次发现的乌鸦疱疹病毒感染，且可能伴随圆环病毒的共感染，而一月低温环境可能作为诱因加速了被疾病削弱鸟类的死亡。同时也不能完全排除未知病毒或低浓度毒素产生的协同影响。