酶促脱氨与糖基化作用对不同脱氨程度下水稻蛋白乳液凝胶行为的调控机制:聚焦于蛋白质结构变化、界面行为及乳液特性分析

《Food Hydrocolloids》:Underlying mechanism of enzymatic deamidation combined with glycosylation on the behaviour of rice protein emulsion gel under different degrees of deamidation: Focus on protein structural changes, interfacial behavior and emulsion characterization

【字体: 大 中 小 】 时间:2026年08月09日 来源:Food Hydrocolloids 13.8

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  摘要:大米蛋白因其低致敏性、均衡的氨基酸组成以及较高的营养价值,被视为食品行业中具有潜力的植物基成分。然而,由于其较差的乳化能力和不稳定的界面行为,难以形成稳定的乳液和乳胶凝剂,这限制了其实际应用。本研究旨在通过酶促脱酰胺辅助糖基化反应,将大米蛋白与壳聚糖结合,制备高溶解度的复合

  

摘要:

大米蛋白因其低致敏性、均衡的氨基酸组成以及较高的营养价值,被视为食品行业中具有潜力的植物基成分。然而,由于其较差的乳化能力和不稳定的界面行为,难以形成稳定的乳液和乳胶凝剂,这限制了其实际应用。本研究旨在通过酶促脱酰胺辅助糖基化反应,将大米蛋白与壳聚糖结合,制备高溶解度的复合材料。研究系统分析了不同程度修饰对蛋白质结构、界面行为、乳液特性及乳胶凝剂性能的影响。结果表明,适度脱酰胺(5%至50%)可显著提高壳聚糖的接枝程度,表现为正ζ电位增加、溶解度提升、表面疏水性降低以及蛋白质构象展开。界面分析显示,50%的大米蛋白-壳聚糖复合物具有最低的三相接触角、最高的蛋白质吸附率以及最理想的吸附动力学特性(扩散、渗透和重排速率均有所提高)。因此,由50%大米蛋白-壳聚糖复合物稳定的乳液具有最小的液滴尺寸和最佳的物理稳定性。流变学、质地学和微观结构分析表明,该复合物形成的乳胶凝剂具有最高的弹性和粘性模量,更为致密均匀的三维网络,以及更稳定的水分分布。不过,过度脱酰胺会导致蛋白质聚集,界面行为下降,从而降低大米蛋白-壳聚糖乳液的稳定性和凝胶化性能。总体而言,适度脱酰胺与糖基化作用相互协同,可优化大米蛋白的结构和界面性质,为设计高性能食品用乳胶凝剂提供了理论依据。

引言

乳胶凝剂是一种复杂的胶体系统,其中乳液液滴与凝胶网络共存,液滴的紧密排列或聚合物的交联使其具有半固体特性。乳胶凝剂的三维网络能够有效阻碍油滴的运动和聚集,使其稳定性远高于液态乳液(Lin, Yang, Qi, Shen, & Xie, 2024)。此外,乳胶凝剂兼具乳液和凝胶的优点,尤其能够将液态油脂转化为结构化的固体物质,模拟固体脂肪的质地和口感,因此在作为脂肪替代品方面具有巨大潜力(Guo, Cui, & Meng, 2023)。同时,乳胶凝剂还具有良好的包封能力和控释功能,能够提升生物活性物质的储存稳定性和生物利用度,因此在药物递送和靶向释放领域也有广泛应用(Zhao, et al., 2025)。不过,目前研究中乳胶凝剂的制备仍面临机械性能较差的瓶颈,这限制了其在各种领域的应用前景。
由于蛋白质在自然界中含量丰富,且能在pH值、温度和压力等环境应力作用下形成稳定颗粒,因此被广泛用作食品工业中的稳定剂(Yan, et al., 2020)。其中,经过改性而具备更强功能的植物基蛋白质,被视为构建具有更好机械性能的食品级乳胶凝剂的理想候选材料。传统的乳胶凝剂主要依靠动物源成分来稳定。随着消费者对“清洁标签”产品的需求不断增加,以植物蛋白为基料的乳胶凝剂也越来越受到重视。蛋白质稳定的乳胶凝剂的形成分为两个连续阶段:先形成乳液,然后再发生凝胶化。在第一阶段,蛋白质会吸附在油水界面,形成稳定的乳液;在第二阶段,吸附在界面上的蛋白质分子会发生热变性并聚集,从而形成三维网络。因此,最终乳胶凝剂的性能与蛋白质的构象及乳液特性密切相关。大米蛋白是一种高质量的植物蛋白,其氨基酸组成均衡,得到了世界卫生组织和联合国粮食及农业组织的认可。此外,它还具有较低的致敏性以及多种生物活性,如降压、降糖和抗菌作用(Al-Doury, Hettiarachchy, & Horax, 2018; Chen, et al., 2022)。因此,对于有特殊饮食需求的群体,如婴儿和素食者来说,大米蛋白是一种非常有价值的植物基蛋白质来源。不过,大米蛋白中含有约80%的谷蛋白,且会通过分子间二硫键发生聚合,从而导致其溶解度和乳化性能较差,这严重限制了其在乳液和乳胶凝剂中的应用。
壳聚糖是一种天然存在的动物源阳离子多糖,以其优异的可生物降解性、生物相容性和粘附性而著称。然而,其较差的水溶性大大限制了其实际应用(Tian, Li, et al., 2023)。为了解决这一问题,人们通过在壳聚糖的氨基上引入季铵基团,合成了季铵化壳聚糖。与未经改性的壳聚糖相比,季铵化壳聚糖在中性、酸性和碱性环境中的溶解度都有显著提升,同时还保留了无毒、生物相容和可生物降解等优良特性(Tian, Li, et al., 2023)。这些优异特性使得季铵化壳聚糖成为进行糖基化反应的理想材料。以往的研究已经证明了季铵化壳聚糖与多种蛋白质的相互作用,包括蛋清蛋白(Liu, et al., 2025)、玉米醇溶蛋白(Yin, et al., 2025)和大豆分离蛋白(Tian, Wang, et al., 2023),这些相互作用显著提升了这些蛋白质的功能性能。据Liu等人(2025)的研究,添加季铵化壳聚糖不仅能提高蛋白质的界面吸附能力,还能增强界面膜的稳定性,进而提升乳液的物理稳定性。不过,大米蛋白中含有大量的疏水性氨基酸、众多的二硫键以及广泛的分子间氢键,这些因素使得其构象较为紧凑,水溶性较低,从而难以与季铵化壳聚糖发生有效的糖基化反应。
蛋白谷氨酰胺酶是一种广泛应用于食品生产中的商业酶,它能特异性地催化谷氨酰胺和天冬酰胺残基的脱酰胺反应,去除蛋白质和多肽中的酰胺基团,而不会破坏其结构(Wang, Cheng, & Tang, 2024)。研究表明,脱酰胺反应会将蛋白质侧链上的酰胺基团转化为羧基基团,从而使蛋白质表面的负电荷增加,部分解开蛋白质的构象,暴露出更多的糖基化位点,进而提升蛋白质的溶解度,使其更容易与多糖发生共价交联(Qiu, Wang, Teng, & Zhao, 2017; Qu, Yang, Wang, et al., 2025)。Huang、Liu和Xie(2026)的研究表明,超声辅助下的蛋白谷氨酰胺酶脱酰胺反应可以通过增强静电斥力并破坏二硫键,有效提升大米蛋白的溶解度,同时还会使蛋白质颗粒尺寸减小,界面活性增强。同样,利用天然深度共晶溶剂进行脱酰胺处理也能提升大米糟蛋白分离物的溶解度和构象稳定性,进一步证明了脱酰胺诱导的结构变化是提升蛋白质功能的重要途径(Shahid, Haq, Hussain, Nawaz, & Xu, 2024)。糖基化反应也被证明能够提升大米蛋白及其水解产物的功能性能。例如,Zhang等人(2025)通过美拉德反应对大米蛋白水解物进行糖基化处理,发现这能显著改变蛋白质的空间构象,暴露出更多亲水性和疏水性区域,从而提升其螯合能力和抗氧化性能。Paraman、Hettiarachchy和Schaefer(2007)的早期研究也表明,糖基化和脱酰胺都是提升大米胚乳蛋白溶解度和乳化性能的有效方法,其中脱酰胺在提升溶解度和乳化活性方面的效果最为显著。尽管以往的研究已经分别证明了脱酰胺和糖基化对蛋白质溶解度、乳化性能和构象稳定性的改善作用,但二者结合后对蛋白质结构、界面行为以及乳胶凝剂性能的协同调控作用至今尚未被深入研究。
基于此,本研究采用酶促脱酰胺辅助糖基化策略,以大米蛋白和壳聚糖为原料,制备出两者之间的共价复合物,并系统研究了不同脱酰胺程度对该复合物的结构特征、界面吸附行为、乳液稳定性以及乳胶凝剂性能的影响。为探究脱酰胺辅助糖基化反应对乳胶凝剂性能的影响,我们从质地特性、流变行为、水分分布以及微观结构等方面对这类乳胶凝剂进行了评估。本研究旨在解决大米蛋白溶解度低、乳化能力弱以及凝胶强度不足等问题,同时开发出一种绿色、安全且机械性能稳定的大米蛋白-壳聚糖乳胶凝剂,并阐明其形成机制。这些研究结果为新型植物基乳胶凝剂产品的开发提供了重要参考。

章节节选

材料

大米由中国黑龙江省北大地康绿色食品有限公司提供。蛋白谷氨酰胺酶购自Amano Enzyme Inc.,其活性为500 U/g。季铵化壳聚糖、尼罗红和尼罗蓝则从上海的Aladdin Biotechnology Co.购买,其余化学试剂均为分析级产品。

大米蛋白及脱酰胺大米蛋白的制备

首先将破碎的大米碾磨并过筛,得到大米粉。然后将大米粉溶解在水中,再将溶液的pH值调至12,在持续搅拌的情况下

脱酰胺程度与降解程度

脱酰胺反应是指蛋白质中的酰胺基团(–CONH2)发生水解,转变为羧基基团(–COOH)的反应。大米蛋白的脱酰胺程度与脱酰胺时间呈正相关关系(见图1A)。在最初的1小时内,脱酰胺程度迅速上升,之后逐渐增加,大约在25小时时达到峰值。在脱酰胺反应的初期,蛋白谷氨酰胺酶会破坏维持蛋白质结构的化学键,从而导致蛋白质的构象展开(Wei, Plazaola,

结论

综上所述,本研究系统证明了酶促脱酰胺辅助糖基化反应是一种双重修饰策略,能够有效克服大米蛋白在形成稳定乳胶凝剂方面的固有缺陷。从机制上看,蛋白谷氨酰胺酶催化的脱酰胺反应会将中性的酰胺基团转化为带负电的羧基基团,这不仅能够破坏蛋白质的疏水聚集体并使其构象展开,还能暴露出原本隐藏的赖氨酸残基,从而形成

作者贡献声明

王忠江:项目管理、资金申请。孙福伟:论文初稿撰写、软件使用、概念构思。吕婵婷:实验方法设计。张硕:实验实施、数据整理

未引用参考文献

Chen et al., 2025; Guo et al., 2025; Huang et al., 2022; Li et al., 2025; Li et al., 2025; Li et al., 2025; Qu et al., 2025; Tian et al., 2023; Wang et al., 2024; Xu et al., 2025; Yin et al., 2025; Zhang et al., 2025.

资助情况

本研究得到了黑龙江省“揭榜挂帅”关键科学技术研究项目的支持(项目编号:2023ZXJ08B02)。

利益冲突声明

在提交本稿件过程中,作者们不存在任何利益冲突,且所有作者均已同意发表本篇论文。

致谢

作者们承认在撰写本稿件时使用了人工智能辅助语言工具来提升文本的语法和表达清晰度。所有的科学内容、数据分析以及研究结论均为作者们的原创成果。作者们已仔细审核所有由人工智能生成的内容,并对其准确性、完整性和原创性承担全部责任。
Fuwei Sun|Shuo Zhang|Chanting Lv|Zhongjiang Wang
中国黑龙江省哈尔滨市东北农业大学食品科学学院,邮编150030
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