一种用于检测α-3乙酰胆碱受体抗体的新型生物发光细胞检测方法：与现有方法的多中心比较

《Acta Neuropathologica Communications》：A new bioluminescent cell-based assay for the detection of alpha-3 acetylcholine receptor antibodies: a multicentre comparison with current methods

　　

摘要

自身免疫性自主神经节病（AAG）是一种与针对神经节乙酰胆碱受体α3亚基的自身抗体相关的自主神经系统疾病。gnACHR抗体通过受体内化发挥作用，但目前大多数gnACHR诊断检测方法只能检测抗体结合情况。因此，我们开发了一种新的基于生物发光的细胞检测方法（BLIA），用于检测能够内化的gnACHR抗体。该检测方法是将患者血清与表达表面gnACHR的活IMR-32细胞一起孵育，然后利用带有NanoBiT标记的检测抗体和一种新型的分裂荧光素酶系统来测定剩余的表面gnACHR含量。通过与参考血清孵育的细胞进行比较，计算受体内化的百分比，若受体内化比例超过20%，则判定为存在gnACHR抗体。该检测方法使用20名AAG患者的46份样本以及203份对照样本进行了验证。随后，我们将其与四种现有检测方法进行了比较：（1）放射免疫沉淀法（RIPA），（2）流式细胞术内化检测法（FCIA），（3）细胞检测法（CBA-1），即用α3β4 gnACHR亚基转染HEK293T细胞，以及（4）经过优化的CBA-2，即在转染RIC3和NACHO蛋白的基础上再加入1 mM尼古丁进行孵育。BLIA检测gnACHR抗体的灵敏度和特异性均为100%（AUROC=1.0），能够检测到浓度低于0.1 pM的抗体所引发的受体内化效应。其结果与CBA-2完全一致（Cohen’s kappa=1）。相比而言，RIPA的灵敏度（98%）和特异性（95%）略低，FCIA的特异性也略有下降（95%），而CBA-1的灵敏度则显著更低（69%，p=0.0003）。总体而言，BLIA在检测AAG患者体内的gnACHR抗体方面具有完美的临床灵敏度和特异性，而且通过检测抗体引发的受体内化效应，可为现有检测方法提供合适的替代方案。未来有必要进一步研究其在监测疾病严重程度或治疗反应方面的应用潜力。