《Veterinary Oncology》：Histomorphological features and PD-L1 expression in canine gastric carcinoma using full thickness biopsy
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背景：犬胃腺癌（CGC）是一种罕见且侵袭性强的恶性肿瘤，临床预后差，其微观肿瘤架构与免疫微环境特征的生物学意义尚不明确。方法：本研究在40例全层活检标本上评估了有丝分裂计数、肿瘤出芽（TB）、浸润深度、血管内侵犯、总间质百分比（TSP）及肿瘤浸润淋巴细胞（TI
背景：犬胃腺癌（CGC）是一种罕见且侵袭性强的恶性肿瘤，临床预后差，其微观肿瘤架构与免疫微环境特征的生物学意义尚不明确。方法：本研究在40例全层活检标本上评估了有丝分裂计数、肿瘤出芽（TB）、浸润深度、血管内侵犯、总间质百分比（TSP）及肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）等关键组织形态学特征，并通过免疫组化检测免疫检查点标志物程序性死亡配体1（PD-L1）的表达。结果：CGC高度侵袭，多数肿瘤深达肌层与浆膜；浸润深度与血管内侵犯呈正相关，后者见于超半数病例；浸润前沿TB频繁；TILs分布于浸润前沿、瘤内间质及瘤周，TSP与TILs强正相关，提示间质架构与免疫细胞分布密切相关；PD-L1在肿瘤细胞以胞质表达为主，且与有丝分裂活性正相关；多数组织形态参数未独立关联生存，探索性分析仅PD-L1评分与较短生存相关。结论：上述发现凸显CGC的侵袭性，以及TB、间质组成与TILs互作塑造肿瘤生物学的复杂性；受PD-L1表达部分影响的抗肿瘤环境可能促成不良临床结局。
研究背景与立项依据
犬胃腺癌（Canine gastric carcinoma, CGC）占犬胃肠道肿瘤约8%，在所有犬肿瘤中不足1%，是一种罕见但高度侵袭的恶性肿瘤，确诊后中位生存常少于3个月，且诊断时多已转移。既往人类胃癌（Gastric carcinoma, GC）研究显示，浸润深度、肿瘤间质百分比（Tumor stromal percentage, TSP）、肿瘤出芽（Tumor budding, TB）、肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor-infiltrating lymphocytes, TILs）等组织形态参数可提示侵袭与转移潜能，但CGC中因内镜活检表浅，系统评估受限。同时，CGC癌发生路径中上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）、Wnt/β-catenin、p53、Ki-67等已有报道，但抗肿瘤免疫尤其是程序性死亡配体1（Programmed death-ligand 1, PD-L1）检查点通路在CGC中尚未被剖析。研究人员此前在混合内镜与全层标本队列中报告过CGC分类、炎症、螺杆菌与黏附/细胞周期标志物，本随访研究聚焦全层标本的组织形态学特征及其与PD-L1免疫检查点激活、生存时间的关联。该研究发表于《Veterinary Oncology》。
主要关键技术方法
研究人员从既往发表队列中抽取2009–2019年收集的40例手术全层胃活检（38例来自VPG Histology英国，2例来自英国皇家兽医学院女王母亲动物医院），由委员会认证兽医解剖病理学家依WHO与Lauren分类判读苏木精-伊红（Hematoxylin and eosin, H&E）切片，计数10个高倍视野（2.37 mm2）有丝分裂像，评估浸润深度（黏膜下/肌层/浆膜/网膜计1–4分）、血管内侵犯、TB（浸润前沿20倍单热点计数）、TSP（10倍最浸润区半定量）、TILs（前沿/瘤内间质/瘤周H&E半定量，另用Zeiss扫描与深度学习单细胞管线得AI淋巴细胞分数）。PD-L1免疫组化采用Invitrogen PA5-20343（1:200）于Bond-Max仪检测，以犬扁桃体B细胞淋巴瘤为阳性对照，肿瘤细胞胞质/膜着色按阳性百分比×强度（1–3）得PD-L1评分。生存数据经转诊医院问卷或病历收集31/40例，总体生存自组织病理诊断计至死亡/安乐死，统计用Kaplan-Meier、log-rank、Mann-Whitney U、Kruskal-Wallis、Spearman、单变量Cox比例风险回归（GraphPad Prism 10）。
研究结果
研究人群：40犬中位年龄8岁，雄17雌22，金毛寻回犬/拳师犬/斯塔福郡斗牛梗居多；31例有生存数据，中位生存20天。
肿瘤分类：WHO下未分化20（50%）、印戒7（17.5%）、管状6、黏液6、乳头1；Lauren下不确定20、肠型13、弥漫7。Kaplan-Meier显示仅WHO分类分层生存（p=0.019），管状亚型中位生存1天最短，黏液101天最长；Lauren无分层力（p=0.666），血管内侵犯与否生存无差（p=0.140）。
肿瘤细胞相关形态与PD-L1：有丝分裂中位14/10高倍视野；浸润深，仅1例限黏膜下，未分化35%达网膜；血管内侵犯22/40（55%），有侵犯中位生存4.5天vs无侵犯79天；TB中位18，67.5%高出芽（≥10）；PD-L1全部阳性，胞质为主偶膜染，中位阳性细胞50%、中位评分80，正常胃黏膜低表达，瘤细胞显著高于自身正常上皮（p<0.001）。
肿瘤微环境：TSP中位20%（64.1%高TSP>10%）；TILs中位19%，前沿17.5%/间质25%/瘤周20%；AI淋巴细胞分数与各亚型手动估计中等正相关（Spearman r=0.378, p=0.016）。
相关与生存分析：Spearman中仅PD-L1评分（r=-0.618, p<0.001）与TB（r=-0.368, p=0.042）与生存负关；单变量Cox仅PD-L1评分显著（HR=1.009, p=0.001），ROC-AUC=0.746，截值60分时高表达中位生存27.5天vs低表达77天（p=0.004）；有丝分裂与PD-L1评分正关（r=0.539, p=0.002），高PD-L1组有丝分裂更高（p=0.015）；浸润深度与血管内侵犯正关（r=0.453, p=0.009）；TSP与TILs强正关（r=0.785, p<0.001）；TSP、手动TILs、AI淋巴细胞分数均与生存不显著。
讨论部分总结
研究人员指出CGC侵袭性表现为深浸润、TB、血管侵犯；WHO但未分化/管状等亚型预后不一致，可能因队列小且亚型不均。有丝分裂与生存弱负向但未显著，不同于既往Ki-67中等负相关，系有丝分裂仅捕M期而Ki-67跨周期且亚型构成差异。TB与生存单相关未入回归，提示非独立预后，其潜在EMT基础在CGC中需结合间质成分研究。TILs非预后但与TSP强相关，暗示癌相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts, CAF）经TGFβ致密基质屏障限制T细胞浸润，构成免疫排阻。PD-L1全阳性且胞质为主，有别于仅认膜染的旧报；PD-L1评分唯一关联短生存且与有丝分裂正关，提示增殖与免疫检查点激活并存，但PD-L1不与TIL密度相关，表明检查点激活可脱离淋巴细胞丰度而发生，淋巴细胞虽被招募却被PD-L1功能抑制。局限含样本量相对变量少致过拟合风险、乳头状亚型仅1例、9例缺生存、缺独立正常胃对照（以同体正常黏膜缓解）。
结论部分翻译
本研究表明肿瘤出芽与PD-L1表达与犬胃腺癌不良结局相关，而多数常规组织形态学参数预后效用有限。鉴于生存数据有限及分析探索性，这些关联在更大队列验证前须谨慎解读。整体发现强调侵袭性肿瘤架构、间质互作与免疫检查点激活共同影响CGC生存结局。需进一步研究纳入肿瘤细胞与瘤内微环境详细免疫谱，以深化CGC癌发生理解并推进预后分层与治疗策略。
