《Lasers in Medical Science》：Combination of Bauhinia monandra extract and laser acupuncture reduces carrageenan-induced paw edema
编辑推荐：
目的：研究Bauhinia monandra Kurz乙醇提取物（EEB）单独及联合激光针灸（LA）在角叉菜胶（carrageenan）诱导的足爪水肿模型中的抗炎作用。方法：通过高效液相色谱-高分辨质谱（HPLC-HRMS）对EEB进行表征，并在RAW 264
目的：研究Bauhinia monandra Kurz乙醇提取物（EEB）单独及联合激光针灸（LA）在角叉菜胶（carrageenan）诱导的足爪水肿模型中的抗炎作用。方法：通过高效液相色谱-高分辨质谱（HPLC-HRMS）对EEB进行表征，并在RAW 264.7和J774A.1巨噬细胞中测试细胞活力和一氧化氮（NO）产生。在体内实验中，对足爪水肿的雌性BALB/c小鼠分别给予EEB（100或200 mg/kg）单独、联合LA（808 nm，120 mW，3 J，25 s）于穴位ST36和SP6，或局部激光治疗。在诱导后4小时内测量足爪水肿，并定量细胞因子水平（白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6））。结果：EEB在体外无细胞毒性，并显著减少NO产生。植物化学分析显示酚类化合物占主导，包括黄酮类。在体内，EEB和LA均显著减轻水肿。值得注意的是，EEB200+LA组在足爪水肿和促炎细胞因子方面的减少与地塞米松（dexamethasone）组相当。结论：EEB在体外和体内均表现出抗炎活性。将EEB（200 mg/kg）与LA联合使用产生了比单独治疗更一致性的抗炎反应，特别是在减少水肿和促炎细胞因子方面。这些发现支持进一步研究，但需要更大样本量和慢性模型才能进行临床声明。
炎症过程是机体重要的生物学反应，但其过度活化会显著降低生活质量。传统治疗主要依赖非甾体抗炎药（NSAIDs）和皮质类固醇，但长期使用可导致严重全身不良反应，亟需开发更安全的治疗策略。角叉菜胶（carrageenan，一种诱导急性炎症的试剂）诱导的足爪水肿模型是评估抗炎药物潜力的经典方法，可模拟急性炎症的典型特征，如血管通透性增加、血浆渗出、炎症细胞浸润及促炎介质释放。在促炎介质中，白细胞介素-1β（IL-1β，一种促炎细胞因子）和白细胞介素-6（IL-6，一种急性期反应细胞因子）在炎症放大和维持中起核心作用，其下调常作为抗炎活性的指标。Bauhinia属（豆科）植物因其丰富的次生代谢产物和已知的抗炎抗氧化特性而受到关注，其中Bauhinia monandra Kurz在民间医学中广泛使用，已有文献报道其抗氧化、抗炎和降血糖作用，但其抗炎潜力在控制性实验模型中仍未被充分探索。此外，激光针灸（LA，一种光生物调节疗法）通过向穴位施加低强度激光照射，可产生抗炎、镇痛和生物刺激效应，实验证据表明LA能减少促炎细胞因子、降低氧化应激并增加线粒体ATP（腺苷三磷酸）产生，从而促进组织再生。然而，植物疗法与LA联合使用的增强效应在科学文献中仍存在显著空白。为探索这一假设并满足对更安全干预措施的需求，本研究旨在探讨Bauhinia monandra Kurz乙醇提取物（EEB）单独及联合LA在角叉菜胶诱导足爪水肿模型中的抗炎作用，以支持新整合疗法的发展。研究人员通过体外实验（细胞活力、NO产生）和体内实验（小鼠足爪水肿、细胞因子水平）评估了EEB和LA的效果，并利用高效液相色谱-高分辨质谱（HPLC-HRMS）进行植物化学分析。结果表明，EEB在体外无细胞毒性并抑制NO产生，在体内可减轻水肿和促炎细胞因子，EEB200+LA联合组的抗炎效果与地塞米松（dexamethasone，一种阳性对照药物）相当，提示协同抗炎作用。该研究为开发植物提取物与光生物调节的联合抗炎策略提供了实验基础，论文发表在《Lasers in Medical Science》。
研究人员为开展研究用到的关键技术方法包括：1）植物提取物制备与表征：采用Bauhinia monandra Kurz叶片，用绝对乙醇提取获得EEB，冻干储存；通过HPLC-HRMS进行代谢物鉴定，发现酚类化合物（如黄酮类、酚酸）占主导。2）体外实验：在RAW 264.7和J774A.1巨噬细胞中，使用MTT法检测细胞活力，Griess法检测一氧化氮（NO）产生，细胞经脂多糖（LPS）和干扰素-γ（IFN-γ）刺激。3）体内实验：使用雌性BALB/c小鼠（6-8周龄，购自UFOP中央动物房），通过角叉菜胶（2.5%）注射左足垫诱导水肿，右足注射PBS作为对照。治疗包括口服EEB（100或200 mg/kg）、LA（808 nm，120 mW，3 J，25 s）于穴位ST36和SP6、局部激光（相同参数）以及联合治疗。在诱导后1-4小时测量足爪厚度，计算水肿；4小时后处死，取足垫组织匀浆，通过ELISA检测IL-1β和IL-6水平。
研究结果分为以下四个部分：
**1. 体外分析**：通过MTT法检测，EEB在10-100 μg/mL浓度下对J774A.1和RAW 264.7巨噬细胞均无细胞毒性（细胞活力均高于70%阈值）。通过Griess法检测，EEB在100、33.3和10 μg/mL浓度下均显著抑制LPS/IFN-γ刺激的NO产生（与刺激对照组相比，p<0.05），表明EEB具有体外抗炎活性。
**2. 植物化学特征**：通过HPLC-HRMS分析，EEB中主要检出酚类化合物，包括黄酮类（如槲皮素、儿茶素、山奈酚7-O-葡萄糖苷、芹菜素葡萄糖苷、槲皮素3,7-二-O-葡萄糖苷、杨梅素3-O-木糖苷、芦丁）和酚酸（如没食子酸、没食子酸甲酯、原儿茶酸），表明Bauhinia monandra具有多样化的酚类代谢谱。
**3. 联合治疗对足爪水肿的影响**：角叉菜胶诱导的水肿在3小时达峰值（0.528±0.025 mm）。LA（穴位）和局部激光均显著减轻水肿，局部激光效果与地塞米松在3、4小时无显著差异。EEB（100或200 mg/kg）从2小时起显著减轻水肿。EEB100+LA组与EEB100单独相比无额外显著效果；而EEB200+LA组在4小时时水肿减少显著优于EEB200单独组（p=0.0437），且与地塞米松组无统计学差异，表明EEB200联合LA可产生与参考药物相当的抗水肿效果。
**4. IL-1β和IL-6调节**：地塞米松和局部激光均显著降低IL-1β和IL-6水平。EEB200仅降低IL-6水平（与角叉菜胶+PBS组相比）。EEB200+LA组与EEB200单独相比，IL-1β水平显著降低。LA（穴位）未显著降低IL-1β或IL-6水平。这些结果表明，EEB200联合LA可更有效地抑制促炎细胞因子，特别是IL-1β。
讨论部分总结：研究人员认为，EEB的酚类化合物（尤其是黄酮类）是其主要抗炎活性成分，这与黄酮类调节诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的能力一致。LA可能通过神经免疫通路（如NF-κB调节）和增加线粒体ATP产生发挥抗炎效应。局部激光与LA相比，在细胞因子调节上表现出更直接的局部作用。EEB与LA联合的增强效应可能源于光生物调节与植物化学物质生物活性的相互作用。研究局限性包括：仅使用急性模型、固定激光参数、单批次提取物、样本量较小（n=5/组）、手动约束动物可能引起应激等。结论部分翻译如下：Bauhinia monandra Kurz乙醇提取物在角叉菜胶诱导模型中通过抑制巨噬细胞NO产生以及减少足爪水肿和促炎细胞因子IL-1β和IL-6展现出显著抗炎活性。此外，激光针灸（LA）——无论是应用于ST36和SP6穴位还是局部应用——均能有效控制炎症反应。值得注意的是，B. monandra Kurz提取物与激光针灸联合增强了这些效果，产生了与参考药物治疗相当的反应，且无细胞毒性证据。这些方法的联合导致增强的抗炎效应，可能归因于光生物调节诱导的细胞调节与植物化学物质生物活性作用之间的相互作用。然而，鉴于本研究是在急性炎症的临床前模型中进行的，需要进一步研究来阐明所观察效应的潜在机制，并确定该方法在更复杂实验模型中的适用性。
