成熟皮肤新型药妆策略：褪黑素–N-乙酰半胱氨酸乳膏的抗氧化活性、体外透皮渗透及初步临床功效

《Antioxidants》：A New Cosmeceutical Approach for Mature Skin: Antioxidant Activity, In Vitro Permeation, and Preliminary Clinical Efficacy of Melatonin–N-Acetylcysteine Creams

　　

皮肤老化与氧化应激、线粒体功能障碍、细胞外基质改变及屏障功能受损相关，这为成熟皮肤抗氧化药妆品研究提供依据。研究人员考察了褪黑素（melatonin）与N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine, NAC）的抗氧化活性、不同乳膏配方中褪黑素的体外透皮渗透，以及在55–65岁女性中的初步临床表现。抗氧化活性采用2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）与2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)/Trolox等效抗氧化能力（ABTS/TEAC）法评估。褪黑素经Strat-M?膜透皮渗透采用Franz扩散池评价，并以经验证的高效液相色谱-光电二极管阵列检测法（HPLC-PDA）定量。临床变化于28天内采用Glogau皱纹量表与下面部下垂量表评估。NAC在DPPH法中抗氧化活性强于褪黑素，半数抑制浓度（IC50）分别为5.96±1.02与530.11±48.63 μg/mL。褪黑素24小时累积透量因配方而异，介于81.27±17.47至1043.48±33.43 μg/cm2。28天后眼周皱纹与下面部下垂评分降低。上述初步发现支持进一步研究褪黑素–NAC乳膏用于成熟皮肤，但本膜模型未评估皮肤滞留，临床观察需在更大规模对照研究中确认。

研究背景与立项依据

皮肤老化自50–55岁后日益显著，表现为表皮结构、胶原与弹性蛋白合成、屏障功能、水合及经表皮失水（TEWL）的渐进改变，氧化应激通过脂质过氧化、DNA与蛋白损伤、低度炎症及细胞外基质降解参与该过程。褪黑素因其富电子吲哚结构具直接/间接抗氧化、光保护及改善水合弹性作用受关注；N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为含巯基谷胱甘肽前体，具直接化学活性与调节细胞内氧化还原稳态潜力。二者单用已有市售产品，但联合用于成熟皮肤的配方研究有限，且透皮行为依赖载体架构。研究人员据此开展化学抗氧化、体外膜渗透与初步临床三联评价。

主要技术方法概述

研究人员采用DPPH与ABTS/TEAC两种无细胞自由基清除实验比较褪黑素与NAC化学活性；以Franz扩散池结合Strat-M?合成膜（非解剖皮肤，不反映角质层滞留）评价六种乳膏（F1/F14/F27基底×含/不含NAC）中褪黑素24小时透量，受体液为pH 7.4磷酸盐缓冲液，HPLC-PDA定量；临床部分经伦理审批，纳入6名55–65岁Fitzpatrick II–IV女性，采用受试者与评估者双盲split-face设计，右左脸分别用F1NACM与F27NACM，以Glogau眼角纹量表与六级的下面部下垂量表在D1与D29评估，统计用GraphPad Prism及Welch/ANOVA。

研究结果

3.1 抗氧化活性：DPPH中NAC IC₅₀ 5.96±1.02 μg/mL远低于褪黑素530.11±48.63 μg/mL（抗坏血酸最强0.577±0.012）；ABTS/TEAC中NAC为30.02±4.93 mmol/L，褪黑素8.76±0.54 mmol/L，NAC约高242%。结论：无细胞条件下NAC直接自由基清除强于褪黑素，但不代表细胞内线粒体保护或谷胱甘肽合成能力。

3.2 配方制备：六种O/W或W/O乳膏基于预优化F1(W/O)、F14(O/W+Ceteareth-20)、F27(O/W+聚甘油-3甲基葡萄糖二硬脂酸酯)加入恒定褪黑素与（可选）NAC，含透明质酸、芦荟、Acmella提取物、α-生育酚等辅效物。

3.3 HPLC方法：C18柱，水-乙腈52:48，223 nm检测，0.5–50 μg/mL线性R²=0.9997，符合ICH M10残留标准。

3.4 体外渗透：24小时累积透量F1M最低98.79±25.64 μg/cm²（1.62%），F14NACM最高1181.92±49.30 μg/cm²（20.87%）；稳态通量F1M 1.62±0.66 μg·h^?1·cm^?2，F14NACM 39.51±2.94。NAC在某些基底中伴随受体液褪黑素量增加，但Strat-M?无法区分膜内滞留与皮肤层分布。

3.5 临床功效：F1NACM眼角Glogau由2.33±0.52降至1.50±0.55（降36.11%，p=0.002），F27NACM降30.56%（p=0.013）；下面部下垂均由3.67±0.52降至3.17±0.75（降13.89%，p=0.038）。两配方间无统计学差异，83.3% vs 66.7%受试者眼周改善。

讨论与结论翻译

讨论指出，氧化应激为老化核心机制，文献支持褪黑素线粒体保护及NAC谷胱甘肽补充的抗老潜力，但本研究未测线粒体、ROS、GSH、胶原代谢或屏障参数，临床无空白载体对照、样本仅6人、含多效辅料，故不能归因褪黑素/NAC单独作用。透皮实验仅作比较筛选，皮肤滞留需人/猪皮胶带剥离分区定量。NAC气味限制其面部高浓度使用，褪黑素浓度参照既往0.01%–12.5%跨度选取。

结论（译）：NAC在DPPH与ABTS/TEAC中化学清除力强于褪黑素；六种乳膏透黑素曲线各异，证明载体影响体外透量但不证明皮肤层滞留；28天F1NACM与F27NACM令Glogau与下垂评分下降，但因样本小、无载体对照、含其他活效成分，仅为初步观察而非确证功效。后续需用生物皮肤模型、分区定量、仪器测量及大样本随机对照确认。

（本文发表于MDPI《Antioxidants》2026年15卷991文，罗马尼亚专利申请RO 139284 A0保护配方平台。）