《Brain Research Bulletin》：miR-92a Agomir protects against ischemic stroke by suppressing oxidative stress, inflammation, excitotoxicity, and p53-mediated apoptosis
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在MCAO（大脑中动脉闭塞）大鼠中，miR-92a Agomir减少了神经功能缺损和梗死体积。miR-92a Agomir抑制了氧化应激、炎症和兴奋性毒性。miR-92a Agomir下调了GCH1（GTP环化水解酶1）、GRIN1（NMDA受体亚基1）、NO
在MCAO（大脑中动脉闭塞）大鼠中，miR-92a Agomir减少了神经功能缺损和梗死体积。miR-92a Agomir抑制了氧化应激、炎症和兴奋性毒性。miR-92a Agomir下调了GCH1（GTP环化水解酶1）、GRIN1（NMDA受体亚基1）、NOS1（一氧化氮合酶1）、NOX1（NADPH氧化酶1）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）和p53（p53蛋白）。miR-92a Agomir保护了血脑屏障（BBB）完整性并减轻了脑水肿。miR-92a Agomir增加了SOD（超氧化物歧化酶）和CAT（过氧化氢酶）活性，并降低了GSSG（氧化型谷胱甘肽）水平。
【论文解读】
脑卒中是全球第二大死因，每年约导致550万人死亡，且高达50%的幸存者遗留慢性残疾，给社会和经济带来沉重负担。缺血性脑卒中常发生于动脉瘤、镰状细胞贫血、心房颤动或心肌梗死患者，其核心治疗目标在于预防或减轻缺血性损伤，而诱导缺血耐受是一种有前景的策略。再灌注后，脑细胞线粒体过量产生活性氧（ROS），引发氧化损伤；此时NADPH氧化酶1（NOX1）和一氧化氮合酶1（NOS1）的上调进一步加剧ROS积累。GTP环化水解酶1（GCH1）合成四氢生物蝶呤（BH4），后者作为芳香族氨基酸羟化酶和一氧化氮合酶的辅因子，缺血/再灌注后GCH1活性、BH4水平及NOS活性均升高，抑制GCH1可减轻梗死程度。内源性抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）在大量自由基积累时被耗竭，而氧化型谷胱甘肽（GSSG）升高则成为氧化应激的标志。谷氨酸受体过度激活，尤其是NMDA受体亚基GRIN1，导致细胞内钙超载并引发兴奋性毒性，激活磷脂酶和蛋白酶，驱动炎症、水肿、膜降解和神经元死亡。转录因子p53在缺血性脑卒中中调节坏死和凋亡通路，抑制p53可增强缺血组织的动脉生成。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为急性期蛋白，在全身炎症和卒中发病中起核心作用。因此，评估与氧化应激（NOX1、NOS1、GCH1、SOD、CAT、GSSG）、兴奋性毒性（GRIN1）、炎症（TNF-α）和凋亡（p53）相关的因子，有助于阐明脑缺血的治疗效果。MicroRNA（miRNA）是单链非编码RNA，调控基因表达、细胞间通讯、分化、增殖和死亡，在缺血性卒中中发挥重要作用。miR-92a作为miR-17-92簇的成员，在缺血后上调并具有抗血管生成活性，但其在脑缺血中的具体机制尚不清楚。尽管已有研究表明miR-92a水平在缺血性卒中患者中下降，并可作为循环生物标志物，但miR-92a调控是否能够同时影响氧化应激、炎症、兴奋性毒性和凋亡等多条通路，仍缺乏直接证据。为此，研究人员设计了本研究，旨在通过miR-92a-3p Agomir和Antagomir预处理，在大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型中探讨miR-92a对脑缺血损伤的保护作用及其分子机制。
研究人员采用115只雄性Wistar大鼠（250-350 g，来自伊朗巴斯德研究所），分为假手术组（Sham，n=25）、MCAO组（n=30）、miR-92a Agomir+MCAO组（n=30）和miR-92a Antagomir+MCAO组（n=30）。通过立体定位注射将miR-92a Agomir或Antagomir注入右侧纹状体，24小时后行MCAO手术（60分钟闭塞），再灌注24小时后进行各项指标检测。主要技术方法包括：神经功能缺损评分（Longa 5点量表及行为测试组合，总分0-18）；TTC染色测量梗死体积（总半球、皮层、梨状皮层-杏仁核（Pir-Amy）、纹状体）；湿干重法测定脑水肿；伊文思蓝（EBD）外渗法评估血脑屏障（BBB）通透性；实时定量PCR检测GCH1、GRIN1、NOS1、NOX1的mRNA表达（以β-actin为内参）；比色法检测SOD、CAT活性和GSSG水平；免疫组化染色计数TNF-α和p53阳性细胞；H&E染色观察组织病理学变化并计算固缩神经元百分比。
研究结果如下：
3.1 miR-92a对神经功能缺损评分的影响：通过行为学测试（尾部抬起、平衡木、感觉功能、运动功能、反射活动）及总分评估，发现miR-92a Agomir预处理显著降低总NDS（P=0.004），并显著改善尾部抬起（P=0.003）、感觉功能（P=0.04）和反射活动（P=0.0008）评分，而Antagomir组无显著变化。表明Agomir改善了感觉运动功能。
3.2 miR-92a对梗死体积的影响：TTC染色显示，Agomir组总梗死体积（41.22±1.75 mm3）较MCAO组（237.72±15.25 mm3）显著减少（P<0.0001），皮层、Pir-Amy和纹状体梗死体积也均显著降低（P<0.001），而Antagomir组无显著变化。
3.3 miR-92a对脑水肿的影响：湿干重法测定脑水含量，Agomir组皮层（79.64±1.72%）、Pir-Amy（80.12±2.55%）和纹状体（77.77±3.41%）的脑水含量均显著低于MCAO组（分别为83.62±0.95%、83.41±0.4%、83.29±1.03%），表明Agomir减轻了脑水肿，Antagomir无效。
3.4 miR-92a对BBB通透性的影响：EBD外渗检测显示，Agomir组皮层（0.10±0.01）、Pir-Amy（0.22±0.04）和纹状体（0.27±0.03）的EBD浓度均显著低于MCAO组（0.18±0.005、0.33±0.06、0.58±0.08），表明Agomir保护了BBB完整性，Antagomir无显著效应。
3.5 miR-92a对GCH1、GRIN1、NOS1、NOX1 mRNA表达的影响：qPCR结果显示，Agomir组在皮层、Pir-Amy和纹状体中GCH1、GRIN1、NOS1、NOX1的mRNA表达均显著低于MCAO组（P<0.01至P<0.0001），而Antagomir组无显著变化，表明Agomir下调了与氧化应激、兴奋性毒性相关的基因。
3.6 miR-92a对抗氧化酶活性和GSSG水平的影响：比色法检测显示，Agomir组在皮层、Pir-Amy和纹状体中SOD和CAT活性均显著高于MCAO组，GSSG水平显著低于MCAO组（P<0.05至P<0.0001），表明Agomir增强了内源性抗氧化防御并减轻了氧化应激。
3.7 miR-92a对TNF-α和p53阳性细胞的影响：免疫组化计数显示，Agomir组TNF-α阳性细胞比例（27.01%±0.45）和p53阳性细胞比例（20.05%±0.92）均显著低于MCAO组（47.66%±2.31和55.33%±3.02，P<0.05和P<0.01），表明Agomir抑制了炎症和凋亡，Antagomir无显著效应。
3.8 miR-92a对组织学参数的影响：H&E染色显示，Agomir组固缩神经元百分比（28.3%）显著低于MCAO组（40.2%），且病理改变（空泡化、炎性细胞浸润、坏死等）较轻，而Antagomir组（37.4%）与MCAO组无显著差异，表明Agomir减少了神经元死亡。
讨论部分指出，这是首次证明miR-92a Agomir在缺血性卒中模型中的神经保护作用，其机制涉及同时抑制氧化应激、炎症、兴奋性毒性和p53介导的凋亡，通过下调GCH1、GRIN1、NOS1、NOX1、TNF-α和p53，上调SOD和CAT，降低GSSG实现。miR-92a Antagomir无显著效应，可能源于缺血本身已使miR-92a降至功能极限水平（地板效应）或补偿机制。研究还讨论了miR-92a可能通过MAPK p38通路和PI3K/AKT信号通路发挥保护作用，并与已知神经保护性miRNA（如miR-21、miR-125b）进行比较，强调miR-92a Agomir的多靶点特点。方法学局限性包括预处理设计（不直接对应临床急性治疗）、缺乏直接靶点验证（如荧光素酶报告实验）、仅雄性大鼠、单时间点评估等，提示未来需进行延迟给药、大型动物模型及直接靶点验证研究。
研究结论翻译如下：miR-92a Agomir预处理显著减轻了神经功能缺损，减少了梗死体积，保护了血脑屏障完整性，并减轻了脑水肿。这些保护作用伴随着GCH1、GRIN1、NOS1、NOX1、TNF-α和p53的下调，以及SOD和CAT活性的增加和GSSG水平的降低。组织学分析证实Agomir处理组固缩神经元减少，表明神经元死亡减轻。相比之下，miR-92a Antagomir预处理在所有测量参数中均未产生显著变化，这种缺乏效应可能反映了地板效应或补偿机制，而非表明内源性miR-92a下调无害；缺血损伤本身可能已将miR-92a降至功能限制性水平，因此进一步抑制不会加重损伤。综合来看，这些结果首次提供了证据，表明miR-92a调控通过多个靶点同时抑制氧化应激、兴奋性毒性、炎症和凋亡，包括新的卒中靶点GCH1和GRIN1。miR-92a Agomir的多靶点特征与miR-17-92簇在协调缺血损伤反应中的既定调节作用一致。重要的是，这是首次将miR-92a与GCH1和GRIN1在卒中中的调控联系起来。尽管预处理设计限制了直接的急性治疗转化，但这些机制性见解为未来评估缺血后给药策略提供了强有力的依据。直接靶点验证（荧光素酶报告实验、RNA免疫沉淀）对于确认miR-92a与GCH1和
