摘要
随着研究深入，人们越来越关注通过位点饱和突变法来探究蛋白质中各个位点对其功能贡献的方法。不过，目前用于评估含有大量突变的变异体库的常用方法依赖于对生物适应性的检测，而这种适应性会受到多种蛋白质特性的影响（如配体结合、催化作用、别构效应物结合以及效应物与底物之间的别构耦合等）。因此需要借助生化实验来区分这些影响因素。为便于生成并生化分析大量被取代位点的功能，我们在高通量工作流程中共同表达了编码一系列琥珀色抑制tRNA的更新版质粒；这些质粒可在Addgene上获取。例如，我们的目标是探究同源蛋白之间是否存在保守的别构机制。由于同源蛋白的相似度通常低于50%，且蛋白质中有多达30%的位点可能参与别构功能，我们认为不同同源蛋白中的“别构”位点很可能存在差异。我们的高通量工作流程包括以下步骤：第一步，基于琥珀色抑制tRNA的突变方案；第二步，用于蛋白质表达/纯化及功能检测的自动化系统；第三步，将每个位点上多个取代后的结果整合为综合评分的方法。
