相对肿瘤出芽（TBrel）预测口腔鳞状细胞癌隐匿性淋巴结转移、侵袭性与生存

《Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery》：Relative tumour budding (TB rel) predicts occult nodal metastasis, aggressiveness and survival in oral squamous cell carcinoma

　　

肿瘤出芽（Tumour budding, TB）是定义为肿瘤浸润前沿（Tumour invasion front, TIF）处单个肿瘤细胞或不超过4个细胞簇的组织病理学参数（TB评分1：0–4个出芽；TB评分2：5–9个出芽；TB评分3：≥10个出芽）。然而，基于单一切片的传统评估可能无法捕捉TIF内的异质性。因此，本研究应用一种新型定量方法（TBrel），即评估所有可用切片并汇总为平均评分。研究纳入256例口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinoma, OSCC）患者，分析1289张苏木精-伊红（Haematoxylin and eosin, HE）染色切片。基于TBrel，患者被分层为预后簇：簇C1（TBrel=1.0）与簇C2（TBrel>1.0）。TBrel升高与反映肿瘤侵袭性的不良组织病理学特征相关。在临床淋巴结阴性（clinically node-negative, cN0）患者中，TBrel识别隐匿性淋巴结转移（pathologically node-positive, pN+）的优势比为6.32。此外，相较于TIF各切面TB评分持续低值者，TBrel较高患者总体疾病进展与生存恶化风险更高。鉴于其预后相关性，TBrel应整合入常规诊断，或可支持颈清扫术（neck dissection）的个体化指征。

研究背景与立项依据

头颈部鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinomas, HNSCC）是全球第七大常见癌症，口腔鳞状细胞癌（OSCC）占其中重要比例，总体预后差。淋巴结转移（Lymph node metastases, LNM）与复发、远处转移及死亡风险增加密切相关。目前德国OSCC临床指南尚未纳入任何肿瘤标志物。肿瘤出芽（TB）在结直肠癌等实体瘤中已被证实可评估侵袭性与预后，并进入德国结直肠癌指南；但在OSCC中，肿瘤浸润前沿（TIF）异质性显著，既往研究显示超50%病例不同切面TB评分存在差异，单一切面评估会低估异质性。研究人员此前提出相对肿瘤出芽（TB_rel）概念——即TIF各切面TB评分均值，以补偿切面间变异。本研究在256例OSCC大样本中验证TB_rel的预测与预后价值，并探索其对cN0患者隐匿性淋巴结转移（pN+）的识别能力及对颈清扫术指征的个体化管理意义。论文发表于《Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery》。

主要技术方法概括

研究人员回顾性纳入2019–2023年RWTH Aachen大学医院经组织学确诊的256例OSCC患者（年龄>18岁，排除口咽癌），中位随访29.16个月。所有标本为术后福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织，每张4μm厚切片行HE染色。由两名头颈病理专科医师共识盲法评估，在10×下选TIF热点、20×下计出芽数，区分瘤内TB（Intratumoural TB, ITTB）与瘤周TB（Peritumoural TB, PTTB），每切面取最高分；TB_rel=全TIF切面TB评分总和/切面数，按是否>1.0分簇C1/C2。统计采用R语言，连续变量用Mann-Whitney U检验，分类变量用卡方/Fisher精确检验，logistic回归算优势比（Odds ratio, OR），Kaplan-Meier与log-rank检验生存，Shannon熵与稀释曲线定切面饱和数。

研究结果

3.1 患者特征：256例中女130、男126，中位年龄65.7岁，74.22%为cN0；平均每人评ITTB_rel4.59张、PTTB_rel4.87张切面，共1289张有效TIF切片。

3.2 描述性参数：PTTB_rel簇C1（=1.0）169例、C2（>1.0）84例；ITTB_rel簇C1 153例、C2 83例；33.2%病例PTTB跨切面变异，35.17% ITTB变异；87.55%两参数同簇。

3.3 分组：证实TB_rel二分类（C1均低、C2至少一切面≥评分2）可操作。

3.4 切面数：Shannon熵稀释曲线显示约9张切面达饱和，能稳定代表TIF异质性。

3.5 TB_rel与局部侵袭性：C2簇显著伴淋巴结包膜外扩展（p<0.001）、淋巴管侵犯L1（p=0.003）、神经周围侵犯Pn1（p<0.001）、静脉侵犯V1（p=0.014）；pN+率与淋巴结比率（Lymph node ratio, LNR）均升高（p<0.001）。cN0组中C2预测pN+的OR=6.32（95%CI 2.53–16.75），仅次于淋巴管侵犯（OR14.43），强于ITTB_rel（OR3.23）与浸润深度（Depth of infiltration, DOI；OR0.58）；分层分析示TB_rel效应在<9或≥9切面均稳定（交互p=0.97）。

3.6 TB_rel与生存：单事件（局部复发、LNM、远处转移）无组间差异；但复合进展（progress）C2劣于C1（p=0.019）。疾病特异生存（Disease-specific survival）KM曲线C2显著更差（p<0.0001），平滑风险显示C2诊断后10–20个月高危峰，C1全程低危。

讨论部分总结

研究人员指出本研究优势在于大样本多切面验证TB_rel可补单切面不足，局限为回顾性、随访时长不均、共识阅片非双盲独立。TB_rel对局部侵袭标志（L1/Pn1/V1/ENE）及cN0→pN+识别力强，生存分层显著；9切面为理论饱和数但效应在少切面也稳定，实际工作流程中“任一切面PTTB评分>1”即归C2已具预测力。TB_rel可整合进HE常规阅片（兼顾R0状态评估），有望联合DOI、L1构建复合评分，指导cN0患者选择性颈清扫，避免功能损伤；在分期手术或新辅助免疫（如pembrolizumab）流程中亦可嵌入。作者强调该阈值属假设生成级，需前瞻多中心验证。

结论翻译

未来需前瞻多中心研究验证TB_rel在OSCC的预后角色。为强化风险分层，应考虑联合TB_rel、DOI与L1等多种标志物。此外，构成出芽的肿瘤细胞形态及其与瘤周基质细胞互作值得关注；TB_rel簇对放疗（ chemo）radiotherapy或系统治疗反应的影响亦待评估。长期看，TB_rel可基于隐匿转移风险估计，助推颈清扫术个体化指征。