通过量化体细胞拷贝数变异来预测口腔白斑的恶性转化：一项前瞻性队列研究

《Oral Oncology》：Quantification of somatic copy-number alterations to predict malignant transformation of oral leukoplakia: A prospective cohort study

　　

摘要

研究目的

本研究旨在评估一种用于衡量体细胞拷贝数改变程度嘅定量指标在预测口腔白斑症恶性转化方面的价值。

研究方法

本研究对122名口腔白斑症患者进行了前瞻性队列研究，随访时间中位数为74个月。研究人员对新鲜冷冻的组织样本进行了全外显子组测序。SCNA-L是指那些拷贝数及最小宽度超过预设阈值的染色体片段的总长度。以3.3作为中位数分界值，将研究对象分为高SCNA-L组和低SCNA-L组。主要研究结果是判断是否发生向口腔鳞状细胞癌的恶性转化。所采用的统计分析方法包括Kaplan–Meier生存分析、Cox比例风险模型、时间依赖型ROC曲线、1,000次重采样后的乐观校正C指数，以及通过校准曲线进行的Bootstrap内部验证。

研究结果

高SCNA-L组的恶性转化率（26.7%）明显高于低SCNA-L组（6.5%；P＜0.01）。在多变量分析中，SCNA-L依然是恶性转化的独立预测因子（风险比=4.684，P=0.006）。该预测模型结合了SCNA-L与病变类型，能够在中期预测中展现出良好的区分度与校准效果。

研究结论

作为口腔白斑症恶性转化的独立预测指标，SCNA-L这一定量指标可作为传统病理分级方法的分子学补充。

引言

口腔白斑症是一种恶性潜能不明的白色斑块，属于最常见的口腔潜在恶性疾病之一，全球患病率为3.41%–4.11%，其恶性转化率则在5.9%–23%之间。尽管已有多种治疗方法，但尚缺乏能够有效证明其能阻止疾病恶化的可靠证据。因此，尽早识别出恶性潜能较高的病变对于及时干预并改善临床预后至关重要。目前，风险评估主要依赖于临床特征以及上皮异型增生的组织学证据，但由于这些指标具有主观性，且易受取样误差和不同观察者判断差异的影响，尤其是在评估中度异型增生时，其重复性较差。

因此，开发客观的诊断方法来对口腔白斑症的发病风险进行分层仍然十分必要。新一代测序技术的进步为评估恶性转化风险提供了基因组学视角。癌症的发生通常伴随着基因组变化的逐渐积累，这一过程往往早于组织形态学改变的出现。拷贝数改变已被认为是与口腔白斑症恶性转化相关的关键分子特征。异型增生病变的拷贝数改变评分高于增生性病变，且评分随异型增生的严重程度而上升。此外，那些发生恶性转化或复发的病变，其拷贝数丢失的概率也高于那些病情得到控制或保持稳定的病变。不过，目前大多数相关研究都是回顾性或横断面研究，因此由于方法上的差异、研究结果缺乏一致性，以及缺乏大规模前瞻性验证，这类研究的临床应用仍受到限制。

为弥补这些不足，我们针对一组前瞻性口腔白斑症患者进行了研究。通过對新鲜冷冻的活检组织进行全外显子组测序，并结合长期随访数据，我们开发出了用于量化拷贝数改变的算法。本研究旨在寻找一种可靠、实用且具有普遍适用性的分子生物标志物，用以预测口腔白斑症的恶性转化风险。

章节节选

研究对象纳入与样本采集

本研究纳入了122名经临床及组织学确诊患有口腔白斑症的患者。这些患者来自上海第九人民医院口腔黏膜疾病科。该研究已获得上海第九人民医院伦理委员会的批准，所有参与者都签署了书面知情同意书。研究还收集了全面的基线数据，以避免影响研究的准确性。

前瞻性口腔白斑症研究队列的特征

通过严格的纳入与排除标准，本研究共纳入122名确诊为口腔白斑症的患者。在74个月的中位随访期内，有20名患者（16.39%）发生了向口腔鳞状细胞癌的恶性转化。单变量分析显示，女性性别、病灶形态不均匀以及高级别异型增生均是危险因素，但在多变量分析中，这些关联则不再显著。

讨论

在本研究中，我们基于全外显子组测序数据开发了一种名为SCNA-L的定量生物标志物，用于预测经过74个月随访的前瞻性口腔白斑症患者群体的恶性转化风险。我们的主要研究发现如下：首先，高SCNA-L水平与较高的恶性转化风险显著相关；其次，SCNA-L与传统的病理分级结果相互独立，能够提供额外的风险信息；最后，在多变量Cox分析中，SCNA-L与病变类型依然具有显著的独立性。

结论

综上所述，SCNA-L作为一种基于全外显子组测序所得累积拷贝数改变数据的定量指标，能够为口腔白斑症的恶性转化风险提供独立的分子层面评估信息，弥补了传统组织病理分级的不足。在该研究群体中，该预测模型在中期预后预测方面表现出良好的区分度和校准效果。未来还需要开展更多规模更大、设计更合理的多中心研究，以进一步验证该模型的重复性、稳健性及其实际临床应用价值。

CRediT作者贡献说明

王志瑞：论文撰写——初稿撰写、可视化分析、结果验证、正式分析、数据整理、概念构思。吴文涛：可视化分析、研究调查。徐彦璐：可视化分析、软件应用。朱宇涵：可视化分析。刘伟：资源协调。周增桐：论文撰写——审阅与编辑。余世岩：论文撰写——审阅与编辑、研究指导、概念构思。李晨曦：论文撰写——审阅与编辑、研究指导、资源协调、概念构思。施林军：。

伦理声明

所有参与者或其法定代理人均已签署书面知情同意书，同意参与本研究并允许相关研究成果发表。同时，参与者的隐私权也得到了充分保护。

本研究涉及器官或组织捐赠者。所有用于研究的人类生物材料均获得了捐赠者或其近亲或法定代理人的同意，可用于本研究及文章发表。本研究中所使用的样本并非来源于已故人员。

人体研究相关事项

本研究是在遵守相关法律法规及研究所在地的各项规范要求的前提下开展的，同时也符合《赫尔辛基宣言》的规定。该研究已获得上海第九人民医院伦理委员会的批准（批准编号为SH9H-2016-79-T36）。

利益冲突声明

所有作者均声明，自己不存在任何可能影响本研究结果的已知财务利益关系或个人关系。

致谢

本研究得到了以下机构的支持：中国国家自然科学基金（项目编号：82571164、82170952）、上海市卫生健康委员会（项目编号：2024ZZ2055）、上海交通大学医学院“二百人才计划”（项目编号：20221813），以及上海第九人民医院跨学科研究基金（项目编号：JYJC202409）。DNA提取、文库构建、目标捕获以及高通量测序工作则由北京诺禾致源科技有限公司完成。我们对此机构的支持表示衷心感谢。

Zirui Wang|Wentao Wu|Yanlu Xu|Yuhan Zhu|Wei Liu|Zengtong Zhou|Shiyan Yu|Chenxi Li|Shilinjun

上海交通大学医学院上海第九人民医院口腔医学科，中国上海