《Veterinary Medicine International》：The Role of a Biological Membrane in Healing Full-Thickness Cutaneous Wounds in Rats
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摘要翻译：背景：全层创面因其再生能力降低和炎症延长而带来显著的愈合挑战。目的：本研究旨在评估脱细胞羊膜（AM）作为生物敷料治疗全层皮肤创面的愈合潜力。方法：本研究将18只健康大鼠均匀分为对照组和治疗组。在背部背侧制作3×3 cm的全层创面。治疗组接受脱细胞绵羊
摘要翻译：背景：全层创面因其再生能力降低和炎症延长而带来显著的愈合挑战。目的：本研究旨在评估脱细胞羊膜（AM）作为生物敷料治疗全层皮肤创面的愈合潜力。方法：本研究将18只健康大鼠均匀分为对照组和治疗组。在背部背侧制作3×3 cm的全层创面。治疗组接受脱细胞绵羊羊膜（OAM），并将该膜应用于受创区域。对照组则完全不接受任何治疗。术后第7、14和21天对动物实施安乐死，以便进行组织学分析。结果：扫描电子显微镜（SEM）图像显示，脱细胞羊膜具有均匀光滑的表面，而未脱细胞羊膜则含有有机和细胞物质，导致表面较粗糙。组织学和肉眼检查显示，治疗组创面愈合速度快于对照组。结论：生物膜能够诱导组织再上皮化、刺激胶原合成、减轻炎症反应并防止免疫排斥，使其成为一种有吸引力的、生物相容性良好的支架，并成为再生医学中一个有前景的选择。
论文解读文章
**研究背景与问题**
皮肤是人体最大的器官，覆盖全身表面，保护机体免受微生物、化学物质和机械应力等外界因素的损伤。根据损伤深度，创面可分为表皮创面、部分厚度创面和全层创面三类。其中全层创面由于真皮及上皮再生成分的完全破坏，愈合过程极为困难，常伴随大面积瘢痕形成、皮肤弹性下降及外观不良等问题。传统上，自体移植物、同种异体移植物和异种移植物常被用于创伤或皮肤烧伤导致的显著组织缺损，但这些疗法存在免疫排斥风险和原发性收缩等局限性。皮肤替代物旨在模拟皮肤的天然功能和细胞外基质（ECM）的结构特征，同时应能防止蛋白质丢失、改善创面外观并抑制非天然微生物的生长。近年来，基于脱细胞组织的ECM生物支架因其固有的再生能力和原始ECM结构，成为创面愈合研究中的热点。然而，许多合成或混合创面敷料生物材料仍面临生物相容性差、快速降解、生产成本高和结构完整性不足等问题。因此，开发一种天然来源、生物相容性好且免疫原性低的创面愈合支架具有重要意义。
**研究目的与创新性**
本研究的创新点在于使用绵羊羊膜（OAM）作为天然来源的创面愈合支架，并应用优化的脱细胞方案，该方案既能有效去除细胞，又能保持天然ECM结构及其生物活性成分的完整性。与需要大量材料修饰或外源生物活性物质整合的合成聚合物、电纺纳米纤维或水凝胶系统不同，该支架利用了源自天然组织的基质固有的生物学特性。研究采用多尺度综合评估方法，整合了组织学检查、高分辨率扫描电子显微镜（SEM）和肉眼创面闭合时间测量，以详细研究炎症控制、细胞浸润、胶原组织和真皮重塑等分子机制。
**研究队列与方法**
研究人员从提克里特大学兽医学院动物饲养中心获取了18只临床健康的雄性白化大鼠，鼠龄6–8周，体重200–250 g。所有动物饲养在灭菌聚丙烯笼具中，环境温度24±2°C，湿度55%，光照/黑暗周期12/12小时。动物随机分为对照组和治疗组（每组9只）。OAM取自提克里特市当地肉店，来自临床健康的6–9月龄雄性绵羊的小肠。手术过程：使用赛拉嗪（10 mg/kg）和氯胺酮盐酸盐（90 mg/kg）肌肉注射诱导全身麻醉，在背部背侧制作3×3 cm全层切除创面，治疗组立即覆盖脱细胞OAM并用（0/5）聚乙醇酸缝线固定，对照组不治疗。主要关键技术方法包括：脱细胞处理（甲醇-氯仿溶液、胰酶-EDTA、SDS处理）、创面收缩测量、肉眼评估、组织病理学检查（苏木精-伊红染色）、扫描电子显微镜（SEM）分析，以及独立样本t检验等统计方法。
**主要研究结果**
**1. OAM的SEM分析**
SEM显示，脱细胞前的OAM基质呈现密集的纤维网络，纤维间距不规则，含有许多与生物碎片相关的颗粒（图3）。脱细胞后的AM表面均匀光滑，无细胞碎片和有机残留物，表明脱细胞过程有效去除了细胞成分，同时保持了膜的微细和超微结构特性（图4）。植入后的SEM分析显示表面结构发生变化，膜孔隙率增加，这可能是创面部位活跃的细胞浸润和分子重塑活动所致，表明支架具有生物相容性并促进组织再生（图5）。
**2. 肉眼评估**
术后前3天，治疗组出现红肿和炎症迹象，而对照组这些迹象持续至术后10天。两组在整个实验期间均未观察到出血或坏死。至第21天，治疗组达到完全创面闭合，对照组愈合时间更长。定量分析显示：第3天两组无显著差异（治疗组6.6±8.2% vs 对照组3.3±5.9%，p=0.34）；第7天治疗组创面收缩显著高于对照组（33.3±15.7% vs 13.3±11.3%，p=0.007）；第14天差异进一步扩大（66.6±15.7% vs 33.3±15.7%，p<0.001）；第21天治疗组接近完全闭合（94.0±7.9% vs 66.0±15.79%，p<0.001）。
**3. 组织病理学评估**
对照组第7天，表皮舌薄而厚，由单层未成熟角质形成细胞组成，真皮层有致密胶原基质和少量成纤维细胞及多核炎症细胞浸润。第14天，表皮舌停止进展，剩余创面缺损被致密纤维蛋白覆盖，真皮层含肉芽组织和多核炎症细胞。第21天，表皮层致密角化，真皮层致密胶原纤维不规则排列，血管扩张充满溶血血液。治疗组第7天，上皮舌明显，角质形成细胞位于基底层空泡内，真皮层有炎症细胞和成纤维细胞，胶原纤维薄而不规则，可见大量新生血管。第14天，表皮层完全再上皮化，真皮层炎症细胞减少，胶原纤维薄而规则。第21天，表皮层变薄，真皮层含纤维细胞和规则胶原纤维，可见新生毛囊和皮脂腺。
**讨论与结论**
本研究结果表明，脱细胞OAM能显著加速大鼠全层皮肤创面的愈合过程。治疗组在第7、14和21天的创面收缩率均显著高于对照组，且组织学检查显示再上皮化加速、炎症细胞浸润减少、胶原沉积改善以及皮肤附属器（如毛囊）的发育。这些发现与先前研究一致，表明脱细胞AM通过调节炎症和促进组织再生来改善创面愈合。本研究的局限性包括：未进行盲法评估、组织学评估主要为描述性、缺乏分子和免疫组化分析，以及缺少标准阳性对照组。尽管如此，研究结论明确指出：脱细胞OAM能显著改善大鼠全层皮肤创面的愈合，治疗组表现出更快的创面收缩和增强的再上皮化，炎症反应较对照组减轻。组织学检查验证了组织再生增强，表现为有序胶原沉积、成纤维细胞活性增强和表皮附属器（包括毛囊）的发育。SEM证实了OAM的结构完整性和成功脱细胞化，确保其适合作为生物相容性支架。脱细胞OAM具有作为低成本生物支架的潜力，具有良好愈合特性、低免疫原性和易生产等优点，可用于治疗性创面护理和组织再生。该论文发表在《Veterinary Medicine International》上。
