综述:重组耐热DNA聚合酶:目前的生产方法、分子工程及其在生物技术和诊断领域的应用
《International Journal of Molecular Sciences》:Recombinant Thermostable DNA Polymerases: Current Approaches to Production, Molecular Engineering, and Applications in Biotechnology and Diagnostics
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时间:2026年08月12日
来源:International Journal of Molecular Sciences 5.6
摘要
DNA聚合酶对于遗传物质的复制和修复至关重要。重组DNA技术及蛋白质工程领域的进展使得人们能够制造出具有特定催化特性的酶,这些酶可满足分子诊断、下一代测序以及合成生物学领域的需求。本文综述了DNA聚合酶的分类及其结构与功能特性,重点介绍了在实际应用中具有重要意义的A类和B类耐热性聚合酶。文中还总结了异源表达体系以及重组聚合酶的纯化方法。此外,还探讨了包括理性设计、定向突变、定向进化以及结构域工程在内的分子工程手段,阐述了如何培育出具有更高合成精确度、更强的进程性、更强抗抑制剂能力以及更广底物特异性的酶。同时,也回顾了热启动聚合酶的开发技术以及嵌合型多功能聚合酶的创造方法。文中还提供了用于科学研究和分子诊断的商业化聚合酶的相关信息。此外,还总结了重组DNA聚合酶在传统PCR、定量PCR、数字PCR、等温扩增、测序、合成生物学以及传染性和遗传性疾病分子诊断等方面的当前应用。最后,本文探讨了如何通过整合结构生物学、计算建模和高通量筛选技术,为设计新一代专用酶开辟新的可能性。
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