一种基于CbAgo的荧光检测方法，用于灵敏检测末端脱氧核苷酸转移酶

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《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：A CbAgo-enabled fluorescence assay for sensitive detection of terminal deoxynucleotidyl transferase

【字体：大中小】 时间：2026年08月12日 来源：ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY 4.1

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　　摘要末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）已被认为是白血病诊断和预后的重要生物标志物，因为其异常过表达与恶性淋巴细胞增殖及基因组不稳定性密切相关。因此，准确且灵敏地检测TdT活性对于理解与聚合酶相关的生物过程以及支持分析性和治疗性研究具有重要意义。然而，传统的TdT检测方法往往涉及复杂的

摘要

末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）已被认为是白血病诊断和预后的重要生物标志物，因为其异常过表达与恶性淋巴细胞增殖及基因组不稳定性密切相关。因此，准确且灵敏地检测TdT活性对于理解与聚合酶相关的生物过程以及支持分析性和治疗性研究具有重要意义。然而，传统的TdT检测方法往往涉及复杂的多步骤操作、较长的孵育时间或扩增反应，这限制了它们的效率与实用性。在本研究中，研究人员开发了一种一体化荧光检测方法，将TdT介导的延伸反应与可编程内切酶Clostridium butyricum Argonaute（CbAgo）相结合，以实现快速、灵敏且特异的TdT活性分析。在该耦合酶级联反应中，TdT会延长5′-磷酸化的A10引物，生成多聚(A)序列，这些序列会与荧光素-淬灭剂报告分子发生杂交，进而触发CbAgo催化的切割反应，产生强烈的荧光信号。得益于CbAgo的DNA引导特性、无需PAM序列以及高度稳定性，该系统能够实现均匀检测，且相比基于CRISPR的方法具有更高的稳定性。该检测方法的检测限为6.6×10?? U/μL，线性范围为0.00002至0.01 U/μL，在复杂的生物基质和细胞裂解液中表现出优异的选择性、重复性以及良好的性能。这项研究展示了一种简单且通用的荧光平台，可高效量化TdT活性，同时具备高稳定性和操作简便性。

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末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）已被认为是白血病诊断和预后的重要生物标志物，因为其异常过表达与恶性淋巴细胞增殖及基因组不稳定性密切相关。因此，准确且灵敏地检测TdT活性对于理解与聚合酶相关的生物过程以及支持分析性和治疗性研究具有重要意义。然而，传统的TdT检测方法往往涉及复杂的多步骤操作、较长的孵育时间或扩增反应，这限制了它们的效率与实用性。在本研究中，研究人员开发了一种一体化荧光检测方法，将TdT介导的延伸反应与可编程内切酶Clostridium butyricum Argonaute（CbAgo）相结合，以实现快速、灵敏且特异的TdT活性分析。在该耦合酶级联反应中，TdT会延长5′-磷酸化的A10引物，生成多聚(A)序列，这些序列会与荧光素-淬灭剂报告分子发生杂交，进而触发CbAgo催化的切割反应，产生强烈的荧光信号。得益于CbAgo的DNA引导特性、无需PAM序列以及高度稳定性，该系统能够实现均匀检测，且相比基于CRISPR的方法具有更高的稳定性。该检测方法的检测限为6.6×10?? U/μL，线性范围为0.00002至0.01 U/μL，在复杂的生物基质和细胞裂解液中表现出优异的选择性、重复性以及良好的性能。这项研究展示了一种简单且通用的荧光平台，可高效量化TdT活性，同时具备高稳定性和操作简便性。

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