改进RNA纯化技术可显著提升从马铃薯块茎提取物中检测病毒的能力

《BMC Plant Biology》：Refinement of RNA purification significantly enhances detection of potato viruses from tuber extracts

　　

摘要

马铃薯病毒会显著降低种子质量和作物产量，其中六种主要病毒对全球马铃薯生产构成最大威胁。传统检测方法包括培育试验后再进行DAS-ELISA检测，虽能可靠识别病毒，但耗时且成本高昂。本研究旨在优化RNA纯化流程，以便在块茎组织中实现稳定的马铃薯病毒分子检测。研究评估了五种商业RNA分离试剂盒（涵盖六种提取方法）以及两种非柱式提取方法。通过分光光度法、荧光法和毛细管电泳法检测RNA的产量、纯度和完整性，同时利用针对病毒及马铃薯细胞色素氧化酶(StCOX) mRNA的RT-qPCR技术评估其功能质量。进一步测试了所选方法的重复性、与自动化设备的兼容性以及冷藏保存期间的RNA稳定性。基于磁性颗粒的自动化分离方法表现出较高的重复性和处理效率，适合常规诊断使用。对冷藏后的RNA样本分析显示，14天内RT-qPCR的检测能力会随转录本数量变化而逐渐下降，但在初始病毒载量充足的样本中，至少在48小时内仍可稳定被检测到。总之，优化后的RNA提取流程能够直接从块茎中高效、准确地检测马铃薯病毒。这些方法为繁琐的培育试验提供了可行的替代方案，有助于在马铃薯种子认证和植物检疫监测项目中广泛应用分子检测技术。