《Journal of Assisted Reproduction and Genetics》：Endometriosis and ovarian aging: a pilot study exploring oxidative stress and DNA damage markers
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目的 评估与年龄匹配的对照组相比，子宫内膜异位囊肿患者原始卵泡中氧化应激和DNA损伤的特异性标志物是否以更高水平表达。方法 研究人员开展了一项回顾性试点队列研究，使用因症状性子宫内膜异位囊肿接受单侧或双侧输卵管卵巢切除术患者的卵巢组织，对照组因其他良性妇科疾病
目的 评估与年龄匹配的对照组相比，子宫内膜异位囊肿患者原始卵泡中氧化应激和DNA损伤的特异性标志物是否以更高水平表达。方法 研究人员开展了一项回顾性试点队列研究，使用因症状性子宫内膜异位囊肿接受单侧或双侧输卵管卵巢切除术患者的卵巢组织，对照组因其他良性妇科疾病接受相同手术。研究人员采用免疫组化（IHC）评估原始卵泡中4-羟基壬烯醛（4-HNE）作为氧化应激标志物的阳性百分比，以及8-氧代鸟嘌呤（8-Oxo）和磷酸化H2AX（γH2AX）作为DNA损伤标志物的阳性百分比。分类变量采用卡方检验，连续变量采用Student t检验，p<0.05视为具有统计学显著性。结果 共纳入29例患者（8例对照组，21例子宫内膜异位囊肿组）。两组年龄（39.4±5.1 vs. 37.1±4.6岁，p=0.269）、BMI（33.6±10.6 vs. 29.5±7.8 kg/m2，p=0.310）相似。种族分布、未产状态、激素治疗使用情况和吸烟状况也可比。子宫内膜异位囊肿平均大小为6.6±2.8 cm。所有分子标志物在子宫内膜异位囊肿组的阳性百分比均高于对照组。γH2AX显示出统计学显著增加（63.6% vs. 50.1%，p=0.033）。8-Oxo（67.5% vs. 55.8%，p=0.070）和4-HNE（65.1% vs. 61.8%，p=0.168）在子宫内膜异位囊肿组也升高，但未达到统计学显著性。结论 子宫内膜异位囊肿患者表现出增加的卵泡DNA损伤，伴有γH2AX表达升高，支持子宫内膜异位囊肿可能通过DNA损伤机制损害卵泡质量的观念。
**论文解读：子宫内膜异位症与卵巢衰老——一项基于氧化应激和DNA损伤标志物的临床研究**
**研究背景与现有问题**
子宫内膜异位症（Endometriosis）是一种影响约10%育龄女性的慢性炎症性疾病，其中25%–50%的不孕女性患有该病，且慢性盆腔痛患者中患病率高达30%–80%。子宫内膜异位囊肿（Endometrioma）是最常见的亚型，占全球女性患者的44%，并与卵巢储备下降及加速卵巢衰老密切相关。尽管已有大量研究，但子宫内膜异位症与不孕之间的明确因果联系仍未阐明。既往荟萃分析显示，子宫内膜异位囊肿患者的抗苗勒管激素（AMH）水平低于其他良性卵巢囊肿患者，且纵向研究观察到其AMH下降速度更快。此外，组织学研究发现子宫内膜异位症患者的原始卵泡（Primordial Follicle）计数较低，提示可能存在类似早发性卵巢功能不全的机制，但确切原因尚不清楚。
氧化应激（Oxidative Stress）和DNA损伤被认为是影响卵泡质量的关键因素。4-羟基壬烯醛（4-HNE）是一种由多不饱和脂肪酸氧化形成的脂质衍生醛，具有强反应性活性氧（ROS）特性，可导致钙稳态紊乱、细胞毒性及DNA损伤。8-氧代鸟嘌呤（8-Oxo）是ROS过量积累的产物，可诱导突变，与早衰和癌症相关。磷酸化H2AX（γH2AX）是DNA双链断裂（DSB）的经典标志物，其磷酸化后形成病灶，可通过免疫荧光检测。然而，关于这些标志物在子宫内膜异位症患者原始卵泡中的表达研究极为有限。
**研究目的与意义**
本研究旨在评估子宫内膜异位囊肿患者卵巢组织邻近原始卵泡中氧化应激（4-HNE）和DNA损伤（8-Oxo、γH2AX）标志物的表达水平，并与年龄匹配的对照组比较。假设这些标志物在子宫内膜异位囊肿组中更高，从而为卵巢衰老加速的分子机制提供新见解。该研究发表在《Journal of Assisted Reproduction and Genetics》。
**主要技术方法**
研究人员采用回顾性试点队列设计，从2006年6月至2024年6月于单一学术机构接受单侧或双侧输卵管卵巢切除术的女性中筛选病例。样本来源于病理科存档的石蜡包埋卵巢组织（来自Women & Infants Hospital），共纳入29例患者（21例子宫内膜异位囊肿，8例对照）。主要技术方法为免疫组化（IHC）和免疫荧光染色，使用特异性一抗检测4-HNE（Thermo Fisher #MA5-27,570）、8-Oxo（Sigma #MAB3560）、γH2AX（Sigma #07–164-25UG）以及卵母细胞标志物泛素羧基末端水解酶L1（UCHL-1，Proteintech #14,730–1-AP），通过Zeiss Axio Imager倒置荧光显微镜观察并计算原始卵母细胞阳性百分比。统计方法包括卡方检验和Student t检验，p<0.05视为显著。
**研究结果**
- **研究人群特征**：两组基线特征相似。平均年龄（37.1±4.6 vs. 39.4±5.1岁，p=0.269）、BMI（29.5±7.8 vs. 33.6±10.6 kg/m2，p=0.310）无显著差异；种族分布、未产状态、激素治疗和吸烟状况可比。子宫内膜异位囊肿平均大小为6.6±2.8 cm。
- **氧化应激**：4-HNE在子宫内膜异位囊肿组原始卵泡中的阳性百分比高于对照组，但未达到统计学显著性（65.1% vs. 61.8%，p=0.168）。
- **DNA损伤**：8-Oxo在子宫内膜异位囊肿组阳性百分比更高，但差异未达统计学显著（67.5% vs. 55.8%，p=0.070）。γH2AX在子宫内膜异位囊肿组中显著升高（63.6% vs. 50.1%，p=0.0331），表明DNA双链断裂增加。
**讨论与结论**
讨论部分指出，本研究首次在原始卵泡层面评估了子宫内膜异位囊肿相关的氧化应激和DNA损伤。γH2AX的显著升高支持了DNA损伤机制在卵泡质量损害中的作用，这与既往研究（如小鼠卵母细胞暴露于子宫内膜异位症患者卵泡液后γH2AX病灶增加）一致。8-Oxo和4-HNE虽未达显著，但趋势与既往报道（如卵巢皮质中8-Oxo升高）相符，可能受限于样本量和年龄相关的基线积累。研究人员推测，DNA损伤可能通过影响PI3K-PTEN-AKT-FOXO3信号通路导致原始卵泡过早激活或闭锁，从而加速卵巢衰老。
本研究存在局限性：样本量小（尤其对照组）、回顾性设计、高排除率（因卵泡密度不足）可能引入选择偏倚，且缺乏临床卵巢储备标志物（如AMH、窦卵泡计数AFC）用于相关性分析。结论部分翻译如下：总之，在理解子宫内膜异位症相关卵巢衰老方面仍存在空白。尽管需要更大规模队列的进一步研究，但这些结果补充了现有的临床和分子证据，表明子宫内膜异位囊肿可能通过增加DNA损伤加速卵巢衰老。识别卵巢衰老的生物标志物可指导旨在保护该人群生育潜能的咨询和治疗策略。
