《Ecotoxicology and Environmental Safety》：2-Ethylhexyl diphenyl phosphate exposure is associated with poorer overall survival in advanced high-grade serous ovarian cancer: Integrated epidemiological and experimental evidence implicating the ITGB1–FAK–AKT axis
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背景：有机磷酸酯类（OPEs）是全球广泛使用的阻燃剂和增塑剂，导致人类普遍暴露。OPEs暴露是否影响晚期高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）患者的生存及其潜在机制尚不清楚。研究人员旨在识别与预后相关的OPEs并探索其生物学作用。方法：研究人员在卵巢癌随访研究（OO
背景：有机磷酸酯类（OPEs）是全球广泛使用的阻燃剂和增塑剂，导致人类普遍暴露。OPEs暴露是否影响晚期高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）患者的生存及其潜在机制尚不清楚。研究人员旨在识别与预后相关的OPEs并探索其生物学作用。方法：研究人员在卵巢癌随访研究（OOPS）中开展了一项巢式病例对照研究，包括159例死亡患者和159例匹配的存活晚期HGSOC患者。使用条件逻辑回归模型评估尿液中OPEs与全因死亡的关联。采用分位数g计算（qgcomp）和贝叶斯核机器回归（BKMR）检验混合效应。通过网络毒理学、分子对接、分子动力学模拟以及体外和体内实验探索机制。结果：尿液中双(2-氯乙基)磷酸酯（BCEP）、双(1,3-二氯-2-丙基)磷酸酯（BDCIPP）和2-乙基己基二苯基磷酸酯（EHDPP）浓度升高与死亡风险显著增加相关，最高与最低三分位数的比值比（OR）分别为1.88（95%置信区间[CI]：1.02–3.45）、2.62（95% CI：1.33–5.16）和2.36（95% CI：1.23–4.53）。混合分析确定EHDPP为主要贡献者。网络毒理学分析确定AKT信号通路为关键介质，其中ITGB1被强调为关键上游靶点。分子对接和分子动力学模拟支持稳定的EHDPP–ITGB1复合物，细胞热转变分析（CETSA）确认了细胞内相互作用。EHDPP促进了集落形成、迁移、血管生成能力以及异种移植瘤生长，伴随ITGB1上调和FAK–AKT激活。结论：OPEs暴露，尤其是EHDPP，与晚期HGSOC较差生存期相关。EHDPP可能通过ITGB1–FAK–AKT信号轴促进卵巢癌进展。这些发现强调了EHDPP暴露在HGSOC中潜在的预后相关性。
论文解读：EHDPP暴露通过ITGB1–FAK–AKT轴与晚期高级别浆液性卵巢癌较差生存期相关
研究背景、存在问题及研究目的
卵巢癌（OC）是女性常见的致命恶性肿瘤，其中高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）是最具侵袭性的亚型，占上皮性卵巢癌的70%以上。由于起病隐匿，超过四分之三的HGSOC患者确诊时已为晚期，导致5年总生存率低于50%。然而，即使在晚期患者中，临床结局差异显著，提示除诊断分期外，其他因素也影响预后。因此，识别与HGSOC预后相关的可调控环境及生物学因素，是癌症预防和精准肿瘤学的重要方向。环境化学物暴露已被认为是人类健康的重要决定因素。有机磷酸酯类（OPEs）作为全球广泛使用的阻燃剂和增塑剂，通过吸入、摄入和皮肤接触导致人类普遍暴露。现有流行病学证据表明OPEs暴露与多种不良健康结局（如代谢紊乱、内分泌干扰及某些恶性肿瘤）相关，但既往研究多聚焦于一般人群或生殖代谢结局，OPEs暴露对癌症预后的潜在影响尚不明确。此外，人类同时暴露于多种OPEs，但主导不良效应的成分尚未明确，且OPEs促进肿瘤进展的分子机制在卵巢癌中知之甚少。为此，研究人员在卵巢癌随访研究（OOPS）中开展巢式病例对照研究，评估尿液中OPEs与晚期HGSOC总生存期（OS）的关联，并通过网络毒理学、生物信息学、分子对接、分子动力学模拟及体内外实验探索潜在机制。
主要关键技术方法
本研究采用巢式病例对照设计，从OOPS队列中纳入159例死亡患者和159例匹配存活患者（按年龄、体质指数和尿液采样日期1:1匹配）。通过同位素稀释高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定9种尿液OPEs浓度。采用条件逻辑回归、分位数g计算（qgcomp）和贝叶斯核机器回归（BKMR）评估个体及混合暴露与死亡风险的关系。通过网络毒理学（CTD、SwissTargetPrediction等数据库）预测EHDPP靶点，结合OMIM和GeneCards获取HGSOC相关基因，进行蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络和功能富集分析。利用TCGA、GTEx和GEO数据库进行差异表达和生存分析。分子对接与分子动力学模拟（MD）评估EHDPP与靶蛋白结合稳定性，细胞热转变分析（CETSA）验证细胞内结合。体外实验采用OVCAR3和SKOV3细胞系，检测细胞增殖、迁移、侵袭、管形成及三维肿瘤球生长；体内实验建立BALB/c裸鼠皮下异种移植瘤模型，通过Western blot和免疫组化（IHC）检测相关蛋白表达。
研究结果
3.1 患者特征与尿液OPEs浓度
在318例患者中，死亡与存活患者诊断年龄相似（均值53.40 vs 54.04岁）。死亡患者体力活动水平更低、腰围更大、教育程度更低、被动吸烟暴露更高、产次更多、术后残余肿瘤负荷更大（均P<0.05）。9种OPEs检出率55%-95%，各OPEs间相关性较弱。
3.2 个体尿液OPEs与晚期HGSOC死亡风险
尿液BCEP、BDCIPP和EHDPP浓度升高与死亡风险显著增加相关：最高与最低三分位数的比值比（OR）分别为1.88（95% CI: 1.02-3.45）、2.62（95% CI: 1.33-5.16）和2.36（95% CI: 1.23-4.53）。EHDPP呈显著剂量-反应关系（每标准差增加OR=2.67, 95% CI: 1.15-6.19）。
3.3 OPE混合物分析确定EHDPP为主要贡献者
qgcomp分析显示OPEs混合物总体与死亡风险增加相关（OR=2.60, 95% CI: 1.11-6.08），其中EHDPP贡献最大正权重（0.240）。BKMR分析表明混合物暴露增加与死亡概率升高相关，EHDPP后验包含概率（PIP）最高（0.746），支持其优先性。
3.4 网络毒理学与生物信息学分析提示ITGB1和AKT相关信号
从EHDPP靶点与HGSOC相关基因交集获得70个共同靶点。KEGG富集分析显示主要涉及PI3K-AKT信号通路等。GO分析提示与激素水平调节、凋亡信号负调控等相关。在TCGA-GTEx-GEO整合数据中，ITGB1和IGF1R在HGSOC中显著差异表达，且与预后相关。单细胞转录组分析显示ITGB1在几乎所有细胞类型中广泛表达，IGF1R局限表达。
3.5 分子对接、MD模拟和CETSA支持EHDPP-ITGB1相互作用
分子对接预测EHDPP与ITGB1结合能-6.5 kcal/mol，主要通过氢键和疏水接触与Tyr-133和Ser-134作用。300 ns MD模拟显示复合物稳定，RMSD和Rg趋于平衡。CETSA实验证实EHDPP处理可稳定细胞内ITGB1蛋白。
3.6 EHDPP增强ITGB1表达促进卵巢癌细胞恶性行为
Western blot显示EHDPP上调ITGB1蛋白及p-FAK、p-AKT水平，总FAK和AKT不变。EHDPP促进三维肿瘤球生长、集落形成、迁移、侵袭和管形成能力。免疫荧光显示ITGB1荧光强度增加。
3.7 EHDPP促进体内卵巢癌异种移植瘤生长
在SKOV3异种移植瘤模型中，EHDPP（2 mg/kg灌胃）显著加速肿瘤生长，增加肿瘤体积和重量。IHC显示肿瘤组织中ITGB1、p-FAK和p-AKT表达增强。
讨论与结论
讨论部分指出，本研究首次在晚期HGSOC患者中评估个体及混合OPEs暴露与OS的关联，确定EHDPP为主要贡献者。网络毒理学和实验验证支持EHDPP通过ITGB1-FAK-AKT信号轴促进肿瘤进展。研究优势包括巢式病例对照设计减少偏倚、多层面证据整合。局限性包括样本量较小、单次尿液测量可能无法反映长期暴露、体内剂量外推需进一步验证。结论：本巢式病例对照研究显示，较高尿液OPEs浓度与晚期HGSOC患者较差OS相关，混合分析确定EHDPP为主要贡献者。整合计算分析和实验验证提示ITGB1及下游FAK-AKT信号是EHDPP暴露与HGSOC进展之间的潜在机制通路。这些发现强调了EHDPP暴露在HGSOC中的潜在预后相关性，并提供了其可能促进肿瘤进展的机制证据。论文发表在《Ecotoxicology and Environmental Safety》。
