《iScience》：Mouse predation is dependent on a population of POU6F2-positive retinal ganglion cells
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视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells, RGCs）亚型对视觉引导行为的贡献仍是一个活跃的研究领域。研究人员识别出表达POU6F2的RGCs，这些细胞是ON-OFF方向选择性RGCs，且易受青光眼损伤。在Pou6f2敲除（Pou6f2<
视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells, RGCs）亚型对视觉引导行为的贡献仍是一个活跃的研究领域。研究人员识别出表达POU6F2的RGCs，这些细胞是ON-OFF方向选择性RGCs，且易受青光眼损伤。在Pou6f2敲除（Pou6f2?/?）小鼠中，RGCs数量减少12%，这些丢失的细胞正是表达POU6F2的RGCs。在功能上，Pou6f2?/?小鼠表现出显著的对比敏感度缺陷。在本研究中，研究人员证明Pou6f2?/?小鼠执行依赖双眼视觉的捕食测试的能力显著下降。野生型小鼠能迅速发现并捕获蟋蟀，而Pou6f2?/?小鼠完成任务所需时间显著延长。视神经 crush（optic nerve crush, ONC）后，野生型小鼠捕获蟋蟀的时间延长，而Pou6f2?/?小鼠没有进一步损伤。这些数据表明POU6F2阳性RGCs对于这种双眼驱动的行为至关重要。
小鼠是天生的捕食者，视觉在其捕食行为中起主导作用。小鼠双眼位于头部两侧，形成约40°宽的双眼视野，提供深度感知和空间精度，对于成功捕获猎物至关重要。视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells, RGCs）是视网膜输出神经元，小鼠视网膜包含46种RGC亚型，不同亚型对视觉引导行为的贡献尚不完全清楚。POU6F2是一种POU域转录因子，全基因组关联研究显示其与青光眼、近视和阅读障碍相关。研究人员先前发现POU6F2标记特定的RGC亚群，其中重标记细胞为RBPMS阳性、BRN3A阴性，对应于ON-OFF方向选择性RGCs（ooDSGCs），且这些细胞在青光眼模型中易受损。在Pou6f2敲除小鼠中，约12%的总RGCs丢失，且这些小鼠表现出视觉 acuity 和对比敏感度缺陷。基于这些发现，研究人员假设POU6F2阳性RGCs的丢失会影响其他视觉引导行为，特别是依赖双眼视觉的捕食行为。
本研究使用Pou6f2敲除小鼠（Pou6f2
?/?）与野生型同窝小鼠（Pou6f2
+/+），通过免疫组织化学染色确认RGC亚型丢失，通过视运动反应（optomotor response, OMR）测试评估视觉 acuity 和对比敏感度，通过开放场地蟋蟀捕食测试评估捕食行为，并对部分小鼠进行单眼视神经 crush（optic nerve crush, ONC）以破坏双眼视觉，进一步探究POU6F2阳性RGCs在捕食中的作用。研究发表于《iScience》。
主要技术方法包括：1）视网膜铺片免疫荧光染色，使用RBPMS（全RGC标记）和BRN3A（特定RGC亚群标记）抗体，结合深度学习工具RGCode进行全视网膜细胞自动计数；2）OMR系统（OptoMotry）测量视觉 acuity 和对比敏感度，采用阶梯法；3）捕食行为测试，在开放场地中记录小鼠捕获活蟋蟀的过程，由两名盲法观察者分析视频，划分探索（explore）、调查（investigate）和最终尝试（final attempt）等阶段；4）视神经 crush 手术，在左眼视神经上夹持5秒以阻断该眼输入。小鼠品系来自Jackson Laboratory（B6.129-Pou6f2
tm1Nat/J和C57BL/6J），所有行为测试均采用双盲设计。
研究结果：
1. **RBPMS阳性BRN3A阴性RGCs在Pou6f2
?/?小鼠中丢失**：通过免疫染色和定量分析，Pou6f2
+/+视网膜中RBPMS阳性RGCs平均为50,357个，而Pou6f2
?/?为44,322个，减少约12%（p=0.005）；BRN3A阳性RGCs数量无显著差异（p=0.240）。由于POU6F2阳性RGCs是RBPMS阳性且BRN3A阴性的亚群，该结果证实Pou6f2
?/?小鼠特异性丢失了POU6F2阳性RGCs。
2. **Pou6f2
?/?小鼠视觉功能受损**：OMR测试显示，Pou6f2
?/?小鼠最大视觉 acuity 为0.229 cyc/deg，显著低于野生型的0.313 cyc/deg，平均降低27%（p=0.026）。对比敏感度方面，野生型呈典型倒U型曲线，峰值在0.192 cyc/deg；而敲除小鼠曲线平坦，在所有空间频率（除0.400 cyc/deg外）均显著降低，其中在0.192 cyc/deg处野生型敏感度约为敲除小鼠的4.5倍。
3. **Pou6f2
?/?小鼠捕食行为缺陷**：在蟋蟀捕食测试中，敲除小鼠完成捕食所需总时间平均为113.98秒，约为野生型（40.43秒）的2.3倍（p=0.014）。各阶段时间均显著延长：探索时间（6.62秒 vs 3.24秒，p=0.044）、调查时间（80.96秒 vs 8.82秒，p=0.003）、最终尝试时间（76.56秒 vs 7.07秒，p<0.001）。敲除小鼠常表现出犹豫、接近后仅嗅探而不尝试捕获等行为。
4. **单眼视神经 crush 对捕食行为的影响**：对野生型和敲除小鼠进行左眼ONC后，野生型小鼠所有捕食阶段时间均显著增加（调查时间增加7倍，最终尝试时间增加8倍，均p<0.05），而敲除小鼠除探索时间外无显著变化。ONC后野生型小鼠的行为指标与敲除小鼠术前水平接近，表明Pou6f2
?/?小鼠的捕食缺陷已相当于单眼视觉受损状态。
讨论部分指出，POU6F2阳性RGCs与CART阳性RGCs是ON-OFF方向选择性RGCs的不同亚群，具有不同的脑内投射模式。POU6F2-Hoxd10阳性RGCs主要投射至副视系统（包括视束核），而非上丘和外侧膝状体，这可能解释了与Krizan等研究（删除星暴无长突细胞后捕食行为正常）的差异。此外，POU6F2在人类中标记parasol RGCs，这些细胞形成大细胞（magnocellular, M）通路，与图像稳定相关，且是青光眼中最早死亡的细胞之一。研究结论：Pou6f2
?/?小鼠的捕食行为、视觉 acuity 和对比敏感度缺陷源于特异性丢失POU6F2阳性RGCs，这些细胞对于双眼视觉引导的捕食行为至关重要。研究强调了特定RGC亚型在复杂视觉行为中的关键作用，并为理解POU6F2相关疾病（青光眼、近视、阅读障碍）提供了行为学基础。
