《Frontiers in Immunology》：Monocyte–plasma cell communication characterizes treatment-associated peripheral immune remodeling in Guillain–Barré syndrome
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背景：格林-巴利综合征（GBS）是一种急性免疫介导的多发性神经根神经病，涉及多方面的致病机制。尽管体液免疫是GBS发病机制的核心，但在单细胞分辨率下，症状性疾病和临床恢复期间外周免疫网络的纵向变化仍不完全清楚。方法：研究人员对从一名GBS患者的症状期和临床恢复
背景：格林-巴利综合征（GBS）是一种急性免疫介导的多发性神经根神经病，涉及多方面的致病机制。尽管体液免疫是GBS发病机制的核心，但在单细胞分辨率下，症状性疾病和临床恢复期间外周免疫网络的纵向变化仍不完全清楚。方法：研究人员对从一名GBS患者的症状期和临床恢复期采集的外周血单个核细胞（PBMCs）进行了纵向单细胞RNA测序（scRNA-seq）。检查了免疫细胞组成、转录程序、细胞间通讯和基因调控网络的变化，特别关注浆细胞、单核细胞、B细胞和推定双阴性T细胞（DNTs）。结果：浆细胞、单核细胞和推定DNTs表现出阶段依赖性转录重塑。在GBS期，浆细胞表现出分泌和IgG相关程序的增加，与增强的抗体产生活性一致。单核细胞相对比例较高，并显示抗原呈递和炎症通路富集。细胞-细胞通讯分析表明，在GBS期，从单核细胞向B细胞和浆细胞的BAFF和APRIL信号推断更强，提示单核细胞可能对体液激活有贡献。调控网络分析在炎症性单核细胞程序中识别出SPI1相关活性。同时，推定DNTs表现出相对较高的推断输出细胞因子信号，以及核糖体生物发生和蛋白质合成通路的富集。在恢复期，浆细胞分泌特征减弱。B细胞上调记忆和调节相关基因，炎症性单核细胞程序减少，恢复期样本中推断的DNT相关细胞因子信号降低，并伴有受体介导和粘附相关转录程序。结论：总的来说，这些发现提供了GBS中外周免疫重塑的纵向单细胞视图，并强调了阶段相关的单核细胞-B细胞调节轴以及GBS期和恢复期样本之间DNT相关推断细胞因子信号的差异。
格林-巴利综合征（Guillain–Barré syndrome，GBS）是一种急性免疫介导的多发性神经根神经病，其病理机制涉及体液免疫和细胞免疫的复杂交互。尽管已知抗神经节苷脂抗体和T细胞-巨噬细胞相互作用参与神经损伤，但外周免疫细胞在症状期和恢复期如何协同重塑仍缺乏单细胞层面的纵向解析。现有治疗（如静脉注射免疫球蛋白IVIg和血浆置换）虽有效，但其对免疫细胞组成、转录状态和细胞间通讯网络的系统性影响尚不明确。为解决这一困境，研究人员对一名61岁男性GBS患者（急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病亚型，IVIg治疗后）的症状期（发病21天）和恢复期（发病99天）外周血单个核细胞（PBMCs）进行纵向单细胞RNA测序（scRNA-seq），旨在揭示阶段依赖性的免疫网络重组。研究发现，GBS期伴随浆细胞（PCs）分泌程序增强、单核细胞炎症性激活及BAFF/APRIL信号向B细胞和浆细胞的推断增强，而恢复期则呈现记忆性B细胞特征、单核细胞调节性转变及双阴性T细胞（DNTs）信号减弱。该研究发表于《Frontiers in Immunology》，为理解GBS治疗相关的免疫重塑提供了单细胞视角，并提名单核细胞-B细胞调节轴作为潜在关键机制。
关键技术方法：本研究采用纵向单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术，对一名GBS患者（61岁男性，IVIg治疗后）的两个时间点（症状期：发病21天，GBS样本；恢复期：发病99天，恢复样本）的PBMCs进行测序。样本来源为单例患者，无匹配对照。细胞活力分别为92%和96%，使用10x Genomics Chromium平台生成文库，测序后通过Cell Ranger v8.0.1比对至GRCh38-2024-A参考基因组。数据预处理使用Seurat v5.4.0，过滤标准为基因数200-6000、线粒体比例<10%，双细胞使用scDblFinder去除。细胞注释基于经典标记基因，鉴定出16个细胞簇。细胞间通讯分析使用CellChat v2.2.0（基于配体-受体相互作用推断），转录因子调控网络使用SCENIC v1.3.1和iRegulon分析。差异表达基因（DEGs）筛选标准为Bonferroni校正P<0.05、检出率>25%、绝对平均log2倍数变化>0.58（iRegulon分析放宽至0.25）。所有统计分析均为探索性细胞水平比较，未进行患者水平推断。
研究结果：
结果1：单细胞分析揭示GBS中循环免疫细胞的阶段依赖性重塑。通过UMAP聚类识别出16个细胞簇，包括单核细胞、浆细胞、B细胞、T细胞亚群等。比较GBS期和恢复期细胞比例，发现单核细胞在GBS期相对比例更高，而推定双阴性T细胞（DNTs）、CD8
+ T细胞和自然杀伤（NK）细胞在恢复期比例更高。差异表达基因（DEGs）分析显示浆细胞和单核细胞拥有最多DEGs，提示其阶段依赖性转录变化。
结果2：阶段依赖性体液重塑将浆细胞激活与记忆相关B细胞特征联系起来。在GBS期，浆细胞（PCs）富集内质网相关分泌程序（如未折叠蛋白反应、内质网相关降解），并高表达浆细胞标志基因PRDM1、IRF4、XBP1、FKBP11及IgG相关基因IGHG3；恢复期则显示IGHA1表达增加。B细胞在GBS期富集蛋白折叠和伴侣相关通路，恢复期富集B细胞受体（BCR）信号及记忆相关基因（BACH2、FOXP1、KLF2、CCR6）。细胞通讯分析表明，GBS期单核细胞向B细胞和浆细胞的BAFF/APRIL信号推断更强，提示单核细胞可能参与体液激活。
结果3：单核细胞形成阶段依赖性髓系轴，连接炎症激活和体液信号。GBS期单核细胞富集抗原呈递（MHC II类）和炎症通路，高表达HLA-DRA、SPI1（PU.1，髓系分化转录因子）和TNFSF13（APRIL）；恢复期则显示调节性特征，如FOXP1、BCL2及M2巨噬细胞转录特征。代谢特征显示GBS期单核细胞偏向糖酵解，恢复期偏向脂质代谢。细胞通讯分析证实GBS期单核细胞有更强的BAFF/APRIL信号输出，以及CCL趋化因子通路参与。
结果4：GBS期炎症性单核细胞中SPI1相关调控网络富集。SCENIC分析显示SPI1是GBS期单核细胞最突出的转录因子活性。iRegulon分析进一步识别SPI1结合基序（TRANSFAC Pro M01203），其预测靶基因包括TNFSF13（APRIL）和TNFSF13B（BAFF），提示SPI1可能调控BAFF/APRIL相关的体液支持信号。
结果5：推定双阴性T细胞在GBS和恢复期之间的阶段相关转录重塑。在GBS期，DNTs富集蛋白质合成和核糖体生物发生通路，并具有较高的推断输出细胞因子信号（如MIF、VISFATIN、CypA）；恢复期则富集受体介导信号和细胞粘附通路，并表现出更高的细胞溶解活性。代谢分析显示GBS期DNTs偏向糖酵解和三羧酸循环，恢复期偏向脂质代谢。DNTs在恢复期相对比例更高，且其推断输出信号在恢复期减弱。
讨论与结论：本研究通过纵向单细胞转录组分析，描绘了GBS患者从症状期到恢复期的外周免疫协同重塑。主要发现包括：GBS期浆细胞分泌增强、单核细胞炎症性激活及BAFF/APRIL信号的推断增强，恢复期则呈现记忆性B细胞特征、单核细胞调节性转变及DNTs信号减弱。SPI1被识别为炎症性单核细胞中潜在的转录调控因子，可能连接髓系激活与体液信号。研究结论翻译如下：总的来说，这些发现提供了GBS中外周免疫重塑的纵向单细胞视图，并强调了阶段相关的单核细胞-B细胞调节轴以及GBS期和恢复期样本之间DNT相关推断细胞因子信号的差异。该研究受限于单例患者设计，未进行蛋白质水平验证，但为后续大样本验证和机制研究提供了假设生成基础。
