《Frontiers in Veterinary Science》：Limited IgM seroreactivity to arboviruses in free-ranging black-tufted marmosets (Callithrix penicillata)
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虫媒病毒是导致人类疾病的重要原因，若干种病毒也可感染可能作为扩增宿主的野生动物。其中，黄热病病毒（Orthoflavivirus flavi）是新热带灵长类动物发病率和死亡率的主要原因。除黄热病病毒外，在这些动物中还报道了多种其他虫媒病毒。例如，在自由放养的狨
虫媒病毒是导致人类疾病的重要原因，若干种病毒也可感染可能作为扩增宿主的野生动物。其中，黄热病病毒（Orthoflavivirus flavi）是新热带灵长类动物发病率和死亡率的主要原因。除黄热病病毒外，在这些动物中还报道了多种其他虫媒病毒。例如，在自由放养的狨猴和卷尾猴中检测到寨卡病毒（Orthoflavivirus zikaense）。在Alouatta spp.和Ateles spp.中发现了针对登革病毒（Orthoflavivirus denguei）的抗体，而Sapajus spp.、Ateles marginatus和Callithrix jacchus已被证明可产生针对基孔肯雅病毒（Alphavirus chikungunya）的中和抗体。在本研究中，研究人员评估了生活在城市公园中的自由放养黑簇绒狨（Callithrix penicillata）中针对虫媒病毒（A. chikungunya、O. zikaense、O. denguei和O. flavi）的抗体。推定血清反应性的频率较低，捕获的狨猴中有2.94%（2/68）对A. chikungunya（IgM）呈血清反应性，1.47%（1/68）对O. zikaense（IgM）呈血清反应性。一只狨猴对两种病毒（A. chikungunya和O. zikaense）均呈血清反应性。血清样本中未检测到虫媒病毒基因组序列，但由于样本限制，未对血清反应性动物进行RT-PCR检测。本研究提供了有限的证据，表明在这些病毒在人类群体中呈地方性流行的区域，自由放养的黑簇绒狨对虫媒病毒存在推定血清反应性。
**研究背景与问题**
虫媒病毒（arboviruses）通过节肢动物传播，对人类健康造成重大影响，其中黄病毒属（Orthoflavivirus）包括黄热病病毒（Orthoflavivirus flavi）、登革病毒（Orthoflavivirus denguei）、圣路易斯病毒（Orthoflavivirus louisense）、西尼罗病毒（Orthoflavivirus nilense）和寨卡病毒（Orthoflavivirus zikaense），而甲病毒属（Alphavirus）包括基孔肯雅病毒（Alphavirus chikungunya）。这些病毒可在人类与无脊椎动物媒介之间传播，或从野生动物/家养动物传播至媒介，这些动物作为扩增宿主（amplifying hosts）促进后续人类感染。新热带灵长类动物在虫媒病毒流行病学中具有哨兵作用，尤其是黄热病病毒可导致其高死亡率。然而，除黄热病病毒外，其他虫媒病毒（如O. zikaense、O. denguei、A. chikungunya）在自由放养灵长类动物中的自然感染证据有限，且不同物种的易感性和血清反应性存在差异。黑簇绒狨（Callithrix penicillata）是一种高度适应城市环境的小型新热带灵长类动物，已有研究报道其可感染O. flavi、O. zikaense，并存在针对A. chikungunya的血清学证据。但该物种在虫媒病毒地方性流行区域（如巴西贝洛奥里藏特市）的血清反应性频率尚不明确，且缺乏系统性的多病毒筛查。为此，研究人员开展了本研究，旨在评估自由放养黑簇绒狨对多种虫媒病毒的推定血清反应性，以了解其作为潜在扩增宿主或哨兵的作用。
**研究内容与结论**
研究人员在巴西贝洛奥里藏特市的六个城市公园中捕获了68只自由放养的黑簇绒狨，采集了72份血清样本（含4只重捕动物）。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测针对A. chikungunya、O. zikaense、O. denguei和O. flavi的IgM和IgG抗体，并利用多重RT-qPCR检测病毒RNA。结果显示，仅有2.94%（2/68）的动物对A. chikungunya（IgM）呈血清反应性，1.47%（1/68）对O. zikaense（IgM）呈血清反应性，其中一只动物对两种病毒均呈阳性。所有样本对A. chikungunya IgG、O. denguei IgM、O. zikaense IgG和O. flavi IgM均无反应性。RT-qPCR未检测到病毒核酸，但血清反应性动物因样本量不足未进行分子检测。该研究证明，在人类群体中虫媒病毒高度流行的区域，自由放养黑簇绒狨的推定血清反应性频率较低，表明该物种可能不是这些病毒的主要扩增宿主，但其血清学证据仍提示存在低水平暴露。论文发表在《Frontiers in Veterinary Science》。
**关键技术方法**
研究人员从巴西贝洛奥里藏特市六个公园（Parque Aggeo Pio Sobrinho、Parque Fazenda Lagoa do Nado、Parque das Mangabeiras、Parque da Serra do Curral、Parque Ursulina de Andrade Mello、Belo Horizonte Zoo）捕获黑簇绒狨，采集血清样本。主要技术方法包括：（1）采用商业ELISA试剂盒检测抗A. chikungunya（IgG/IgM，EUROIMMUN）和抗O. zikaense（IgG/IgM，Vircell）抗体，抗O. denguei IgM试剂盒（Panbio Dengue IgM Capture ELISA，Abbot）检测登革病毒IgM，以及自制间接ELISA（基于抗人IgM捕获和O. flavi抗原）检测黄热病病毒IgM；（2）利用多重RT-qPCR（Trioplex Real-Time RT-PCR Assay试剂盒，CDC提供）检测O. zikaense、O. denguei、A. chikungunya RNA，以及针对O. flavi和泛黄病毒（Pan-Flavi）的特异性引物/探针进行RT-qPCR。所有血清样本均来自2022-2023年捕获的动物，部分样本因体积限制未进行所有检测。
**研究结果**
**3 Results**
对68只自由放养黑簇绒狨的72份血清样本进行血清学评估。结果显示，2只动物（2/68, 2.94% [95%二项式CI=0.36-10.22%]）在A. chikungunya抗IgM检测中呈血清反应性。其中一只重捕动物（间隔三个月）的两次样本均对O. zikaense抗IgM检测呈阳性。O. zikaense（IgM）的推定血清反应性频率为1.47%（1/68 [95% CI=0.04-7.92%]）。阳性动物为一只成年雄性和一只成年雌性，均捕获于Parque das Mangabeiras公园。所有血清样本对A. chikungunya抗IgG、O. denguei抗IgM、O. zikaense抗IgG和O. flavi抗IgM均无反应性。由于阳性频率低，无法进行性别和年龄组间的有效比较。16份血清样本（来自68只捕获动物）进行了RT-qPCR检测，针对O. zikaense、O. denguei、O. flavi、A. chikungunya RNA和泛黄病毒检测，结果均为阴性，但血清反应性动物未接受RT-PCR检测。
**讨论与结论**
讨论部分指出，本研究中自由放养黑簇绒狨对虫媒病毒的血清反应性频率较低（2.94%），与先前在新热带灵长类动物中的报道一致（如东北地区狨猴的2.9%血清反应性）。阳性动物均来自Parque das Mangabeiras，该公园面积最大（236公顷），毗邻居民区和矿区。研究人员注意到，其中一只动物在2022年4月和7月两次捕获时均对A. chikungunya和O. zikaense呈IgM阳性，提示IgM反应可能持续数月，但这一结果也需考虑检测特异性、非特异性结合和交叉反应性的可能性。虫媒病毒之间（尤其是O. zikaense与O. denguei，以及与其他黄病毒和A. chikungunya）存在血清学交叉反应，因此无法仅凭ELISA结果确定引发抗体反应的具体病毒，暴露于多种病毒的可能性也无法排除。由于样本体积限制，未进行空斑减少中和试验（PRNT）以确认特异性。所有动物对黄热病病毒血清学检测均无反应性，这与该物种对该病毒相对较低的死亡率一致。ELISA采用的抗人Ig二抗此前已被验证可有效检测新热带灵长类动物抗体。研究结论部分翻译如下：总之，在虫媒病毒在人类群体中呈地方性流行的区域，自由放养黑簇绒狨对虫媒病毒的推定血清反应性频率较低。此外，血清样本中未检测到虫媒病毒基因组序列，但血清反应性动物因样本限制未进行RT-PCR检测。
