《RSC Pharmaceutics》：Restoration of tumor suppression and improved anticancer efficacy following nanoparticles-mediated combined anti-miRNA 21 and 5-fluorouracil therapy in colorectal cancerOpen Access
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RNA干扰（RNAi），尤其是通过微小RNA（microRNA，miRNA）调控，已成为通过精确靶向并降解特定mRNA转录本以干预遗传性疾病的重要治疗策略。5-氟尿嘧啶（5-FU）是治疗结直肠癌的基础化疗药物，具有广谱抗癌效力，但耐药性与脱靶副作用显著限制其临
RNA干扰（RNAi），尤其是通过微小RNA（microRNA，miRNA）调控，已成为通过精确靶向并降解特定mRNA转录本以干预遗传性疾病的重要治疗策略。5-氟尿嘧啶（5-FU）是治疗结直肠癌的基础化疗药物，具有广谱抗癌效力，但耐药性与脱靶副作用显著限制其临床疗效。miRNA 21在乳腺癌、肺癌、前列腺癌及结直肠癌等多种恶性肿瘤中异常高表达，且在结直肠癌中与肿瘤进展和转移呈强正相关。本研究探讨抗miRNA 21与5-FU共递送增强结肠癌治疗效果的潜力。研究人员发现，该联合纳米制剂诱导的凋亡响应显著优于单药（7.39±0.46%），较5-FU单药（5.56±0.06%）提升1.33倍，较抗miRNA 21单药（3.59±0.04%）提升2.06倍。结果表明，这种双模态策略可通过有效促进凋亡、潜在降低高剂量单药相关不良反应来改善癌症治疗。
研究背景与立项依据
结直肠癌（CRC）为全球第三大高发癌症，2020年新发约190万例、死亡约90万例。5-氟尿嘧啶（5-FU）通过抑制胸苷酸合成酶（TS）阻断DNA复制所需脱氧核苷酸池，并可掺入RNA/DNA引发断裂，但存在半衰期短（10–20分钟）、口服生物利用度低、胃肠毒性和耐药等瓶颈。miRNA 21在CRC中显著上调，通过下调KRIT1激活β-catenin信号促进增殖并抑制凋亡，且参与介导5-FU耐药。研究人员拟将抗miRNA 21与5-FU共载于聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）负电纳米粒，利用肿瘤高通透长滞留效应实现共递送，逆转miRNA 21介导的耐药并增敏化疗。该文发表于《RSC Pharmaceutics》。
主要关键技术方法
研究人员采用双乳化溶剂挥发法制备负载5-FU、FAM标记锁核酸抗miRNA 21（anti-miRNA 21）及双药的PLGA纳米粒，以人结肠腺癌HT-29细胞（购自ATCC）为体外模型；通过动态光散射（DLS）测粒径/PDI/ζ电位，透射电镜（TEM）与原子力显微镜（AFM）确证形貌；以香豆素6示踪结合DAPI核染评估摄取；MTT法测活力，Calcein AM/碘化丙啶（PI）活死染色计数，流式Annexin V-FITC/PI分选凋亡；ELISA定量IL-8与PTEN，单因素ANOVA+Tukey检验（p<0.05为显著）。
研究结果
3.1 纳米制剂理化表征：优化双载PLGA粒径183.3±2.1 nm，PDI 0.08±0.05，ζ电位?25.7±1.8 mV，anti-miRNA 21包封率83.2±0.9%、5-FU 90.4±0.3%，药物负载分别为1.73%与19.82%，总载药21.55%。
3.2 TEM分析：150–200 nm均匀球形、无聚集。
3.3 AFM分析：二维/三维形貌证实分散良好、表面光滑、近球形。
3.4 细胞摄取：香豆素6绿光定位于胞质近核区，DAPI蓝染核，证实HT-29高效内吞。
3.5 细胞毒性（MTT）：24/48/72 h时联合组存活率降幅最大（24 h降42.0±2.8%），优于5-FU单药（31.5±3.1%）与anti-miRNA 21单药（19.9±2.8%）。
3.6 活死染色：死/活比联合组3.72±0.21，高于5-FU组2.80±0.28与anti-miRNA 21组1.92±0.22。
3.7 IL-8表达：对照组最高；5-FU NPs降26.6±4.0，anti-miRNA 21 NPs降49.7±5.4，联合组降63.9±3.8，提示炎症微环境被抑制。
3.8 PTEN表达：安慰剂1.01±0.09，5-FU NPs 1.53±0.06，anti-miRNA 21 NPs 1.72±0.06，联合组2.12±0.26（fold change相对对照），肿瘤抑制因子恢复最强。
3.9 凋亡（流式）：对照1.9±0.2%，anti-miRNA 21 3.6±0.04%，5-FU 5.6±0.06%，联合7.4±0.5%；联合组较5-FU单药1.33倍、较anti-miRNA 21单药2.06倍。
讨论浓缩
研究人员指出，5-FU受限源于快速清除与耐药，miRNA 21高表达既促癌又助耐药；PLGA负电纳米粒（FDA/EMA批准）凭EPR效应与共载控制释放克服递送障碍。TEM/AFM/DLS证实体外质量；摄取实验显示胞质近核分布利于RNAi发生于胞质。MTT与活死染色一致显示联合组细胞减活最强；IL-8下调表明抗炎微环境重塑，PTEN上调证伪PI3K/Akt通路再激活，凋亡流式定量确认双通路协同。差异源于各 assay 终点不同（代谢活性/膜完整性/磷脂酰丝氨酸外翻）。局限在于未做血清稳定性、释放动力学、RT-qPCR直接定量miRNA 21敲低及体内小鼠验证。
结论翻译
5-氟尿嘧啶（5-FU）因强效抗癌是CRC化疗基石，但耐药限制疗效；miRNA 21高表达关联结肠肿瘤生长、侵袭及凋亡抵抗，使癌细胞对5-FU不敏感。结果表明，双药策略通过同时激活多条凋亡通路增强疗效。综上，本研究揭示基于纳米颗粒的联合治疗在有效诱导凋亡、潜在减轻高剂量单药不良反应方面改善CRC治疗结局的潜力。
