《Molecular Therapy》：Viral gene replication enhances AAV vector quality and reduces manufacturing costs
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摘要用于基因和细胞治疗的病毒载体通常是通过将质粒转染到哺乳动物细胞中制备的。由于质粒DNA在这些细胞中不会复制，因此需要大量质粒才能表达足够的病毒蛋白用于载体包装，这大大增加了制造成本以及质粒衍生的污染物问题。在此，我们利用人类腺病毒的DNA复制机制，在HEK293细胞中高效扩增
摘要
用于基因和细胞治疗的病毒载体通常是通过将质粒转染到哺乳动物细胞中制备的。由于质粒DNA在这些细胞中不会复制，因此需要大量质粒才能表达足够的病毒蛋白用于载体包装，这大大增加了制造成本以及质粒衍生的污染物问题。在此，我们利用人类腺病毒的DNA复制机制，在HEK293细胞中高效扩增质粒DNA，用于制备腺相关病毒（AAV）载体。这种方法使得制备载体时所需的编码AAV病毒基因的质粒量减少10-20倍，而细胞内的复制过程可使DNA扩增400倍，从而满足包装需求。病毒基因的协同扩增与表达能够再现野生型AAV的生物学特性，从而使基因治疗载体具备高包装效率和强感染力等优势。在AAV载体制备过程中应用这一方法，可以提高产量和完整衣壳比例，减少质粒骨架污染物，还能显著提升载体的效力，其在体外和体内的效力均可提高三倍。基于细胞内质粒DNA复制的AAV载体制备技术在不同血清型和转基因中均表现有效，为提高AAV基因治疗的安全性、有效性及可及性带来了广阔前景。此外，哺乳动物细胞中的质粒DNA复制技术还可能在基因和细胞治疗载体的生物制造领域带来多种应用可能。
刘浩|杜艾玲|刘楠|马扬克·卡帕迪亚|陈旭鹏|梁佳玲|李吉顺|谢军|高光平|王丹
美国马萨诸塞州伍斯特市01605，马萨诸塞大学陈医学院遗传与细胞医学系Horae基因治疗中心
