《Journal of Biochemical and Molecular Toxicology》：Methotrexate Alters Nrf2/HO-1 Protein Expression and Intrinsic Apoptosis-Associated Protein Responses in OVCAR-3 Ovarian Cancer Cells: Differential Modulation by Antioxidant Compounds
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甲氨蝶呤（MTX）主要通过叶酸途径抑制发挥细胞毒性作用；然而，越来越多的证据表明，MTX诱导的氧化应激和线粒体凋亡显著促进细胞损伤。本研究旨在探讨MTX诱导的OVCAR-3卵巢癌细胞氧化还原失衡和内源性凋亡激活，并评估亚硒酸钠、褐藻糖胶、咖啡酸和白藜芦醇是否差
甲氨蝶呤（MTX）主要通过叶酸途径抑制发挥细胞毒性作用；然而，越来越多的证据表明，MTX诱导的氧化应激和线粒体凋亡显著促进细胞损伤。本研究旨在探讨MTX诱导的OVCAR-3卵巢癌细胞氧化还原失衡和内源性凋亡激活，并评估亚硒酸钠、褐藻糖胶、咖啡酸和白藜芦醇是否差异性调节氧化还原和线粒体信号通路。将OVCAR-3细胞暴露于MTX（10 μM）单独或联合亚硒酸钠（SS）、褐藻糖胶（FUC）、咖啡酸（CA）或白藜芦醇（RSV）处理24 h。检测氧化应激参数，包括总抗氧化能力（TAC）、总氧化能力（TOC）、氧化应激指数（OSI）和丙二醛（MDA）。通过ELISA定量氧化还原信号蛋白（Nrf2和HO-1）及内源性凋亡标志物（Bax、Bcl-2、细胞色素c、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3）。MTX显著降低TAC，同时升高TOC、OSI和MDA水平，表明存在明显的氧化失衡。同时，Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著降低。MTX还增加了Bax/Bcl-2比值、细胞色素c蛋白水平以及cleaved caspase-9和caspase-3水平，与内源性线粒体凋亡信号激活一致。抗氧化剂联合处理部分恢复了氧化还原平衡，并减弱了内源性凋亡相关蛋白标志物的改变。在所检测浓度中，白藜芦醇的调节作用最强。MTX诱导OVCAR-3细胞中氧化还原依赖性内源性凋亡相关蛋白的协调改变。Nrf2和HO-1蛋白表达与细胞色素c–caspase信号的整合评估为MTX诱导的细胞应激反应提供了支持性证据。所选抗氧化剂部分调节该通路，提示其在氧化还原相关化疗应激中具有调节作用。
论文解读
卵巢癌是全球女性致死性最高的妇科恶性肿瘤之一，其高死亡率与晚期诊断、侵袭性肿瘤生物学行为及化疗耐药密切相关。甲氨蝶呤（MTX）作为叶酸拮抗剂，通过抑制二氢叶酸还原酶干扰核苷酸合成而发挥细胞毒作用。然而，近年证据表明，MTX除抑制叶酸代谢外，还可诱导活性氧（reactive oxygen species, ROS）过度产生，破坏NADPH依赖性氧化还原稳态，导致脂质过氧化和氧化性DNA损伤，进而促进线粒体功能障碍和细胞凋亡。核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）轴是维持细胞氧化还原稳态的核心防御通路，其失调与化疗耐药和氧化损伤密切相关。然而，MTX在卵巢癌细胞中是否通过该通路及内源性凋亡（intrinsic apoptosis）途径产生蛋白水平的协调改变，以及不同类别抗氧化剂是否能差异性调节这些反应，此前尚缺乏系统研究。该论文发表于《Journal of Biochemical and Molecular Toxicology》。研究人员为此在OVCAR-3人卵巢腺癌细胞中开展了综合评估。
研究人员将OVCAR-3细胞（来源于美国典型培养物保藏中心，ATCC）暴露于MTX（10 μM）单独或联合亚硒酸钠（SS）、褐藻糖胶（FUC）、咖啡酸（CA）或白藜芦醇（RSV）处理24小时，检测了代谢活性、氧化应激参数、氧化还原信号蛋白和内源性凋亡蛋白标志物。主要技术方法包括：MTT法检测代谢活性；比色法试剂盒测定总抗氧化能力（total antioxidant capacity, TAC）、总氧化能力（total oxidant capacity, TOC）、氧化应激指数（oxidative stress index, OSI）和丙二醛（malondialdehyde, MDA）；酶联免疫吸附测定（ELISA）定量Nrf2、HO-1、Bax、Bcl-2、细胞色素c（cytochrome-c）、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白水平；采用单因素方差分析和Tukey事后检验进行统计比较。该研究无患者样本队列，仅使用商业细胞系。
研究结果如下：
3.1 甲氨蝶呤和抗氧化剂联合处理对MTT代谢活性的影响：通过MTT实验发现，MT
