《The Veterinary Journal》：Subclinical infection with Anaplasma phagocytophilum and gastrointestinal nematodes results in reduced weight gain in grazing weaned lambs
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摘要
嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum, AP）是一种经蜱传播的细菌，是绵羊蜱传热（tick-borne fever, TBF）的病原体。TBF的临床症状严重程度不一，可表现为无症状至致死性，该疾病通常表现为免疫抑制。研
摘要
嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum, AP）是一种经蜱传播的细菌，是绵羊蜱传热（tick-borne fever, TBF）的病原体。TBF的临床症状严重程度不一，可表现为无症状至致死性，该疾病通常表现为免疫抑制。研究人员描述了在英国养殖环境中自然发生的AP感染对羔羊福利（体重、dag评分和粪便虫卵计数（faecal egg counts, FEC））的影响。2022年，在一组正在进行寄生虫田间研究的羔羊中偶然诊断出TBF。在21周内每两周收集一次羔羊生产性能和圆线虫FEC数据，并在研究结束时采集血液用于AP定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction, qPCR）检测。在101只羔羊中，16只检测阳性（4只有临床症状，12只亚临床感染），1只结果不确定，84只阴性。线性模型以出生体重和圆线虫FEC作为连续协变量，比较各组间的平均总体重增长。亚临床感染组在21周内的总体重增长出现2.5 kg的亏损。感染与未感染羔羊的圆线虫FEC无显著差异，但在TBF阳性动物中，圆线虫FEC升高与体重降低相关，而在TBF阴性动物中无此关联。其他临床参数与AP感染无相关性。2.5 kg的体重减少与挪威的研究结果（3.8 kg损失）相似，且该效应在圆线虫虫卵计数较高的动物中似乎更为显著，提示两种感染之间存在相互作用。鉴于AP在英国蜱虫和牲畜种群中已被识别，有必要在英国特定管理体系下进一步研究AP对羔羊生产性能的长期影响。
论文解读文章
**研究背景与问题**
蜱是一类蛛形纲外寄生虫，同时也是威胁动物、人类健康及农业生产的重要疾病传播媒介（de la Fuente et al., 2023）。气候变化、动物迁移和土地利用变化在全球范围内扩大了蜱的分布范围（Da Re et al., 2025; Elmieh, 2022），导致蜱传疾病负担日益加重。蜱传疾病是畜牧生产面临的最大威胁之一，也是仅次于蚊媒疾病的人类健康第二大威胁（Phipps and Johnson, 2022）。嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum, AP）是一种经蜱传播的细菌病原体，可引起人类粒细胞无形体病以及多种哺乳动物疾病，包括绵羊蜱传热（tick-borne fever, TBF）、牛牧场热、马粒细胞无形体病等。在英国，AP感染被认为分布广泛，是报道最多的蜱传疾病，但监测数据有限，且通常仅在出现异常继发感染或严重临床表现时才被怀疑，因此该病的实际流行率很可能被严重低估。胃肠道线虫（gastrointestinal nematodes, GIN）在放牧牲畜中普遍存在，是绵羊产业生产损失的主要原因，每年给英国造成约4000万英镑的经济损失（Charlier et al., 2020）。已有研究表明寄生虫共感染可增加宿主对疾病的易感性，但关于GIN与AP等病原体在宿主体内相互作用的研究仍十分有限（Hananeh et al., 2022）。目前常用的GIN感染诊断方法是粪便虫卵计数（faecal egg count, FEC），而dag评分等福利指标也被用于监测牲畜健康状况，但dag评分与微生物感染之间的关联尚不清楚。本研究旨在确定AP感染对羔羊福利、线虫感染和体重增长的影响，评估AP感染与dag评分、FEC和活重之间的相关性，以明确AP感染对动物福利和生产力的影响。
**研究内容与方法**
研究人员利用2022年在苏格兰彭尼库克（Penicuik）Firth Mains农场开展的一项寄生虫田间研究中偶然发现的AP自然感染事件，对101只母羔羊从出生即2022年4月初开始进行了为期21周（2022年5月至9月）的追踪研究。羔羊每两周进行一次采样，记录体重并使用AWIN福利评估方案（Ruiz and Dwyer, 2015）对粪便污染（dag评分）、呼吸窘迫、羊毛状况、损伤和跛行等五项福利指标进行评分。直肠采集粪便样本，采用盐浮选技术（比重1.2 SG，灵敏度为1个虫卵/克粪便）在Moredun研究所进行圆线虫和细颈线虫（Nematodirus spp.）虫卵计数（Christie and Jackson, 1982）。研究结束时采集颈静脉血，分离白膜层（buffy coat）后提取DNA，采用定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction, qPCR）检测AP，依据Courtney et al.（2004）的方案并加以修改，以Actin作为内源性对照。数据分析使用R 4.4.0软件，通过线性模型比较AP阳性组与阴性组的总体重增长，以第0周体重作为协变量；使用线性混合效应模型（R包‘glmmTMB’）分析AP对体重随周次变化的影响，纳入周次、驱虫治疗、AP检测结果和圆线虫FEC等固定效应以及个体随机效应；使用负二项广义线性混合模型分析AP对圆线虫FEC的影响；使用二项广义线性混合模型分析AP对dag评分的影响。模型均通过似然比检验（likelihood ratio tests, LRTs）进行简化，事后比较采用‘emmeans’包。
**研究结果**
**AP感染的存在。** 在21周研究期间，100只母羔羊记录了完整的福利数据。在第17至19周之间，9只羔羊出现临床症状，包括咳嗽、震颤、呼吸费力增加和发热。对其中7只症状动物的血液样本进行了AP qPCR检测，4只检测阳性，2只阴性，1只结果不确定。第21周对所有羔羊采血并进行AP qPCR检测，结果显示16只阳性（4只有临床症状，12只亚临床感染），84只阴性，亚临床感染率为10%，总感染率为16%。大多数感染羔羊（12/16，75%）为无症状感染。
**AP与体重之间的关联。** 原始数据显示，AP阳性动物在整个实验期间的体重增长（均值=25.2 kg，标准误=0.8 kg）低于阴性动物（均值=27.4 kg，标准误=0.4 kg），差异具有统计学意义（F=6.55, DF=1, P=0.012）。将AP变量分为三组（阴性、阳性非临床和阳性临床）后，临床（N=4；均值=24.8 kg，标准误=0.83 kg）和非临床（N=13；均值=25.4 kg，标准误=1.01 kg）动物之间的总体重增长无显著差异（事后检验P=0.235）。周特异性分析显示，AP与周次之间存在显著交互作用（χ28=27.39, P<0.001），其中第19周（估计值=2.16 kg，标准误=1.11 kg，P=0.051）和第21周（估计值=2.37 kg，标准误=1.10 kg，P=0.031）的体重差异最大，AP阳性动物体重低于阴性动物。此外，AP状态与圆线虫FEC之间存在显著交互作用（χ21=11.96, P<0.001），AP阴性动物中FEC与体重无关联，而AP阳性动物中FEC与体重呈负相关。
**AP与圆线虫FEC及dag评分之间的关联。** 负二项广义线性混合模型未显示AP状态与周次之间的交互作用（χ28=9.00, P=0.437）或AP对FEC的主效应（估计值=0.23±0.17标准误，χ21=1.75, P=0.186）。然而，周次对FEC有主效应（χ28=443.06, P<0.001），FEC从第3周到第13周下降，之后维持在较低水平。二项广义线性混合模型未显示AP、周次和FEC之间的交互作用，也未显示AP（χ21=0.19, P=0.665）或FEC（χ21=0.10, P=0.757）对dag评分的主效应，但dag评分随时间变化显著（χ29=85.21, P<0.001），在第21周特别高。
**讨论与结论**
AP感染对反刍动物健康的影响已被充分认识（Woldehiwet, 2008），但亚临床感染的影响尤其在粗放管理牲畜中研究较少。本研究中16%的放牧羔羊经qPCR确认存在活动性AP感染，其中4只出现发热、体况不佳、呼吸费力增加和全身震颤等临床症状，提示可能涉及神经系统。观察到感染羔羊与未感染羔羊之间存在体重差异，第19周和第21周差异最大，与临床症状出现和qPCR阳性结果的时间一致，提示感染发生在8月下旬/9月，与蜱活动高峰期一致。感染羔羊平均总体重增长减少2.5 kg，与挪威羔羊3.8 kg的体重减少相似（Stuen et al., 2002）。由于本研究仅在一个时间点进行AP诊断检测，结果可能低估了羊群中AP的实际存在情况。研究结束时临床与无症状羔羊之间仅相差250 g，相当于健康羔羊约1.3天的生长量，表明无症状感染对体重的影响与临床感染相当。经土霉素（oxytetracycline）和美洛昔康（meloxicam）治疗后，感染羔羊出现恢复迹象，但第21周临床感染动物与未感染动物之间仍存在2.7 kg的体重差异。研究未发现AP感染与各项福利指标或FEC之间的显著关联，但发现AP感染与FEC对体重存在负向交互作用，AP阴性动物未受到圆线虫感染的负面影响，而AP阳性动物则表现出FEC升高与体重下降的关联，这可能与AP感染引起的免疫抑制有关（Whist et al., 2003）。震颤作为本研究中观察到的突出症状，在AP感染的绵羊中未见报道，可能提示英国存在基因型不同的AP变异株，但由于本研究为自然田间环境下的观察性研究，存在诸多不可控变量，尚不能明确将该症状归因于AP。总体而言，本研究结果支持了AP对羔羊生产性能的影响，临床和亚临床感染均导致体重增长减少，且线虫与AP感染之间存在显著的负向交互作用。大多数感染羔羊无症状，提示提高养殖户对AP感染的认知和诊断能力有助于减少生产损失。土霉素治疗显示了恢复的潜力，但需进一步研究AP对羔羊生产性能的长期影响，包括遗传测序以鉴定感染的生态型及其致病性与人畜共患潜能。
