早期胃癌中阿米巴样肿瘤细胞与无髓神经纤维相互作用的超微结构特征：在癌症神经科学背景下的病例报告

《Gastrointestinal Disorders》：Ultrastructural Features of Amoeboid Tumor Cell–Unmyelinated Nerve Fiber Interactions in Early Gastric Cancer: A Case Report Within the Context of Cancer Neuroscience

　　

背景：神经浸润（PNI）是癌症扩散的公认途径，并与胃癌的不良预后相关。然而，早期胃癌中肿瘤-神经相互作用的初始形态学特征，特别是在超微结构水平，仍未充分明确。病例报告：研究人员报告了一例49岁男性，诊断为IIc型早期胃癌。组织学检查显示为混合型低黏附性癌（PCC）-NOS/印戒细胞癌（SRC）组织学类型。肿瘤浸润至黏膜下层中三分之一，伴成熟型促结缔组织增生反应，在2个胃周淋巴结中发现转移（pT1bN1M0）。透射电子显微镜（TEM）显示无髓神经纤维嵌入黏膜下促结缔组织增生性间质中，与浸润的肿瘤细胞紧密相邻。若干肿瘤细胞表现出细胞质突起，从单个延伸至多个显著伪足，形成阿米巴样形态。值得注意的是，在一个肿瘤细胞的细胞质内陷中观察到一条无髓神经突起。结论：综合来看，这些超微结构发现提供了新的、先前未描述的形态学证据，表明早期胃癌黏膜下促结缔组织增生性间质中阿米巴样肿瘤细胞与外周无髓神经纤维之间存在特异性相互作用。这种相互作用在神经浸润早期阶段的生物学和临床意义有待进一步研究。

**论文解读：早期胃癌中阿米巴样肿瘤细胞与无髓神经纤维相互作用的超微结构特征**

**研究背景与问题**

肿瘤微环境（TME）是一个由免疫细胞、神经元、淋巴管、血管及细胞外基质组成的动态异质生态系统。肿瘤细胞通过直接细胞接触或旁分泌信号在称为“肿瘤龛”的特化区域中与宿主细胞通信，从而促进癌症进展和转移。近年来，神经支配龛作为其中一种特殊微环境备受关注，其富含交感、副交感或感觉纤维，通常具有小直径轴突和密集的神经化学信号，通过释放神经递质和神经肽与肿瘤及基质细胞持续相互作用。癌症神经学这一跨学科领域的发展揭示了外周神经系统在多种恶性肿瘤的发生和进展中发挥关键作用，例如通过神经信号影响肿瘤动力学，而癌症也反过来调节TME中的神经回路。

神经浸润（PNI）是癌症扩散的独特途径，定义为肿瘤细胞在神经内、周围和沿神经的侵袭，在多种癌症中是不良预后指标。常规病理学检测通常基于苏木精-伊红（H&E）染色切片，辅以组织化学和免疫组化方法，主要评估Auerbach's（肌间）神经丛或浆膜下软组织中主要神经干水平的PNI。然而，对于早期胃癌（EGC）中肿瘤-神经相互作用的初始形态学特征，尤其是超微结构水平，尚缺乏充分定义。透射电子显微镜（TEM）是识别无髓神经纤维（直径约0.1–3 μm）的金标准，这些纤维在光镜下难以可靠识别，同时TEM可检查神经效应器连接处，即自主神经节后轴突与平滑肌、腺体、免疫细胞等非神经元效应细胞建立动态连接的特化区域。既往超微结构研究多集中于结肠癌远处或近肿瘤区域的神经结构，或晚期胃癌中较大神经干的PNI特征，但尚无针对人类胃癌中神经-肿瘤相互作用的超微结构研究报道。因此，研究人员开展此项研究，旨在通过TEM揭示早期胃癌黏膜下肿瘤间质中具体的神经-肿瘤相互作用模式。

**研究方法**

本研究基于1998年至2005年间意大利墨西拿大学医院“G. Martino”病理科常规处理的光镜和TEM配对标本。样本取自新鲜手术标本，立即平行固定，避免延迟固定或使用存档材料。对于每例病例，从同一解剖区域获取连续组织块：一部分经10%中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋，进行H&E染色；另一部分切成1–2 mm³碎片，经3%磷酸缓冲戊二醛（pH 7.4）固定、1%锇酸后固定、梯度乙醇脱水、Araldite包埋。采用严格的相关取样流程：先在H&E切片上识别黏膜下肿瘤浸润区域，再通过半薄切片（甲苯胺蓝染色）精确定位，最后从对应Araldite块中切取超薄切片，使用JEOL 1200 TEM进行观察和记录。该病例为一名49岁男性，因上腹痛入院，诊断为IIc型早期胃癌，接受胃大部切除术和区域淋巴结清扫术，术后长期随访15年无复发。

**研究结果**

**2. 病例报告**
组织学检查显示，肿瘤为混合型低黏附性癌（PCC）-NOS/印戒细胞癌（SRC），SRC成分超过10%但低于90%。肿瘤浸润至黏膜下层中三分之一，伴成熟型促结缔组织增生反应（根据Ueno分类，无黏液样间质或瘢痕疙瘩样胶原束），在2个胃周淋巴结中发现转移（pT1bN1M0，IB期）。光镜下未见静脉或PNI。黏膜层以SRC细胞为主，黏膜下层则散在分布组织细胞样肿瘤细胞，位于促结缔组织增生性间质中，局部见嗜酸性粒细胞浸润。半薄切片显示，这些肿瘤细胞呈单个、增大、圆形至不规则核，核仁明显。TEM发现，黏膜下促结缔组织增生性间质中存在无髓神经纤维，与浸润的肿瘤细胞紧密相邻。神经-肿瘤界面呈现从单纯接近到高度亲密的形态连续谱，细胞间隙显著变窄（最窄处约52 nm）。肿瘤细胞常向邻近无髓纤维伸出细胞质突起，包括指状突起和宽大的伪足，使部分肿瘤细胞呈现阿米巴样形态。其中，一个阿米巴样肿瘤细胞以双极构型与两条无髓神经纤维连接，无可见细胞间隙；一条神经突起似乎被容纳在肿瘤细胞的细胞质内陷中，且该轴突轮廓未显示局部膨大（varicosity）或突触小泡聚集，因此被解释为无髓轴突的非膨大段。

**3. 讨论**
该案例具有临床病理学特征：低黏附性组织学（含SRC和组织细胞样细胞）、显著的成熟型促结缔组织增生、以及良好的长期预后，类似于Chiaravalli等描述的“低级别弥漫型胃癌”亚型，并与Roviello等报道的PCC-NOS/SRC癌相似，后者生存率优于单纯PCC-NOS。在癌症神经学背景下，人类胃的外周神经系统主要由发育良好的肌间神经节丛（Auerbach's plexus）组成，而黏膜下神经丛（Meissner's plexus）不发达，仅有有限神经节和少量无髓纤维。PNI在晚期胃癌中常见于肌间神经丛或壁外神经干，在早期胃癌中罕见报道。本研究中，肿瘤细胞与神经纤维接触时表现出的细胞质突起（从单个至多个伪足）赋予阿米巴样形态，这与Marcadis等利用坐骨神经PNI小鼠模型证明的“肿瘤细胞依赖阿米巴样迁移实现快速PNI”的结论一致。值得注意的是，阿米巴样肿瘤细胞与无髓神经纤维的质膜直接接触，无可见间隙，且神经突起位于肿瘤细胞包膜内陷中。但该轴突无膨大或突触小泡聚集，不支持将其解释为神经-肿瘤细胞间的突触样连接；然而，沿同一纤维的膨大介导信号不能完全排除，因为膨大是动态且节段性分布的。此外，长期随访无复发提示，早期和局部的肿瘤-神经相互作用不一定对应于侵袭性或进展性PNI过程。**局限性**：该病例缺乏切除标本的内镜或大体照片，但早期胃癌的病理定义基于光镜检测的肿瘤浸润深度，而非大体外观。总之，该研究首次提供了TEM证据，表明早期胃癌黏膜下层中阿米巴样肿瘤细胞与无髓神经纤维之间存在特异性相互作用，扩展了当前对早期胃癌中肿瘤-神经关系的认识，并提出了假设生成性超微结构证据，即神经相关的阿米巴样肿瘤细胞侵袭可能是胃TME中一种可能的扩散模式。未来需要进一步研究验证更多PCC-NOS晚期胃癌（尤其是伴有促结缔组织增生和沿肌间神经丛的PNI）中是否存在类似的黏膜下肿瘤-神经相互作用模式。

**研究结论翻译**
总之，研究人员报告了一例罕见的早期胃癌，TEM揭示了黏膜下层中阿米巴样肿瘤细胞与无髓神经纤维之间的早期相互作用。这些观察扩展了当前关于早期胃癌中肿瘤-神经关系的知识，并提供了假设生成的超微结构证据，表明神经相关的阿米巴样肿瘤细胞侵袭可能是胃肿瘤微环境中扩散的一种可能模式。需要进一步研究来确定在更多PCC-NOS晚期胃癌病例中，特别是在伴有促结缔组织增生和沿肌间神经丛（Auerbach's plexus）的PNI的肿瘤中，是否也能记录到类似的黏膜下肿瘤-神经相互作用模式。