监测环境中的药物抗性基因对于防止抗菌素耐药性的传播、降低公共卫生风险具有重要意义。本研究开发了一种一锅法重组酶聚合酶扩增与CRISPR技术相结合的方法，用于检测河水中的药物抗性基因。为解决RPA与CRISPR系统之间的兼容性问题，研究测试了四种分子量或负电荷密度不同的糖胺聚糖（肝素钠、那屈肝素钙、达肝素钠以及硫酸软骨素A钠盐），看其是否可以作为Cas酶活性的调节剂。其中，分子量大且负电荷密度高的肝素钠在一锅法检测中表现最佳。在该系统中，RPA扩增阶段会暂时抑制CRISPR-Cas12a的活性，待积累足够量的扩增产物后，再激活Cas12a以读取信号，从而实现两种反应的有序结合与精确控制。为进一步简化操作并提高环境药物抗性基因监测的可靠性，研究还开发了一种无需核酸提取的前处理方法，并将其与基于抑制剂调控的一锅法平台相结合。该检测方法在应用于河流样本时具有较高的灵敏度和特异性，其性能可与qPCR相媲美。该检测方法操作简单、灵敏度高且适用范围广，可作为快速监测抗菌素耐药性的有效工具，有望在公共卫生管理领域得到广泛应用。
