简要概述
膀胱癌是全球常见的疾病，FGFR3基因的变异非常重要，因为这些变异能帮助判断哪些患者可能从靶向治疗中获益。不过，目前的检测往往依赖于肿瘤组织的获取，而这类组织很难取得，尤其是在需要反复监测时。在这项研究中，我们开发出一种灵敏的实验室检测方法，仅需少量DNA即可同时检测四种常见的FGFR3突变。该检测在膀胱癌患者的肿瘤组织、血液和尿液样本中进行了测试。研究结果表明，这种方法能够检测到低水平的FGFR3突变，包括一些通过常规测序方法可能被忽略的突变。这一技术可为研究人员和临床医生提供一种快速、经济且侵入性较小的工具，用于研究FGFR3变异并改善膀胱癌的分子监测水平。
摘要
背景：成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）突变是膀胱癌中常见且具有临床意义的变异，对疾病的诊断、监测以及选择适合的靶向治疗方案具有重要影响。基于组织的检测往往受到样本获取难度、操作侵入性以及需要反复取样等限制。本研究旨在开发一种灵敏的双滴落式数字聚合酶链反应检测方法，用于在组织样本和液体活检样本中同时检测四种FGFR3热点突变。方法：该检测利用参考探针产生恒定的荧光信号，以及野生型特异性探针——当存在突变时这类探针的结合能力会下降，从而将野生型双阳性滴落与荧光强度降低的突变滴落区分开来。研究通过合成突变寡核苷酸、野生型基因组DNA以及健康捐赠者的无细胞DNA进行验证，评估了检测方法的特异性、空白限、检测限以及精确度。同时还将该方法的检测效果与福尔马林固定石蜡包埋组织DNA的下一代测序技术进行了比较。此外，还在膀胱癌患者匹配的血浆和尿液无细胞DNA中检测了FGFR3突变。结果：该检测方法能够清晰地区分不同突变类型，不存在交叉反应，且最低可检测到0.2%的突变等位基因频率。对于S249C突变，该检测结果与专门的单一突变检测方法高度一致。在组织DNA检测中，该方法的检测结果与下一代测序技术的符合率为74.2%，并且还能检测到下一代测序技术未能发现的低丰度突变。在血浆和尿液无细胞DNA中也能检测到FGFR3突变，且匹配的血浆样本与尿液样本的检测结果完全一致。结论：这种双滴落式数字聚合酶链反应检测方法是一种快速、灵敏且经济有效的手段，可用于检测具有临床意义的FGFR3突变，可作为一种补充手段，与基于测序的技术一起用于利用组织、血浆和尿液样本进行分子监测。
