摘要
由Puccinia polysora Underw引起的南方玉米锈病是中国威胁玉米产量的主要叶部病害。在玉米生长期间检测到P. polysora对于及时干预和病害管理至关重要。本研究基于rDNA-ITS序列的变异区域设计了特定的引物和探针。经过常规PCR验证、特异性筛选和灵敏度评估后，成功确定了最优的引物-探针组合。该检测方法的检测限为1 pg·μL?1的基因组DNA，相当于57.6个P. polysora的夏孢子。进一步优化反应条件后，可在38°C恒定温度下持续15分钟完成稳定扩增。使用70份田间玉米叶片样本对所开发的MIRA-LFIA方法进行了检测，以传统的OTNPCR（一管套式PCR）方法作为金标准参考。MIRA-LFIA检测出55份阳性样本和15份阴性样本，而OTNPCR则检测出57份阳性样本和13份阴性样本。诊断评估结果显示，MIRA-LFIA方法的灵敏度为96.49%，特异性为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值为86.67%，Youden指数为0.965，Kappa值为0.911。该MIRA-LFIA系统能够快速检测南方玉米锈病并直观显示检测结果，操作简单且技术要求低，非常适合在基层机构和田间进行快速现场监测。
