世界卫生组织与美国疾病控制与预防中心实时PCR检测方法在猴痘病毒分子检测中的诊断性能比较

《Microbiology Spectrum》：Comparison of diagnostic performance between the World Health Organization and the Centers for Disease Control and Prevention real-time PCR assays for molecular detection of the mpox virus

　　

猴痘病毒（mpox）的全球出现和传播凸显了对准确可靠分子诊断工具的需求。实时PCR（real-time PCR）仍是检测猴痘病毒（MPXV）的参考方法；然而，不同可用方案之间的差异可能影响诊断性能。本研究旨在比较美国疾病控制与预防中心（CDC）实时PCR检测方法与世界卫生组织（WHO）参考分子方案的诊断准确性，使用来自厄瓜多尔的临床样本。研究人员对300份疑似猴痘病例的标本进行回顾性分析，包括病变拭子、水疱样本和血清，其中150份预先经WHO检测方法确认为MPXV阳性，150份为阴性。DNA采用标准化方案提取，所有样本均使用CDC检测方法进行测试。CDC方案正确识别了300份样本中的291份，产生141例真阳性、150例真阴性、9例假阴性，无假阳性。总体一致性为97%（95%置信区间[CI]：94–98），敏感性为94%（95% CI：89–97），特异性为100%（95% CI：98–100）。阳性预测值为100%，阴性预测值为94%（95% CI：90–97）。Cohen's kappa系数为0.94（95% CI：0.90-0.98）。这些发现表明，与WHO参考方案相比，CDC实时PCR检测方法在MPXV检测中具有高诊断准确性和极佳特异性，支持将CDC和WHO两种实时PCR检测方法作为临床和监测环境中的可靠诊断工具。

**论文解读：世界卫生组织与美国疾病控制与预防中心实时PCR检测方法在猴痘病毒分子检测中的诊断性能比较**

**研究背景与问题**
猴痘病毒（MPXV）属于正痘病毒属（*Orthopoxvirus*），是一种有包膜的双链DNA病毒，分为两个主要进化支：进化支I（原刚果盆地进化支）与较高临床严重性相关，进化支II（原西非进化支）毒力相对较低。自2022年全球暴发以来，MPXV已导致超过100,000例病例，涉及122个国家，其中115个为既往无猴痘报告的国家。该病毒通过动物-人溢出传播及人-人传播途径（如直接接触皮肤或黏膜病变、呼吸道飞沫、性接触）扩散。实时PCR（qPCR）是确认MPXV感染的参考标准，因其高敏感性和特异性而被广泛采用。然而，不同国际机构（如世界卫生组织[WHO]和美国疾病控制与预防中心[CDC]）开发的分子方案存在差异，可能影响诊断性能。WHO方案基于Li等的工作，采用多靶点策略（包括通用检测G2R_G靶向肿瘤坏死因子受体基因，以及进化支特异性检测C3L和G2R_WA），被认为是全球金标准。CDC方案也靶向肿瘤坏死因子受体基因，但存在该区域显著缺失的报道，可能影响敏感性并导致假阴性结果。尽管这些方案公开可用，但独立科学报告对它们在本地环境中的临床性能比较仍然有限。因此，本研究旨在比较WHO和CDC实时PCR方案在厄瓜多尔收集的临床样本中检测MPXV的诊断性能。

**研究内容与结论**
研究人员在厄瓜多尔开展了一项回顾性比较研究，分析了300份疑似MPXV感染患者的残留临床标本（包括229份皮肤病变拭子、36份水疱样本和35份血清样本）。其中150份预先经WHO方案确认为MPXV阳性，150份为阴性（包括其他病原体如EB病毒[EBV]、水痘-带状疱疹病毒[VZV]、单纯疱疹病毒1型和2型[HSV-1和HSV-2]的阳性样本）。所有样本均使用CDC方案进行测试，并以WHO方案作为参考标准。结果显示，CDC方案正确识别了291份样本（141例真阳性、150例真阴性），产生9例假阴性，无假阳性。总体一致性为97%（95%置信区间[CI]：94–98），敏感性为94%（95% CI：89–97），特异性为100%（95% CI：98–100），阳性预测值为100%，阴性预测值为94%（95% CI：90–97）。Cohen's kappa系数为0.94（95% CI：0.90-0.98），表明两种方法间一致性极好。McNemar检验显示配对结果间存在统计学显著差异（精确P=0.0039），绝对不一致率为3.0%（95% CI：1.07–4.93），表明CDC方案比WHO方案产生显著更多的假阴性结果。进一步分析发现，9例假阴性样本中，7例在WHO方案中为弱阳性（循环阈值[Ct] >36），仅2例Ct值低于35。若按WHO方案阳性标准（Ct<35）排除弱阳性样本，CDC方案的敏感性可达98.6%。该研究论文发表在《Microbiology Spectrum》。

**关键技术方法**
研究采用的主要关键技术方法包括：从厄瓜多尔收集的300份临床样本（来源注明：229份皮肤病变拭子、36份水疱样本、35份血清样本，采集于2022年5月至12月）进行回顾性分析；DNA提取使用QIAamp DNA Mini Kit（QIAGEN）；实时PCR检测在ABI 7500 Fast Real-Time PCR System上进行，WHO方案包括三个独立检测（G2R_G、C3L、G2R_WA）及人核糖核酸酶P（RNase P）内源内部对照，CDC方案也包含内源内部对照（RNase P）；统计分析方法包括临床敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、总体一致性、阳性似然比、阴性似然比、Cohen's kappa系数和McNemar检验，均计算95%置信区间。

**研究结果**
**结果1：WHO与CDC方案诊断性能比较**
基于WHO参考方案，150份标本确认为MPXV阳性，150份阴性。CDC方案正确识别291份样本，产生9例假阴性（无假阳性）。诊断性能指标显示：总体一致性为97%，敏感性为94%，特异性为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值为94%。Cohen's kappa系数为0.94，表明极好一致性。McNemar检验显示显著不对称（P=0.0039），绝对不一致率为3.0%。

**结果2：假阴性样本分析**
CDC方案产生的9例假阴性样本中，7例在WHO方案中为弱阳性（Ct值范围36.2–38.7），仅2例Ct值低于35（29.1和26.9）。为排除DNA降解，研究人员对新鲜DNA提取物重新运行WHO方案，所有9例样本均确认阳性。若按WHO方案阳性标准（Ct<35）排除弱阳性样本，CDC方案敏感性可达98.6%。

**讨论与结论**
讨论部分指出，本研究首次在厄瓜多尔本地临床样本中比较了WHO和CDC两种实时PCR方案，结果支持两者均具有高诊断准确性和可靠性。CDC方案特异性为100%，无假阳性，表明其确认MPXV感染的能力极佳，在暴发场景中可避免不必要的公共卫生干预。敏感性为94%，但假阴性主要集中于弱阳性样本（Ct>36），提示高Ct值样本可能降低检测效率。此外，研究提到所有阳性样本均属于进化支II，这是2022年全球暴发的主要进化支，但未包含进化支I样本，这是研究的重要局限性。厄瓜多尔首例进化支I病例于2026年4月才报告，因此未来需进一步比较两种方案对进化支I的诊断性能。研究结论部分翻译如下：总体而言，本研究结果支持使用WHO或CDC实时PCR方案作为临床标本（包括皮肤病变和血清样本）中MPXV检测的高准确性和可靠方法，两者均可在临床和监测环境中作为可靠诊断工具。