在同一组织切片上同时成像脂质和蛋白质形态,是获取生物系统全面分子图谱的有效方法。然而,要为这两类分子实现高空间分辨率仍面临挑战。在此,我们通过组织拉伸技术,结合在相同组织切片上使用基质辅助激光解吸/电离技术对脂质进行成像,以及使用纳米喷雾解吸电喷电离技术对完整蛋白质进行成像,从而获得全面的高分辨率分子图谱。在Parafilm “M”上对组织进行物理拉伸后,小鼠小脑中MALDI和nano-DESI技术的成像效果在X和Y方向上的有效分辨率均提升了4.5倍(面积增加了约20倍)。我们还利用MALDI数据,通过带有数据一致性约束的偏最小二乘回归框架来优化nano-DESI图像的质量。最后,我们对MALDI和nano-DESI数据进行了中级融合,以识别位于相同解剖结构中的脂质和蛋白质。这一简洁的工作流程使得能够从同一组织切片上以更高的空间分辨率对脂质和蛋白质进行多模态成像,并实现整合分析。