《Journal of Fish Diseases》：Mortality in Salmon (Salmo salar) Fry Related to Lipoid Liver Disease Induced by Unbalanced Fatty Acid Composition of the Diet
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2023年，除一家瑞典增殖场外，所有养殖波罗的海鲑（Salmo salar）和海鳟（Salmo trutta）仔鱼的农场均因脂质肝病（LLD）出现大规模死亡。受影响的农场使用相同饲料，研究人员怀疑该饲料是暴发的原因。研究人员在三个鲑鱼种群中进行了两项平行饲料试
2023年，除一家瑞典增殖场外，所有养殖波罗的海鲑（Salmo salar）和海鳟（Salmo trutta）仔鱼的农场均因脂质肝病（LLD）出现大规模死亡。受影响的农场使用相同饲料，研究人员怀疑该饲料是暴发的原因。研究人员在三个鲑鱼种群中进行了两项平行饲料试验，并对饲料和鱼体进行了脂肪酸及抗氧化剂分析，以探究饲料与LLD死亡率之间的因果关系。在喂食疑似饲料（试验饲料）的组中，一个种群出现了显著死亡率，三个种群均出现了LLD组织病理学变化，而对照组未出现，从而将试验饲料与2023年的暴发联系起来。脂肪酸分析显示，疑似饲料与对照饲料在结合脂肪酸组成上存在差异，包括芥酸含量更高。芥酸通过改变脂质代谢对鱼类产生负面健康影响，它存在于例如毛鳞鱼（capelin）中，这是该饲料的主要成分之一。试验饲料中还含有较低水平的几种抗氧化剂，尤其是维生素A。鱼类的抗氧化状态未能完全分析，但结果表明不同种群之间的抗氧化状态存在差异。
**论文解读：饲料脂肪酸组成失衡诱导大西洋鲑仔鱼脂质肝病的研究**
**1. 研究背景与问题**
2023年，瑞典多数波罗的海鲑（Salmo salar）和海鳟（Salmo trutta）增殖场在仔鱼开食后不久出现大规模死亡，死亡率高达35%–86%。当地兽医进行细菌学检测，但瑞典兽医局（SVA）未能鉴定出特定病原体，且抗生素治疗无效。由于这些农场位于不同河流，无水源、鱼类或人员交流，病征描述相似，提示非传染性病因。SVA对病鱼进行组织病理学检查，发现肝细胞空泡内存在嗜酸性小滴，经苏木精-伊红（HE）、过碘酸雪夫（PAS）和齐尔-尼尔森（ZN）染色，确认小滴为PAS阳性、ZN阴性，符合脂质肝病（LLD）特征。LLD以往与饲料中酸败脂肪酸及维生素E缺乏相关。此外，病鱼还出现肾单位病变、肌纤维变性及贫血等症状。所有使用同一制造商特定批次饲料的农场均出现类似问题，更换饲料后一周内死亡率下降。因此，研究人员怀疑该批次饲料是LLD暴发的原因，但具体机制尚不明确。饲料主要成分为鱼粉，其中毛鳞鱼（Mallotus villosus）占较大比例。毛鳞鱼富含omega-3脂肪酸，但脂肪酸组成可能随季节变化，且其维生素A含量较低。研究旨在：①通过饲料试验复现2023年疾病；②比较不同鲑鱼种群（波罗的海种群与大西洋种群）的敏感性；③分析饲料及鱼体脂肪酸组成与抗氧化能力，阐明饲料与LLD的因果关系。
**2. 主要技术方法**
研究人员在瑞典农业科学大学（SLU）的两个动物研究设施（?lvkarleby渔业研究站和Norrfors研究设施）开展平行饲料试验，使用2023年疑似饲料（T23）和两种对照饲料（2023年对照C23、2024年对照C24），共纳入3900尾大西洋鲑仔鱼。试验按不同种群（达拉河、约塔河、乌默河）和母源性硫胺素水平（高HT/低LT）分组。采用混合效应Cox回归模型和Aalen加性模型分析死亡率；对鱼体和饲料进行游离和结合脂肪酸的气相色谱-三重四极杆质谱（GC-QqQ-MS）分析，并通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）评估差异；同时检测饲料中硒、维生素E及鱼体中虾青素和类胡萝卜素作为抗氧化能力指标。
**3. 研究结果**
**3.1 死亡率**
Kaplan–Meier生存曲线和统计模型均显示，喂食T23的仔鱼死亡率显著高于C23和C24（p<0.0001），验证了饲料与死亡率的关联。在T23组内，乌默河鲑的死亡风险是达拉河鲑的12倍（p<0.0001），而约塔河鲑与达拉河鲑无显著差异。母源性硫胺素水平对死亡率的影响：低硫胺素（LT）组死亡率反而显著低于高硫胺素（HT）组（p=0.01），但无交互效应，提示硫胺素处理可能仅产生边际效应。
**3.2 组织病理学**
在2023年暴发中，LLD组织病理学特征（肝细胞空泡内PAS阳性、ZN阴性小滴及肾小管病变）仅在T23组仔鱼中观察到，对照组无。在乌默河鲑中，最早于506度日（dd）出现病变，且HT与LT组间无差异。达拉河鲑和约塔河鲑在694度日时也出现相同病变，但程度较轻。至1339度日，约塔河鲑全部出现病变。总体上，T23组病变程度低于2023年暴发，可能与采样时鱼未濒死有关。
**3.3 脂肪酸分析**
饲料游离脂肪酸组成：T23与C23无显著差异，但两者均显著高于C24，表明储存时间导致水解增加。结合脂肪酸组成：T23与C23、C24均存在显著差异（p<0.05），OPLS-DA模型显示分离主要由芥酸（C22:1 n-9）、鳕烯酸（C20:1）和神经酸（C24:1 n-9）驱动。T23饲料中芥酸平均含量为7.6 g/kg饲料，显著高于对照组（4.2 g/kg，p<0.001）。鱼体中，T23组仔鱼游离和结合芥酸水平均显著高于对照组（p<0.05），与饲料差异一致。
**3.4 抗氧化能力**
饲料中硒和维生素E水平在T23、C23、C24间无显著差异。鱼体虾青素和类胡萝卜素分析显示，达拉河鲑在36天时虾青素衍生物和类胡萝卜素（叶黄素、玉米黄质等）水平高于乌默河鲑，但多数样品低于检测限，仅能描述趋势。
**4. 讨论与结论**
讨论指出，T23饲料确实诱导了与2023年暴发相同的LLD组织病理学和死亡率，证实了饲料的致病性。不同种群死亡率差异可能源于环境因素（如光照周期、温度）或母源性抗氧化剂转移差异，而非遗传因素。母源性硫胺素水平未加重疾病，反而较高硫胺素与死亡率升高相关，机制不明，可能与硫胺素补充诱导脂肪肝有关。脂肪酸分析揭示T23饲料中结合脂肪酸组成异常，其中芥酸含量显著升高。芥酸已知可改变鱼类脂质代谢，抑制脂肪分解和β-氧化相关基因表达，促进脂肪积累和脂质过氧化，导致氧化应激。本研究中，T23饲料中芥酸浓度（0.76%）与文献中引起黑鲩、尼罗罗非鱼脂质代谢紊乱的浓度（0.44%–0.6%）一致。此外，饲料中维生素A水平较低（Ek 2025），而毛鳞鱼本身维生素A含量低且春季芥酸含量高，可能共同导致饲料抗氧化能力不足。尽管未检测到维生素E和硒缺乏，但鱼体抗氧化系统可能因脂质过氧化而耗竭，表现为虾青素水平低。因此，研究人员认为，饲料中高芥酸与低抗氧化能力的组合是引起LLD暴发的关键因素。
**结论**：该研究明确证实，T23饲料与2023年及本试验中观察到的死亡率显著相关，组织病理学检查验证了器官水平变化一致。尽管三个鲑鱼种群均出现病变，但死亡率差异原因未明。低硫胺素水平未加重疾病，反而高硫胺素水平似乎增加死亡率，但硫胺素并非整体致病因素，因为所有种群均出现器官损伤。2023年暴发后3个月，细胞层面仍可见病理变化，组织完全清除蜡样质并愈合所需时间不清。饲料和仔鱼脂肪酸分析表明，油菜籽和毛鳞鱼中天然高含量的芥酸可能是致病因素之一。芥酸水平与饲料低抗氧化能力是否相关尚不确定，但并非不可能，因为该饲料中多种抗氧化剂（尤其是维生素A）含量较低。
