《Poultry Science》：Comprehensive Pathological, Immunohistochemical, and Apoptotic Analysis of the Highly Pathogenic Avian Influenza A virus H5N1 clade 2.3.4.4b in Poultry in Taiwan
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自2021年起，高致病性禽流感（HPAI）病毒H5N1 clade 2.3.4.4b成为台湾地区流行优势毒株，对家禽产业造成显著损失，但其跨物种致病性与组织嗜性仍缺乏充分表征。研究人员针对台湾自然感染该毒株的鸡、鸭、鹅与鹌鹑，系统评估大体病变、组织病理学改变、
自2021年起，高致病性禽流感（HPAI）病毒H5N1 clade 2.3.4.4b成为台湾地区流行优势毒株，对家禽产业造成显著损失，但其跨物种致病性与组织嗜性仍缺乏充分表征。研究人员针对台湾自然感染该毒株的鸡、鸭、鹅与鹌鹑，系统评估大体病变、组织病理学改变、病毒抗原分布及凋亡相关信号。样本来源于2023年10月至2025年2月实验室确诊的41个H5N1阳性场（鸡23、鸭4、鹅10、鹌鹑4）。对脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺行组织病理学、流感病毒A核蛋白（NP）与活化caspase-3免疫组化（IHC）及末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）检测，并采用半定量评分比较跨组织与跨物种的病变、病毒抗原与凋亡活性。结果显示鸡呈全身性感染，坏死与病毒抗原广泛分布；鸭病变较轻但凋亡反应更协调；鹅病理特征居中，病变严重度与病毒抗原分布中等相关；鹌鹑呈独特宿主反应，脾病变突出，病毒抗原、凋亡与组织损伤间关联特异。种间比较在脾与肾病变评分、肾病毒抗原评分及选定器官凋亡评分上存在显著差异。综上，H5N1 clade 2.3.4.4b在自然感染下诱导家禽物种依赖的病理模式与凋亡反应，为组织嗜性与疾病结局的宿主特异性差异提供田野病理证据。
研究背景方面，禽流感由正黏病毒科甲型肝炎病毒属流感病毒A引起，按血凝素（HA）与神经氨酸酶（NA）组合分亚型。1996年广东分离GsGd样H5后该谱系持续演化，2021年起clade 2.3.4.4b取代H5N8成为全球野鸟与家禽优势株，台湾2021年首检、2022年H5N1成主亚型，2023—2025年官方记录扑杀数百万羽。既有实验感染研究提示鸡死亡率近100%、鸭60%—80%，但自然条件下该 clade 跨鸡、鸭、鹅、鹌鹑的病理谱、组织嗜性与凋亡机制尚未系统阐明，且既往台湾流行2.3.4.4c，新 clade 是否改变物种致病模式待验证。研究人员因此基于田间自然感染病例，整合大体、组织病理、IHC 与 TUNEL 进行多物种对照分析。
主要关键技术方法上，研究人员建立2023年10月至2025年2月台湾农委会兽医研究所确诊的41场自然感染队列（鸡23场204只、鸭4场29只、鹅10场89只、鹌鹑4场45只，含被动与主动监测），每场取约10只显症禽剖检，取脑（大脑小脑）、心、肝、脾、肺、肾、胰腺；组织经10%中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋、4 μm切片，苏木精—伊红（HE）评坏死性炎症病变（0—3分）；IHC 用抗流感病毒A核蛋白单抗WF-4与抗cleaved caspase-3（p17/p19）多抗显色，TUNEL 检晚期DNA断裂；各指标按改良Landmann与Anis系统半定量（0—3分），以场为单位取最重切片计分，种内 Friedman+Dunn、种间 Kruskal–Wallis+Dunn、Spearman 相关用 Prism 10 分析（P≤0.05 显著），并以SPF鸡作阴性对照。
研究结果部分，大体病变小节指出92.7%为被动监测场，鸡最常见肾肿大、心包积液、肺充血水肿，经典腺胃—肌胃交界出血少见；鸭见脑充血、肺充血、脾大、心膜瘀点；鹅见脑充血、胰腺坏死、心膜瘀点；鹌鹑大体无明显病变。组织病理学病变小节显示七器官均现坏死性炎（脑周管套、心肌坏死淋巴细胞浸润、支气管肺炎、肝炎、脾炎淋巴耗竭、肾小管间质肾炎、胰腺炎），鸡脾胰均值秩最高，鹅胰腺最重，鹌鹑脾最重。病毒抗原分布小节（IHC NP）示鸡全身播散、脾肝居前；鸭脑最高；鹅肝最高、肾最低；鹌鹑脑最高。凋亡分布小节中，caspase-3（执行期）鸡脑最高、肾最低，鸭脾最高，鹅脾最高，鹌鹑肝最高；TUNEL（晚期）鸡心最高，鸭脑最高，鹅脑肝最高，鹌鹑脑肝最高。种内分析小节：鸡病变分数器官间显著（χ2=15.57,P=0.0163）但两两不显，caspase-3 与 TUNEL 显著；鸭仅 TUNEL 显著；鹅病变、病毒、caspase-3、TUNEL 均显著但两两有限；鹌鹑仅 caspase-3 显著。种间分析小节：脾病变鹌鹑>鸭（P=0.0071），肾病变鹅>鸡（P=0.0171），肾病毒分鸡>鹅（P=0.0032）；肝 caspase-3 鹌鹑>鸭（P=0.0084），脾 caspase-3 鸡鹅>鹌鹑，肾 caspase-3 鹌鹑>其余；肝肺 TUNEL 鸡>鸭。评分相关小节：鸡病变—病毒不相关、病变—TUNEL弱正（r=0.23）、病毒—caspase-3弱正（r=0.43）；鸭病毒—caspase-3/TUNEL弱正（r≈0.42/0.43）；鹅病变—病毒中正（r=0.54）；鹌鹑病毒—caspase-3显著负（r=?0.42）。
讨论与结论翻译部分，研究人员认为本研究以自然感染模型揭示三要点：种间组织嗜性差异显著；病毒抗原、病变与凋亡呈物种特异关联；细胞死亡机制或为宿主易感与病毒适应关键。鸡虽全身感染，但病变与病毒负荷不相关，提示免疫介导损伤（IL-6/IL-8上调、STAT3下调）与调控性坏死参与；鸭具RIG-I与I型干扰素优势，病变轻、脑嗜性突出、凋亡协调；鹅居中，病毒直接致损贡献较大；鹌鹑脾损突出且病毒—caspase-3负相关，或反映感染阶段与IFN-γ早期应答后晚期坏死。受体（SAα2,3-Gal/SAα2,6-Gal）分布与病毒结合偏好亦塑模病理。局限含田间剂量时序不可控、鹌鹑鸭肺肾样本少、未做H9共感定量与凋亡通路分子验证。结论为：本研究首次以一致病理框架比较台湾四种家禽自然病例，证实H5N1 clade 2.3.4.4b诱导物种依赖的组织嗜性、病毒分布与凋亡模式——鸡系统性感染但病变非单纯病毒效应，鸭轻症伴神经向性与协调凋亡，鹅直接致损信号最强，鹌鹑脾损隐蔽且病毒—caspase-3负关联，提示仅凭大体病变会低估感染；疾病表现由宿主物种、病毒组织嗜性及细胞死亡反应共同塑造。论文发表于《Poultry Science》。
