基于设计分析质量的超可变形囊泡中替诺福韦阿拉芬酰胺定量HPLC方法开发验证与绿色评估

《Scientific Reports》：Analytical quality by design based HPLC method development validation and green assessment for tenofovir alafenamide quantification in ultradeformable vesicles

　　

摘要

QbD方法通过逻辑流程帮助人们轻松开发分析方法，从而评估和控制影响方法稳健性和可靠性的关键参数，相比传统的试错法更为可靠。该方法还能帮助人们了解影响产品性能的关键因素。本研究在安捷伦1260 Infinity II仪器上，使用配备Shim-pack GIST-C18（250×4.6毫米，5微米）色谱柱的装置，通过QbD方法建立了用于测定TAF的HPLC分析方法。首先确定了分析目标参数和关键性能指标，随后通过失效模式与效应分析以及鱼骨图进行风险评估。通过实验设计优化了关键方法参数，并依据ICH Q2（R2）指南对方法进行了验证。流速、进样量、柱温以及甲醇比例被确定为关键变量。经过优化的参数为：流速0.7毫升/分钟，进样量15微升，柱温50摄氏度，甲醇比例70%，此时方法的峰面积为258.85 mAU，拖尾因子为0.936，理论板数为13791.15，保留时间为5.476分钟，优化效果评价值为0.814，表明优化效果良好。在261纳米波长下，该方法的校准曲线在50纳克/毫升至40微克/毫升的浓度范围内呈线性关系。精度、稳健性及回收率测试结果显示，相对标准偏差小于2%，平均回收率为98%至102%。