《Clinical and Translational Medicine》：ETS1–EGR2 facilitates renal cell carcinoma progression by activating NOTCH signalling
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背景：肾细胞癌（RCC）是泌尿系统三大恶性肿瘤之一，其中透明细胞肾细胞癌（ccRCC）是最常见且最具侵袭性的病理亚型，与高死亡率相关。尽管治疗手段多样，RCC患者临床预后仍较差，亟需进一步阐明ccRCC进展机制。方法：研究人员利用不同RCC细胞系在体外研究细胞
背景：肾细胞癌（RCC）是泌尿系统三大恶性肿瘤之一，其中透明细胞肾细胞癌（ccRCC）是最常见且最具侵袭性的病理亚型，与高死亡率相关。尽管治疗手段多样，RCC患者临床预后仍较差，亟需进一步阐明ccRCC进展机制。方法：研究人员利用不同RCC细胞系在体外研究细胞恶性表型并阐明机制，使用裸鼠进行体内验证，结合测序、数据库及生物信息学分析筛选候选基因与信号通路，并利用临床样本验证关键基因表达模式。结果：ETS1在ccRCC临床组织中显著高表达；ETS1过表达在体外增强RCC细胞恶性表型，在裸鼠体内促进肿瘤生长。机制上，ETS1结合EGR2并使其蛋白不稳定，EGR2水平下降削弱其对NOTCH信号通路通过RBP-J的抑制作用，从而激活NOTCH信号通路，最终导致RCC发展。结论：靶向ETS1–EGR2–NOTCH信号轴可能是ccRCC的潜在治疗策略。
研究背景：肾细胞癌（RCC）占成人恶性肿瘤3%–5%，其中透明细胞肾细胞癌（ccRCC）最具侵袭性，确诊时常已转移，现有放疗、化疗、靶向治疗及免疫检查点抑制剂疗效受限，耐药与不良反应导致长期预后不佳，亟需解析ccRCC进展机制并开发新策略。研究人员围绕转录因子ETS1（erythroblast transformation-specific 1）、早期生长反应蛋白2 EGR2（early growth response 2）与NOTCH信号通路在ccRCC中的调控关系开展系统研究，得出ETS1通过结合并降解EGR2、解除EGR2对NOTCH信号通路关键因子RBP-J的转录抑制，从而激活NOTCH通路促进RCC进展的结论，该发现为ccRCC提供了以ETS1–EGR2–NOTCH轴为靶点的治疗思路，论文发表于《Clinical and Translational Medicine》。
主要关键技术方法：研究整合公共数据库（GEPIA、CCLE、GEO、TCGA）与生信分析（差异表达、GSEA、KEGG/GO富集）筛选信号通路；采用786O与ACHN两种RCC细胞系及CRISPR/Cas9敲除、慢病毒过表达/敲低体系；运用Co-IP、GST pull-down、CHX追踪、MG132阻断证明蛋白互作与泛素-蛋白酶体降解；通过双荧光素酶报告、ChIP-PCR证实EGR2直接抑制RBP-J启动子；以CCK-8、划痕、Matrigel侵袭、克隆形成评估恶性表型；并使用6周龄雌性BALB/c裸鼠皮下异种移植模型（786O来源，每组6只）联合NOTCH抑制剂DAPT进行体内验证；临床端纳入2024–2025年海军军医大学第三附属医院10对ccRCC及癌旁正常组织行IHC与Western blot验证。
研究结果：
3.1 ETS1在ccRCC组织中高表达并促进RCC细胞恶性表型：GEPIA显示KIRC中ETS1 mRNA显著上调（诊断AUC=0.818）；体外过表达ETS1促进786O增殖、克隆形成、迁移侵袭，敲低或CRISPR敲除则逆转；10对患者配对IHC与WB证实肿瘤组织ETS1蛋白高于癌旁。
3.2 ETS1经NOTCH信号调控RCC恶性行为：786O的RNA-seq与KEGG提示NOTCH通路富集；GEPIA中NOTCH4、HEY1在KIRC高表达且与ETS1正相关；ETS1过表达升高RBP-Jk荧光素酶活性和HES1/HEY1转录及蛋白，敲低反之；NOTCH胞内段NICD过表达模拟ETS1表型，临床样本HES1/HEY1蛋白在肿瘤中升高。
3.3 ETS1结合EGR2并促其蛋白不稳定：LC-MS/MS与Co-IP锁定ETS1–EGR2复合物；GEPIA显示EGR2 mRNA在KIRC无差异但低蛋白表达倾向不良预后；ETS1不影响EGR2转录但缩短其半衰期，MG132逆转降解，提示蛋白酶体途径；EGR2过表达抑制增殖迁移侵袭克隆，并抑制RBP-J启动子荧光素酶活性和HES1/HEY1，ChIP-PCR证实EGR2直接结合RBP-J启动子-521/-513区。
3.4 EGR2通过失活NOTCH抑制RCC恶性表型：在786O与ACHN中，EGR2过表达伴随NICD共转染可回复细胞增殖、迁移、侵袭与克隆数，证明EGR2依赖NOTCH失活发挥抑瘤功能。
3.5 NOTCH失活逆转ETS1促瘤效应：DAPT处理抵消ETS1过表达对786O/ACHN体外恶性表型的增强，并在裸鼠异种移植中减小ETS1过表达诱导的瘤体积与重量。
3.6 ETS1–EGR2介导的NOTCH激活促RCC体内进展：敲低ETS1抑瘤，共敲低EGR2回补表型；EGR2过表达抑制ETS1诱导的RBP-Jk报告活性与HES1/HEY1，共过表达NICD解除抑制；裸鼠中ETS1过表达促瘤并升HES1/HEY1，EGR2过表达逆转，NICD共过表达再回复，确立ETS1–EGR2–NOTCH轴体内正向驱动。
讨论部分总结：作者指出ETS1在多癌种具促癌性，本研究新增其通过EGR2–NOTCH轴促ccRCC进展的机制层证据；EGR2作为抑癌因子直接抑制RBP-J转录，被ETS1蛋白水平劫持降解；研究局限包括临床样本仅10对、体内仅用786O皮下异种移植而未用PDX或转移模型，后续需扩大样本与平台验证。结论部分译文：利用VHL突变ccRCC细胞系786O与乳头状RCC细胞系ACHN，研究人员发现ETS1在ccRCC组织显著升高，体外增强RCC细胞生物学活性、体内裸鼠模型促进展；机制为ETS1与EGR2成复合体并诱导EGR2降解，EGR2下降经由RBP-J转录激活解除对NOTCH信号通路的抑制，最终致RCC发展（图7工作模型）。因此，靶向ETS1–EGR2–NOTCH信号轴有望成为RCC的潜在治疗策略。
