《Organisms Diversity & Evolution》：New insights into the evolution of Charlie Chaplin worms (Histriobdellidae, Eunicida, Annelida)
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Histriobdellidae（俗称查理·卓别林蠕虫）是一类与甲壳动物共生的微型神秘环节动物。其通过交替附着黏性前附肢与左右巨大的侧“足”进行爬行，并在腹侧肌性咽中具复杂颚器。尽管 histriobdellids 始终被认为是有颚支系 Eunicida 的一
Histriobdellidae（俗称查理·卓别林蠕虫）是一类与甲壳动物共生的微型神秘环节动物。其通过交替附着黏性前附肢与左右巨大的侧“足”进行爬行，并在腹侧肌性咽中具复杂颚器。尽管 histriobdellids 始终被认为是有颚支系 Eunicida 的一部分，但由于其高度衍生的外部形态及分子分析中的长枝吸引（long branch attraction，LBA）假象，其在环节动物树中的精确位置仍存争议。本研究采用形态与分子比较方法，以获知 Histriobdellidae 及其异常性状的演化。研究人员对含 52 种、4 个分子标记的 Eunicida 系统发育分析进一步支持 Histriobdellidae 为 eunicid 科 Dorvilleidae 的姐妹群。以欧洲龙虾共生者 Histriobdella homari van Beneden, 1858 为对象，经标准免疫组化染色结合共聚焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscopy，CLSM）及扫描电子显微镜（scanning electron microscopy，SEM）详查其形态。整合分析使之能与其他 eunicidan 详细比较，并揭示 Histriobdellidae 广泛的解剖学转变。神经支配模式有助于确认 histriobdellid 口前叶上存在触角及真正的环节动物触须（palps）。神经节排列与支配前端的神经元支架支持 Histriobdella 中存在口节（围口节 peristomium）。此外，基于全面调查，研究人员新提出其黏性前运动附肢与环节动物其他类群的疣足（parapodia）同源，而其最末端黏性运动附肢（足）展现疣足与尾节（pygidial）结构的双重特征。对这一高度偏离的环节动物科的详尽研究，不仅示范了如何重建如疣足等典型环节动物性状的极端转变，亦再次凸显环节动物体构型的非凡演化可塑性。
研究背景方面，环节动物门（Annelida）以多样性与形态变异性著称，其起源追溯至寒武纪大爆发。尽管环节动物常被描述为分节且具刚毛的蠕虫，但演化适应导致不同支系中分节与刚毛退化，使得诸如共生性的 Histriobdellidae 等疑难类群因高度修饰的成体体构型而难以在系统发育树中稳健定位。Histriobdellidae（查理·卓别林蠕虫）为仅含 13 个描述种的微型海洋与淡水共生环节动物，栖息于十足目与等足目甲壳动物体表，体型 0.7–1.5 mm，无刚毛，具深色几丁质颚器与似卓别林步态的侧展后“足”。其一直被归入有颚支系真颚虫目（Eunicida），但因其极度衍生形态阻碍主体部位初级同源建立，且分子树中呈现极长枝并易与别的的长枝类群因长枝吸引（LBA） artefact 聚类，精确系统位置长期存疑。既有系统基因组研究在限定于 Eunicida 内时支持其与 Dorvilleidae 近缘，但长枝问题未消。为厘清该科在 Eunicida 内的位置并解释其异常附肢同源，研究人员开展本次整合分类、分子系统发育与显微形态神经解剖的再评估。
主要关键技术方法方面，研究人员构建了涵盖 Eunicida 六个科共 52 种的分类单元矩阵，新增 Histriobdella homari、Stratiodrilus aeglaphilus 等多物种乙醇固定标本的 COI、16S rRNA、18S rRNA、28S rRNA 序列，外群选 Glycera dibranchiata，并刻意排除已知极长枝类群以缓解 LBA；序列经 MAFFT 比对、Gblocks 遮蔽 rRNA 差比对区，用 PartitionFinder2 选模型，以 MrBayes 贝叶斯推断与 IQ-TREE 最大似然法建树，并以组分异质性卡方检验做删减敏感性分析。形态学上，标本源自挪威卑尔根鱼市欧洲龙虾 Homarus gammarus 鳃与卵块，经 7% MgCl2 脱附后分材处理：部分存 96% 乙醇供 DNA，部分 4% PFA 固定供整装免疫组化，部分 2.5% 戊二醛固定供 SEM。免疫荧光采用抗乙酰化 α-tubulin、抗 CFLRFamide、抗 synapsin 与 DAPI、phalloidin-rhodamine，以 CLSM 获取神经与肌肉支架，SEM 观察表面超微结构。
研究结果部分，分子数据小节显示，合并 53 序列 4268 位经 Gblocks 遮蔽后 3065 列，贝叶斯与 ML 树拓扑高度一致：六个 eunicid 科均单系且高支持，Dorvilleidae 与 Histriobdellidae 呈姐妹群（PP=1.00，BP=92），Lumbrineridae 居基位，Eunicidae+Onuphidae 高支持，删减 14 个碱基组成偏离类群后拓扑不变，表明 LBA 与组成异质性未根本改变结论。形态调查小节重描 H. homari 成体：至少六外识分节，前端五感觉附肢加一对黏性乳突，后端一对侧足；体内脑神经髓与至少八躯干神经节，无环肌仅有纵肌。前感觉附肢小节经 SEM 与 α-tubulin 染色确认三背位为触角（antennae）、腹侧对为触须（palps），各附肢基部具附肢神经节，触角仅接围食道连索背根、触须兼接背腹根，与真颚虫目其他科模式一致。黏性前乳突小节显示其为圆锥体外突，端孔排腺，双神经束续自围食道连索，含亚食道神经节（subesophageal ganglion，sog）位于咽半程，肌肉为前后主束源于体壁纵肌，支持退附功能。后附肢小节揭示侧足内续自第 9 神经节腹神经索（ventral nerve cord，vn），含第 10、11 神经节，远端腺孔具 tubulin 阳性腺颈，cirrus 样突具感觉纤毛与传入第 10 节神经元，肌肉由体壁纵肌伸入加附肢特有撑肌组成。
讨论部分总结：系统位置一节指出，增加分类与序列覆盖、排除长枝、Gblocks 遮蔽与组成检验共同缓解 LBA，Histriobdellidae+Dorvilleidae 姐妹关系得四标记中等覆盖支持，与二者 ctenognath 型微齿颚及微食性（刮食细菌/单胞藻）生态一致，区别于他科宏食性；体无环肌虽非 eunicid 典型，但在 Annelida 内多系独立退化，契合蛭形运动与体表共生。前附肢一节依背/腹根神经支配模式坐实三触角和二触须同源身份，呼应 Orrhage 与 Zanol 论述。结论翻译节：详细研究显示 Histriobdellidae 为 Dorvilleidae 姐妹群；H. homari 神经支架证口前叶触角与触须并存、存在围口节；黏性前附肢同源疣足，后侧足具疣足与尾节复合特征；该类群极端体构型转变示范了典型环节动物性状（如 parapodia）重构路径，并再证环节动物体计划（body plan）演化可塑性之卓越。全文发表于《Organisms Diversity & Evolution》框架关联期刊体系，提供形态—分子整合解决长枝疑难类群的范例。
