《Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation》：CSF Leukocytes Transiently Increase Before Onset of Huntington Disease in Association With a Stage-Specific CSF Cytokine/Chemokine Pattern
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背景与目的：在亨廷顿病（HD）中，作为一种神经退行性CAG三核苷酸重复扩增疾病，脑脊液（CSF）炎症生物标志物通常随疾病进展而增加。CSF白细胞作为炎症标志物尚未在HD中探索。研究人员在HDClarity多中心前瞻性生物样本研究中，探索了不同HD阶段的高精度C
背景与目的：在亨廷顿病（HD）中，作为一种神经退行性CAG三核苷酸重复扩增疾病，脑脊液（CSF）炎症生物标志物通常随疾病进展而增加。CSF白细胞作为炎症标志物尚未在HD中探索。研究人员在HDClarity多中心前瞻性生物样本研究中，探索了不同HD阶段的高精度CSF白细胞计数，以及其与CSF神经丝轻链（NFL）和细胞因子/趋化因子模式的关联。方法：进行了一项横断面病例对照研究，对HDClarity研究对照参与者（N=94）和携带重复扩增亨廷顿蛋白（HTT）等位基因的参与者（N=335）的首次平均CSF白细胞计数进行评估，这些参与者按HDClarity方案预先定义为连续的前驱期和运动显性期HD阶段（早前驱期[N=48]：疾病负担评分[DBS]<250；晚前驱期[N=93]：DBS≥250；早显性期HD[N=171]：总功能能力[TFC] 7–11；晚运动显性期HD[N=23]：TFC<11）。165名参与者有CSF-NFL数据。结果与一个独立单中心数据集的18种CSF细胞因子和趋化因子（57份CSF，19份对照，6份早前驱期和8份晚前驱期HD CSF，以及19份显性期HD CSF）进行并列比较。结果：CSF白细胞在晚前驱期达到峰值（中位数，四分位距：1.0/μL，0.33–1.33/μL），与早前驱期（0.0/μL，0.0–1.0/μL）以及早显性期（0.33/μL，0.0–1.0/μL）和晚显性期HD（0.0/μL，0.0–0.67/μL）相比均显著升高。晚前驱期HD的CSF白细胞高于对照组（0.0/μL，0.0–1.0/μL）。在DBS介于256和344之间时，CSF白细胞峰值与晚前驱期HD峰值紧密对应。晚前驱期HD中较高的CSF白细胞与较高的CSF-NFL水平相关。对CSF细胞因子和趋化因子水平的探索性分析显示，低白细胞介素（IL）-7但高血管内皮生长因子（VEGF）和C-C基序趋化因子配体（CCL）22水平可能区分HD与对照CSF；高VEGF、IL-6和IL-15水平可能区分早前驱期与晚前驱期HD CSF；低CCL2、CCL17和IL-8水平可能区分晚前驱期与显性期HD CSF。当连续应用这些模式时，能以75%的敏感性（95% CI 41%–96%）和90%的特异性（78%–96%）识别晚前驱期HD参与者。讨论：CSF白细胞在晚前驱期HD达到峰值，其与CSF-NFL升高相关，以及相应的阶段特异性趋化因子/细胞因子变化，表明HD中存在一个时间动态的、可能具有神经毒性的炎症信号网络。
**论文解读：亨廷顿病发病前脑脊液白细胞的短暂增加及其阶段特异性细胞因子/趋化因子模式**
**研究背景与科学问题**
亨廷顿病（Huntington disease, HD）是一种由HTT基因外显子1中CAG三核苷酸重复扩增引起的遗传性神经退行性疾病。神经炎症（neuroinflammation）在大多数神经退行性疾病中均有报道，HD也不例外。已有研究显示，携带突变HTT等位基因的个体（PwHD）在血液和脑脊液（CSF）中均存在炎症标志物的上调，例如白细胞介素（IL）-6、IL-8和肿瘤坏死因子α（TNFα）在脑内升高，且与小胶质细胞激活密切相关。在CSF中，多种神经炎症标志物如IL-6、可溶性TREM2（sTREM2）、几丁质酶-3样蛋白1（CHI3L1/YKL-40）和几丁质三糖苷酶1在混合PwHD队列中于运动发作前后均升高。然而，大多数CSF炎症生物标志物在运动发作后才显著升高，并随疾病进展进一步增加。目前，唯一在运动发作前被报道升高的CSF炎症标志物是可溶性CD27（sCD27）和产生IL-17的CSF Th17.1细胞。但CSF白细胞（leukocyte）作为最基础的炎症细胞标志物，在HD中尚未被系统探索。因此，研究人员利用HDClarity多中心前瞻性生物样本研究，旨在通过高精度CSF白细胞计数揭示不同HD阶段的炎症动态，并探索其与CSF神经丝轻链（neurofilament light chain, NFL）及细胞因子/趋化因子模式的关联。该研究发表于《Neurology Neuroimmunology》。
**主要关键技术方法**
本研究主要基于HDClarity研究（NCT02855476）的横断面病例对照设计，样本包括94名对照参与者（CP）和335名携带HTT重复扩增的PwHD，按HDClarity方案分为早前驱期（EpreHD，疾病负担评分DBS<250）、晚前驱期（LpreHD，DBS≥250）、早显性期（EmHD，总功能能力TFC 7–11）和晚显性期（LmHD，TFC<11）。CSF白细胞计数（CSF-LC）由当地实验室在腰椎穿刺后1小时内完成，通常采用三次独立手工计数取平均值（CSF-LCmean），并排除红细胞≥100/μL的污染样本。此外，利用一个独立单中心丹麦队列（19名对照、11名EpreHD、8名LpreHD、19名显性期HD）的57份CSF样本，采用V-PLEX人细胞因子30-PLEX试剂盒检测18种细胞因子和趋化因子。统计方法包括Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis检验、Fisher精确检验、受试者工作特征（ROC）分析、Youden J统计及多变量逻辑回归（MLRA）等。
**研究结果**
**1. 三次重复CSF白细胞计数是精确的炎症标志物，可与18种细胞因子/趋化因子数据并列比较**
通过对429名参与者（排除红细胞污染）的三次计数进行一致性分析，发现85%的计数对在0/μL时完全一致，60%在1/μL时一致，表明在低CSF-LC值下计数过程具有高精度。CSF-LCmean随年龄略有增加（Pearson r=0.03，p=0.536），性别无显著影响。最终HDClarity队列包括94名CP和335名PwHD（EpreHD 48名，LpreHD 93名，EmHD 171名，LmHD 23名）。
**2. 晚前驱期HD参与者CSF白细胞计数升高**
在PwHD整体中，CSF-LCmean与CP相比仅呈趋势升高（0.67/μL vs 0.00/μL，p=0.06）。但按阶段分组后，LpreHD的CSF-LCmean（1.00/μL，IQR 0.17–1.33/μL）显著高于CP（0.00/μL，p=0.001）、EpreHD（0.33/μL，p=0.029）、EmHD（0.33/μL，p=0.029）和LmHD（0.00/μL，p=0.004）。ROC分析确定CSF-LCmean>0.33/μL为区分LpreHD与CP的最佳截断值（敏感性58%，特异性58%）。MLRA显示，LpreHD分组预测CSF-LCmean>0.33/μL的优势比为3.3（95% CI 1.6–7.2，p=0.008）。
**3. 升高的CSF白细胞计数更易通过DBS>250和无运动症状预测，而非HD-ISS分期**
当将CSF-LCmean与DBS作图时，可见在DBS 256–344之间出现峰值。按HDClarity方案分组（基于DBS≥250）能最好地识别高CSF-LC亚组，而按HD-ISS分期分组则未显示显著变异（Kruskal-Wallis p=0.245）。多数LpreHD参与者（57/88，65%）属于DBS 256–344的高LC亚组，但HD-ISS分期中0–2期与3期之间CSF-LCmean无显著差异。
**4. 升高的CSF白细胞与晚前驱期HD中更高的CSF-NFL水平相关**
在165名有CSF-NFL数据的参与者中，CSF-NFL水平从CP（947 ng/L）到EpreHD（1,522 ng/L）、LpreHD（4,304 ng/L）和mHD（7,315 ng/mL）依次升高。在LpreHD中，CSF-LCmean>0.33/μL的参与者CSF-NFL水平（4,825 ng/mL）显著高于≤0.33/μL者（3,642 ng/mL，p=0.037），而DBS在两组间无差异。
**5. 探索性分析提示特定细胞因子/趋化因子模式可能与晚前驱期HD的CSF白细胞升高相关**
对单中心队列的18种细胞因子/趋化因子分析显示：低IL-7、高VEGF和高CCL22可区分PwHD与CP；高IL-6/IL-15均值或高VEGF可区分LpreHD与EpreHD；低CCL2、CCL17和IL-8可区分LpreHD与mHD。连续应用这些模式，正确识别LpreHD的敏感性为75%（95% CI 41%–96%），特异性为90%（78%–96%）。
**讨论与结论**
研究讨论指出，CSF白细胞在晚前驱期HD短暂升高，与大多数随疾病进展而升高的炎症CSF标志物形成鲜明对比。这种峰值与CSF-NFL水平升高相关，提示炎症激活可能加剧神经退行性变。探索性分析发现的细胞因子/趋化因子模式（如低IL-7、高VEGF、高CCL22等）可能参与或反映了CSF白细胞的募集。这种短暂的鞘内免疫激活类似于晚前驱期遗传性阿尔茨海默病中sTREM2的峰值，且与HD中先天性和适应性免疫系统的激活一致。研究结论翻译如下：CSF白细胞在晚前驱期HD达到峰值，其与CSF-NFL升高相关，以及相应的阶段特异性趋化因子/细胞因子变化，表明HD中存在一个时间动态的、可能具有神经毒性的炎症信号网络。未来需通过更大队列和个体内纵向重复腰椎穿刺数据进一步验证这些发现。
