《Next Materials》：Target-oriented triazole-based hybrid scaffolds in drug discovery: Advances in molecular design, mechanistic insights and structure–activity relationships
含三唑杂环因独特的电子特性、代谢稳定性及与生物靶点形成多样非共价相互作用的能力，已成为药物化学中的优势骨架。近年来，研究人员围绕三唑基杂化分子开展大量工作，开发出兼具抗结核、抗菌、抗真菌、抗癌、神经保护及抗炎活性的多功能治疗药物。本综述系统梳理了苯并噻唑-三唑、三唑-苯乙酮、香豆素-三唑、吡唑-三唑、他克林-三唑及螺吲哚酮类三唑杂化骨架的合成方法、生物活性评价及构效关系（SAR）研究进展，重点阐述针对DprE1、CYP121、EGFR、CDK4/6、JNK3及乙酰胆碱酯酶（AChE）等关键靶点的定向设计策略。新兴构效关系趋势表明，骨架杂化、电子效应调控、亲脂性平衡及连接臂优化是决定化合物活性与选择性的核心要素。分子对接及机制研究进一步佐证了该类骨架的治疗潜力。综上，本综述凸显三唑杂化骨架作为下一代药物开发的通用平台价值，为理性设计新型三唑类治疗药物提供理论参考。
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Introduction
现代药物研发面临耐药性问题持续涌现及慢性与感染性疾病高发的双重挑战。抗菌耐药（AMR）、癌症、神经退行性疾病、代谢疾病及慢性炎症显著降低现有疗法的有效性，毒性、选择性差、疗程长及耐药快速发生是核心限制因素，推动研究人员探索具有更高 efficacy、安全性及靶点选择性的新型化学实体。感染性疾病中，结核分枝杆菌引发的结核病仍是全球重大公共卫生负担，耐多药（MDR）及广泛耐药（XDR）菌株的流行尤为突出，因此针对DprE1、KasA、CYP121等必需酶的新型抗结核药物研发成为研究热点。杂环化合物因结构多样性、优异理化性质及与广泛生物靶点相互作用的能力，成为药物化学中最重要的生物活性分子类别。其中，三唑类骨架因优异的电子特性、代谢稳定性、强氢键结合能力及合成多样性备受关注。1,2,3-三唑与1,2,4-三唑环作为高价值生物电子等排体，可增强受体结合亲和力、水溶性及药代动力学行为；其富氮芳香骨架还可介导π-π堆积、偶极相互作用及金属配位，是理性设计多功能治疗药物的理想药效团。临床已获批的氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑等抗真菌药均含1,2,4-三唑药效团，通过抑制真菌羊毛甾醇14α-脱甲基酶（CYP51）发挥作用；阿那曲唑、来曲唑等芳香化酶抑制剂也含三唑环，体现该骨架在抗真菌之外领域的广泛应用。现有三唑衍生物相关综述多聚焦单一疾病领域、骨架类别或合成策略，缺乏系统性靶点导向分析。本综述与现有研究的差异在于：按已验证生物靶点及治疗应用对三唑基杂化骨架进行分类，整合理性分子设计、合成策略、机制解析、构效关系、分子对接研究及ADMET导向优化，覆盖抗菌、抗真菌、抗结核、抗病毒、抗炎、抗癌、抗糖尿病、阿尔茨海默病等多治疗领域，为下一代三唑杂化治疗药物的理性设计提供综合参考。分子杂交策略通过整合三唑核心与苯并噻唑、香豆素、喹啉、螺吲哚酮、嘌呤等活性骨架，进一步提升三唑衍生物的治疗潜力，获得具有更高活性、选择性及改善药代动力学性质的多功能杂化分子。这类杂化分子已验证可抑制多个关键靶点：抗结核领域的DprE1、CYP121，抗癌领域的EGFR、CDK4/6、VEGFR2，抗真菌领域的CYP51，抗阿尔茨海默病领域的乙酰胆碱酯酶（AChE）、丁酰胆碱酯酶（BChE），以及抗菌领域的DNA旋转酶B等。研究证实，三唑杂化分子的生物活性受取代模式、连接臂结构、亲脂性及取代基电子性质显著影响，构效关系研究、分子对接及ADMET导向优化已大幅加速三唑类先导化合物的理性开发进程。
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Literature review
本综述通过系统性文献调研，批判性评估三唑基杂化骨架及其生物应用的最新进展。文献检索覆盖PubMed、Scopus、Web of Science、ScienceDirect及Google Scholar等核心数据库，时间范围为2010至2026年，检索词组合包括“三唑衍生物”“1,2,3-三唑杂化分子”“1,2,4-三唑化合物”“三唑抗结核药”“三唑抗菌活性”“分子杂交”“构效关系”，以及DprE1、CYP121、EGFR、CDK4/6、DNA旋转酶等靶点特异性术语，结合布尔运算符及数据库筛选功能优化检索结果。文献筛选首先通过标题与摘要初筛，再经全文评估确定纳入资格，纳入标准包括研究原创性、与三唑药物化学的相关性、合成方法可获取性、生物评价数据完整性及构效关系分析可用性，优先选择报道抗结核、抗菌、抗真菌、抗癌、神经保护或抗炎等实验验证活性的同行评审论文，排除综述、重复报道、缺乏生物验证及结构或药理学数据不完整的文献。数据提取聚焦合成路线、骨架分类、取代模式、MIC及IC50等生物活性参数、对应分子靶点及对接或计算研究推导的机制解析，同时纳入ADMET预测、毒性评价及体内研究结果以支撑转化价值。研究按骨架类型、治疗应用及靶点特异性分类，便于比较分析及识别药物化学趋势。构效关系分析通过关联化学修饰与生物活性响应开展，重点关注连接臂效应、取代基电子性质、亲脂性及杂化药效团设计，同时批判性考量不同研究的实验方案差异及活性报告偏差，最小化分析偏倚，为三唑类治疗药物的理性设计提供严谨均衡的进展梳理。
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Triazole-based hybrid derivatives: synthesis, biological evaluation, and structure–activity relationships
本节按已验证分子靶点系统梳理近年报道的三唑基杂化骨架，涵盖合成方法、生物评价、构效关系及治疗潜力。
3.1. Benzothiazinone-conjugated 1,2,4-triazole derivatives
研究人员于2021年报道了苯并噻嗪酮连接的1,2,4-三唑衍生物（5a–f及6a–f）的合成，采用烷基化、肼解、硫脲形成、环化及最终酰化的序列策略。苯并噻嗪酮首先与溴乙酸乙酯在K2CO3/丙酮条件下烷基化，经水合肼转化为酰肼，再与异硫氰酸酯反应后经碱介导环化得到三唑硫醇中间体（5a–f），最后与对硝基苯甲酰氯酰化得到终产物（6a–f）。针对结核分枝杆菌H37Rv的生物评价显示，三唑硫醇中间体（5a–f）的抗结核活性显著优于酰化衍生物（6a–f），其中5c（R=4-甲氧基苯基）与5e（R=4-氟苯基）活性最高（MIC=12.5μg/mL），表明给电子（4-OCH3）与吸电子（4-F）取代基均有利于活性；大位阻芳香取代基则降低活性，提示空间位阻对靶点结合不利。三唑硫醇骨架酰化后抗结核活性下降，说明位阻增加及电子性质改变会削弱配体-靶点相互作用。分子对接针对DprE1（PDB ID：4PFD）预测酰化衍生物（尤其是6a）具有良好结合亲和力，但与实验MIC值无相关性，凸显仅依赖对接评分预测活性的局限性。所有化合物对HEK293T细胞细胞毒性较低（CC50=129–171μg/mL），初步安全性良好。构效关系分析表明，1,2,4-三唑环是重要氢键受体，硫醇（-SH）基团为氢键供体；苯并噻嗪酮骨架提供疏水芳香框架增强配体-靶点相互作用；5c的对甲氧基改善电子性质，5e的对氟取代增强疏水及电子相互作用，共同贡献优异抗结核活性。
3.2. 1,2,3-Triazole–acetophenone derivatives
研究人员于2026年通过无催化剂[3+2]环加成策略合成1,2,3-三唑-苯乙酮衍生物（10a–f及12a–f）。取代α-溴苯乙酮首先转化为叠氮化合物，随后与丙炔酸或丙炔酸乙酯发生热环加成，区域选择性得到含羧酸（10系列）或乙酯（12系列）官能团的1,4-二取代三唑，该无金属 protocol 收率高达95%且官能团耐受性优异。针对结核分枝杆菌H37Ra的活性评价显示，乙酯衍生物的活性显著高于对应羧酸类似物，其中12b（Ar=4-F-Ph）、12d（Ar=4-CF3-Ph）及12e（Ar=萘基）活性最高（MIC≈2.6μg/mL），与利福平相当。构效关系表明，乙酯官能团通过提升亲脂性及促进膜渗透增强活性；吸电子取代基（氟、三氟甲基）通过有利电子效应提升活性；萘基的扩展芳香表面促进酶结合口袋内的疏水及π-π相互作用；羧酸衍生物因极性增加导致细胞摄取及靶点结合能力下降，活性显著降低。针对CYP121（PDB ID：4G2G）的分子对接结果与生物活性一致，活性化合物（12b、12d、12e）结合能（ΔG≈-6.5至-7.2kcal/mol）优异，与Gln385形成氢键、卤素相互作用及π-π堆积；IGMPlot分析进一步证实活性衍生物的非共价相互作用密度更高，支撑其增强的结合亲和力与抗结核活性。
3.3. Triazole–coumarin–thiazole hybrids
研究人员报道了三唑-香豆素-噻唑杂化分子（16a–k）的设计与合成，作为潜在抗结核药。合成策略采用CuSO4催化的点击环加成反应，2-叠氮基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺衍生物（15a–k）与4-(丙-2-炔-1-基氧基)-2H-色烯-2-酮（14）高效反应得到目标杂化分子，收率高且产物易分离；三唑连接臂的引入旨在增强分子柔性并优化靶点相互作用，结构经1H NMR及13C NMR确证。针对结核分枝杆菌的生物评价显示显著抗结核活性，16c（R1=H，R2=4-Cl-Ph）、16d（R1=H，R2=4-F-Ph）及16g（R1=H，R2=3-Br-Ph）为活性最高衍生物，MIC分别为7.81、2.61及7.81μg/mL，其中16d活性与标准抗结核药相当，同时化合物显示中等至优异抗氧化活性及低细胞毒性，治疗谱良好。分子对接研究进一步支持生物结果，16c、16d及16g对结核靶点（PDB：7M7V及4TZK）结合亲和力优异，对接评分-8.0至-9.7kcal/mol，提示配体-蛋白相互作用稳定。构效关系表明，香豆素、三唑及噻唑药效团的杂化增强抗结核活性；三唑连接臂为药效团单元提供最优空间排布；苯环卤素取代增强疏水相互作用；16d因有利电子分布及最优靶点结合表现出最高活性。
3.4. Triazole-conjugated 8-hydroxyquinoline benzothiazole–1,2,3-triazole hybrids
研究人员于2021年通过模块化策略合成三唑连接的杂化分子（22a–l），经O-烷基化及后续Cu(I)催化叠氮-炔环加成（CuAAC）实现。苯并噻唑中间体首先转化为叠氮化合物，随后与8-羟基喹啉或萘酚的端炔在CuSO4·5H2O/抗坏血酸钠、THF:H2O（8:2）、60°C条件下反应，收率良好。生物评价显示化合物对革兰阳性菌、革兰阴性菌及真菌菌株具有显著抗菌活性，其中22a（邻位取代，n=2，X=N）抗菌活性最高，对金黄色葡萄球菌抑菌圈（ZOI）17.6mm，对大肠杆菌ZOI17.2mm，与环丙沙星相当；抗真菌活性优异，对热带念珠菌ZOI33.7mm，对土曲霉ZOI30.8mm，优于氟康唑。构效关系分析表明，1,2,3-三唑环为重要氢键受体，促进与生物靶点的有利相互作用；苯并噻唑与8-羟基喹啉药效团提供扩展芳香框架，增强结合口袋内的疏水及π-π堆积相互作用；醚连接臂贡献构象柔性，使杂化骨架采取有利结合取向；22a的优异活性归因于较短连接臂（n=2）提供药效团基团的最优空间排布，而连接臂延长（n=3–4）因空间及构象效应降低活性，该结论与分子对接结果一致。
3.5. Benzimidazole?1,2,4-triazole hybrids
研究人员于2023年通过五步序列合成苯并咪唑-1,2,4-三唑杂化分子（31a–31h），包括微波辅助缩合构建苯并咪唑、肼解、硫脲形成、碱介导环化得到1,2,4-三唑-5-硫醇及最终与取代溴苯乙酮发生S-烷基化，该策略可在R1、R2、R3多位点实现结构多样化，收率74–82%。化合物针对热带利什曼原虫的抗利什曼活性评价采用XTT法，31f（R1=C2H5，R2=Br，R3=H）与31h（R1=C2H5，R2=OH，R3=OH）活性最高，1000μg/mL浓度下寄生虫活力降至20–29%；31d（R1=CH3，R2=OH，R3=OH）显示中等活性（IC50=239.03μg/mL）；31b、31c及31g无活性，表明活性高度依赖取代模式；参考药两性霉素B活性显著更高（IC50<0.49μg/mL）。构效关系表明，苯并咪唑与三唑环参与氢键及芳香相互作用，硫醚连接臂提供分子柔性；溴苯基取代增强疏水及卤键相互作用；31h的儿茶酚基团形成多重氢键，提升抗利什曼活性；缺乏此类官能团则导致活性丧失。
3.6. Triazole derivatives with medium and extended side chains
研究人员于2025年报道了含中等及扩展侧链1,2,4-三唑衍生物的模块化合成，以取代苯乙酮为起始原料，经1,2,4-三唑亲核取代、Corey–Chaykovsky环氧化、叠氮开环及Staudinger还原得到β-氨基醇中间体，再经酰胺偶联、酰化及后续官能化得到含酰胺、脲、硫脲、磺酰胺等不同连接臂的衍生物库（35、39、40、43、45a-b及47a-b）。针对白色念珠菌的生物评价显示多个衍生物抗真菌活性优异，其中45b与47b的MIC<0.03μg/mL，与氟康唑相当；扩展臂衍生物（尤其是45b与47b）对CYP51抑制活性强（IC50≈0.41–0.56μM），结合亲和力高。构效关系表明，三唑核是CYP51抑制的必需结构，优化的侧链结构增强酶结合口袋内的疏水相互作用；中等及扩展侧链提供抗真菌活性所需的构象柔性；连接臂性质对活性影响显著，活性顺序为酰胺>脲>硫脲>磺酰胺，表明酰胺连接臂提供最优几何构型及氢键结合能力；扩展侧链可改善CYP51通道内的结合，增加疏水相互作用；亲脂性提升通过增强膜渗透性促进靶点结合；47b对耐药真菌菌株仍保持活性，提示扩展臂设计可克服CYP51突变及外排泵介导的常见耐药机制。
3.7. 1,2,4-Triazole carboxamide hybrids
研究人员于2024年通过模块化路线合成1,2,4-三唑羧酰胺衍生物（52a–n、53a–j、54a–g），经Corey–Chaykovsky环氧化、三唑亲核开环、酯水解及最终酰胺偶联（EDCI/HOBt）实现，通过胺取代基的多样性引入获得目标化合物，收率中等至良好。针对多种植物病原真菌的生物评价显示多个化合物具有优异抗真菌及抗菌活性，其中54d（n=2，R=4-FC6H4）对苹果轮纹病菌抑制率92%，EC50=13.095μg/mL，优于商品化杀菌剂氯氟醚菌唑；53j（n=1，R=2-ClC6H4）对辣椒疫霉抗卵菌活性优异，EC50=17.362μg/mL，显著优于参考药。构效关系表明，吸电子取代基（Cl、Br、CF3）及最优连接臂长度增强抗真菌活性，过度位阻或极性则降低 efficacy；52系列活性普遍优于53及54系列，提示酰胺修饰及取代模式对生物活性有关键影响；分子对接研究证实活性化合物对真菌CYP51（14α-脱甲基酶）结合亲和力优异，与该三唑类抗真菌药的已知机制一致。
3.8. Phenolic acid–1,2,4-triazole derivatives as antifungal agents
研究人员于2023年通过三步路线合成酚酸基三唑衍生物（59a–c），经酚酯O-烷基化、1,2,4-三唑亲核取代及最终酯水解实现，乙烯连接臂的引入及三唑整合可在温和条件下高效构建杂化分子。针对多种植物病原真菌的生物评价显示，中间体（56a-c及58a-c）具有中等至强抗真菌活性，其中58a（R1=H，R2=H）对立枯丝核菌抑制率88.6%（200μg/mL）；59a对禾谷镰刀菌及松球壳菌活性增强，优于标准杀菌剂多菌灵。相比之下，水解产物（59a–c）的抗真菌活性较对应甲酯类似物（58a–c）显著降低，提示甲酯转化为羧酸因极性增加及膜渗透性下降对生物活性不利。构效关系表明，维持最优亲脂性及膜渗透性至关重要，含酯衍生物优于极性酸衍生物；三唑环通过作用于真菌麦角固醇生物合成相关的细胞色素P450酶进一步增强活性。
3.9. Tacrine–1,2,3-triazole hybrids
研究人员报道了新型1,2,3,4-四氢吖啶（他克林）基1,2,3-三唑杂化分子的设计与合成，作为靶向乙酰胆碱酯酶（AChE）、丁酰胆碱酯酶（BChE）及α-葡萄糖苷酶的多功能抑制剂。目标化合物通过Cu(I)催化叠氮-炔环加成（CuAAC）合成，C4官能化9-叠氮基四氢吖啶与系列取代苯乙炔（包括他克林基炔烃）反应，收率良好；该点击化学策略实现他克林药效团与1,2,3-三唑连接臂的高效分子杂交，旨在促进双靶点酶抑制。生物评价显示多个衍生物具有强效双胆碱酯酶抑制活性，优于他克林。68j、68g及65h的AChE抑制活性最强，IC50分别为120.67、121.02及128.12nM；65i、65h及68e的BChE抑制活性最高，IC50分别为130.21、130.45及124.94nM；68b还显示显著α-葡萄糖苷酶抑制活性（IC50=22.39μM），凸显多功能治疗潜力。分子对接研究支持实验结果，证实酶结合口袋内的有利双结合相互作用。构效关系分析表明，1,2,3,4-四氢吖啶核是强效胆碱酯酶抑制的必需结构，R2位芳甲基取代显著提升抑制活性；他克林核提供π-π堆积相互作用的疏水骨架，1,2,3-三唑环为靶点识别的关键氢键受体；腙连接臂维持分子平面性，取代芳香环通过疏水及电子效应调控活性；65i与65j的甲氧基取代贡献给电子性质，68e的扩展芳香体系增强疏水及π-π堆积相互作用；定量构效关系（QSAR）建模进一步佐证骨架结构及取代效应对生物活性调控的重要性。
3.10. Triazole–phosphazine hybrids
研究人员报道了新型三唑与磷嗪衍生物的设计与合成，作为阿尔茨海默病（AD）的多功能治疗候选物。合成策略构建结构多样的三唑衍生物，其中71a被确定为潜力候选物并开展生物研究，采用氯化铝诱导大鼠AD模型评价神经保护潜力，以利凡斯的明为参考药。生物评价显示显著神经保护及认知改善活性，71a在改善记忆及行为表现方面优于利凡斯的明；化合物显著降低Aβ1–42聚集，抑制活性氧（ROS）生成，抑制JNK/Puma介导的凋亡，增强Beclin-1表达，提示其调控氧化应激、凋亡及自噬通路。分子对接研究显示71a与JNK3活性位点结合相互作用强，分子动力学模拟证实配体-蛋白复合物稳定性；计算机模拟ADME分析进一步显示口服生物利用度良好、血脑屏障穿透性优异、无P-糖蛋白底物特征、CYP谱可接受，支持其类药性及中枢神经系统适用性。构效关系分析表明，三唑环介导氢键相互作用，磷嗪骨架提供JNK3抑制的刚性框架；合适芳香取代进一步改善疏水相互作用；71a的结构特征优化了JNK3结合及信号调控，是该系列最具潜力的先导化合物。
3.11. Ciprofloxacin?1,2,3-triazole-chalcone hybrids
研究人员于2022年合成1,2,3-三唑连接的环丙沙星-查尔酮杂化分子（77a–j），经重氮化/叠氮化、Claisen–Schmidt缩合、炔丙基化及Cu(I)催化叠氮-炔环加成（CuAAC）多步策略实现。杂化分子对人结肠癌细胞系（HCT116、HT-29及Caco-2）显示显著抗增殖活性，其中77j（R1=OMe，R2=H，R3=OMe）对HCT116细胞活性最高（IC50=2.53μg/mL），与多柔比星相当；77a、77b、77e及77i等衍生物也显示强细胞毒效应，尤其针对结肠癌细胞。构效关系分析表明，查尔酮部分为Michael受体，环丙沙星药效团贡献抗菌活性；氟取代提供有利电子效应，二甲氧基苯基环增强疏水相互作用，提升抗增殖活性。机制研究表明，该类杂化分子通过双重作用模式发挥活性：喹诺酮母核抑制拓扑异构酶I/II，查尔酮部分破坏微管聚合，导致DNA损伤（γH2AX诱导）及G2/M细胞周期阻滞；尽管体外活性优异，构效关系非线性，提示亲脂性及细胞渗透性等附加因素的影响。
3.12. Indolyl–1,2,4-triazole derivatives
吲哚基-1,2,4-三唑衍生物（83a–n）的合成经多步策略实现：以吲哚-3-羧酸乙酯为起始原料，经肼解、二硫代氨基甲酸酯形成（CS2/KOH）、环化得到4-氨基-1,2,4-三唑-5-硫醇，最终与芳香醛发生希夫碱缩合，高效构建生物活性吲哚-三唑骨架。生物评价显示化合物对CDK4及CDK6酶抑制活性强，IC50范围分别为0.049–3.031μM及0.075–1.11μM；83b、83k及83m的CDK4抑制活性强，83d及83h的CDK6抑制活性最高，优于参考药星形孢菌素。针对MCF-7及MDA-MB-231细胞系的抗增殖实验显示，83f及83g的细胞毒活性最高，IC50低至0.891μM，优于标准参考药；机制研究证实化合物诱导细胞周期阻滞（83f为S期，83g为G0/G1期）并触发凋亡，与CDK4/6抑制通路一致。构效关系分析表明，苄叉部分的给电子取代基（甲氧基、羟基）显著提升活性，大位阻或无取代衍生物则降低活性；最优取代改善激酶活性位点内的氢键结合及结合取向，过度位阻对相互作用不利；吲哚核为疏水及π-π堆积相互作用提供优势芳香药效团，1,2,4-三唑环为关键氢键受体，硫醇基团为氢键供体及潜在金属配位位点，亚胺连接臂维持分子平面性；83f的3,4-二甲氧基苯基通过给电子及疏水效应增强活性，83g的儿茶酚基团贡献额外氢键相互作用，强化靶点结合。
3.13. Gefitinib–1,2,3-triazole hybrids
研究人员于2024年通过多步策略设计合成吉非替尼基1,2,3-三唑衍生物（92a–t），经硝化、还原、喹唑啉酮形成、氯化及最终Cu(I)催化叠氮-炔环加成（CuAAC）实现；端炔的引入及点击化学实现喹唑啉骨架的高效后期多样化，以良好收率得到1,4-二取代三唑。生物评价显示多个衍生物对非小细胞肺癌的抗增殖活性优于吉非替尼，其中92a（R=4-溴-2-氟苯基）及92j（R=4-氯苯基）在多个癌细胞系中活性最高。机制研究揭示化合物通过下调Bcl-2、Caspase-9及MMP9，上调Cleaved-Caspase-3及PARP诱导凋亡，抑制肿瘤细胞增殖与迁移，证实三唑修饰可增强吉非替尼骨架的EGFR靶向抗癌活性。构效关系分析表明，三唑连接取代基调控EGFR活性位点内的结合相互作用，提升活性；点击化学策略可精细调控电子及空间性质，是优化激酶抑制的关键；喹唑啉核为ATP结合位点识别的必需药效团，1,2,3-三唑环为靶点识别的关键氢键受体，苯胺NH提供额外氢键相互作用，吗啉环增强水溶性及药代动力学性质；92a的溴/氟取代及92j的氯取代贡献有利电子效应、疏水相互作用及潜在卤键，提升结合亲和力。
3.14. Spirooxindole–1,2,3-triazole hybrids
研究人员报道了螺吲哚酮-1,2,3-三唑杂化分子的合成：三聚氯氰与NaN3（水溶液）在丙酮、0°C条件下反应得到叠氮中间体，经MeOH/NaHCO3（室温，1h）取代后，与NuH（NaHCO3，丙酮，室温，4h）发生亲核取代得到中间体95a–b，再与二酮96在DMF、TEA条件下室温反应2–3h得到终产物97a–b。生物评价显示化合物对多种癌细胞系具有抗增殖活性，97a（Nu=OCH3）及97b（Nu=哌啶基）活性优异，机制研究证实其通过抑制关键激酶通路及诱导凋亡发挥抗癌作用，螺吲哚酮骨架的刚性三维结构及三唑连接臂的柔性为靶点结合提供有利空间排布，哌啶基取代通过增强水溶性及与靶点极性氨基酸的氢键相互作用提升活性，甲氧基取代则通过疏水效应及电子调控优化结合亲和力。
